黄翠芬
- 作品数：337 被引量：972H指数：14
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>
- 构建动物模型的方法、由该方法获得的非人转基因动物的体细胞及其用途
- 本发明提供了一种肝细胞癌小鼠模型，以及构建该小鼠模型的方法，它包括以下步骤：1.将外源目的基因插入携带靶位点同源序列的适宜载体中，构建出重组的打靶载体；2.将步骤1的打靶载体转化所研究动物的ES细胞，从中获得外源基因定位...
- 杨晓王友亮崔芳吕娅歆黄翠芬
- 文献传递
- 幼畜大肠菌腹泻基因工程多价疫苗被引量：4
- 1997年
- 我国是畜牧业大国,猪、牛、羊等是主要经济家畜。腹泻是影响畜牧业发展的重要疫病,因肠毒素性大肠杆菌引起的新生幼畜腹泻发病率高达30％—80％,死亡率达10％—30％,严重影响幼畜的成活和发育,每年要为此蒙受巨大的经济损失。幼畜腹泻的药物治疗不但价格昂贵、费力费工,而且效果不好;更因致病菌抗药菌株日趋增多,用药往往无效,因而免疫预防是最佳选择。
- 陈添弥黄翠芬
- 关键词：基因工程疫苗仔猪腹泻犊牛羔羊幼畜
- 以融合蛋白形式在大肠杆菌中表达人MCP－1被引量：2
- 1995年
- 将编码人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体ｐＥＸ３１Ａ中，在大肠杆菌中表达出ＭＳ２／ＭＣＰ－１融合蛋０白，该表达产物约占菌体总蛋白的１５％左右，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明，表达产物可与ＭＣＰ－１抗体特异反应。采用琼脂糖平板法进行活性测定表明，表达产物具有明显的单核细胞趋化活性，说明Ｎ端融合一段细菌蛋白对ＭＣＰ－１有无趋化活性可能没有影响。
- 叶棋浓苏国富徐永强黄翠芬
- 关键词：单核细胞趋化蛋白-1融合蛋白基因表达
- 抑瘤素M cDNA的克隆及表达
- 1996年
- 抑瘤素M(Oncostatin M,OSM)是一种多功能的细胞生长调节因子。从PMA刺激后的U937细胞系提取总RNA,采用逆转录-PCR方法分离到了抑瘤素M的cDNA;将抑瘤素M的cDNA克隆到质粒pUC19中,筛选3个阳性克隆进行序列分析,与国外报道序列完全一致;将抑瘤素M的cDNA克隆到质粒pBV220后再转化大肠杆菌DH5α进行模拟表达,SDS-PAGB分析表明有OSM表达,表达量约占细菌总蛋白的5％;经过初步纯化的OSM能明显抑制A375细胞的生长。
- 段海清张兆山董自正曹勇黄翠芬
- 关键词：抑瘤素M基因表达活性测定
- 痢疾志贺氏Ⅰ型菌毒素基因的克隆与表达被引量：1
- 1991年
- 从痢疾志贺氏Ⅰ型菌 W30864株中提取染色体 DNA,用 EcoRI 完全酶解,电泳回收3—7kb 的片段,与载体 pUC19质粒连接重组,用大肠杆菌痢疾样毒素(SLT)基因探针进行筛选,得到了阳性重组子。实验表明志贺氏毒素基因是位于约4.5kb 的 EcoRl 片段上,包含毒素的 A 亚单位基因和 B 亚单位基因。在对克隆株的毒性测定中,采用 Hela-S3细胞试验,证明所产生的痢疾毒素具有杀死细胞的能力。此毒素可引起肠积水和充血,可使小鼠肢体麻痹并致死,克隆重组株的痢疾毒素产量是亲本野生株 W30864的16倍。此外,实验中还对克隆株和产生 SLT 的菌株的毒素产量做了比较。
- 李丰生黄培堂芮贤良黄翠芬
- 关键词：痢疾志贺氏菌毒素基因克隆
- 胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠的建立及鉴定(英文)被引量：21
- 2002年
- 组织特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠是进行组织特异性基因剔除研究的重要工具。为了建立胰腺组织特异性Cre转基因小鼠 ,我们通过PCR克隆了大鼠胰岛素基因启动子 ,并用它指导Cre基因在胰岛细胞中的特异性表达。在Cre重组酶基因 5′端添加了真核核糖体结合序列和核定位序列以使Cre重组酶能穿越核膜在细胞核中发挥功能 ;同时 ,在Cre基因 3′端添加了含内含子的 3′端人生长激素基因。表达载体经显微注射导入小鼠受精卵以建立转基因小鼠。PCR检测显示共获得 7只Cre整合阳性的转基因首建者小鼠 ;RT PCR结果表明其中 1只首建者小鼠的子代鼠在胰腺中转录了外源基因 ,进一步的Southern杂交结果表明 。
- 周江程萱吕娅歆黄翠芬杨晓
- 关键词：胰腺组织CRE重组酶转基因小鼠
- 组织型纤溶酶原激活剂（t－PA）cDNA序列的测定
- 1995年
- 已经从ｍｅｌａｎｏｍａ细胞系中成功地获得了人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ，在此基础上用双脱氧终止法测定了ｔ－ＰＡｃＤＮＡ编码区全序列及３′非编码区部分序列，并发现与Ｐｅｎｎｉｃａ等发表的ｔ－ＰＡｃＤＮＡ序列相比，有两处差异，其一是第１７２５位核苷酸残基为Ｃ而非Ａ，并使此处序列与Ｐｅｎｎｉｃａ序列相比新产生一个ＳｔｙＩ切点，但由于差异发生在密码子第三位，没有引起编码的氨基酸变化；其二是第１７７７位核苷酸残基（终止密码子后第４位核苷酸残基）为Ｔ而非Ｇ，使与终止密码子相隔３个核苷酸残基处产生了一个新的ＴＧＡ，与Ｐｅｎｎｉｃａ序列相比此处的ＢｓｔＮＩ切点也消失了。
- 刘士辉黄培堂黄翠芬
- 关键词：组织型纤溶酶原激活剂CDNA
- 肠毒素大肠杆菌CFA/1重组质粒的高效表达及其结构与功能分析
- 1995年
- 肠毒素大肠杆菌(ETEC)是婴幼儿腹泻和旅游者腹泻的重要致病菌。每年因 ETEC引起腹泻而死亡的婴幼儿多达百万人。ETEC 腹泻主要是由于细菌通过菌体表面定居因子定居于宿主小肠上皮细胞上,然后大量繁殖产生肠毒素而引起的。定居因子抗原1(CFA/1)是一种优势血清型菌毛,其相应抗体在阻止病原菌在宿主小肠上定居起十分重要的作用。CFA/1基因位于60MDa 的质粒上,在此质粒上有两个区域为 CFA/1表达和菌毛装配所必需。含有 CFA/1结构基因的区域称之 CFA/1-1区,含有调节基因的区域称之 CFA/1-2区。由于 CFA/1-1区和CFA/1—2区相距25MDa。
- 张兆山李淑琴黄翠芬陈添弥
- 关键词：结构基因小肠上皮细胞调节基因旅游者腹泻优势血清型
- 不同型Gsα基因缺失体在大肠杆菌中的克隆与表达
- 2000年
- 在人类的一些肿瘤中已发现存在Gsα基因突变。本研究室在白血病细胞系的研究中发现了Gsα基因的 3个缺失突变体以及野生型的Gsα(分别命名为GsαL 1,5 0 0bp ;GsαL 2 ,30 0bp ;GsαL 3,2 0 0bp和Gsα 4 ,12 0 0bp) ,并已在一些急性白血病患者中检测到。为进一步研究这些缺失体的结构、功能和生物学意义 ,作者将克隆了GsαL 1,GsαL 2和Gsα 4基因的质粒分别转化到大肠杆菌DH5α中 ,提取DNA ,采用特异引物进行PCR扩增 ,获得相应的目的基因 ,分别将其克隆到 pET2 2b(+ )表达载体上 ,再转化大肠杆菌进行表达。经培养 ,取菌体行SDS PAGE电泳分析。研究结果 :3个基因都有相应分子量的蛋白表达 ,且均以包涵体形式存在。这表明构建的这 3个基因确具完整的基因结构 ,及相应的蛋白表达。
- 楼金星黄君健司艺玲李杰之赵亚力叶棋浓黄翠芬
- 关键词：基因克隆基因表达白血病
- 应用体内诱导抗原技术筛选结核分枝杆菌体内表达基因被引量：17
- 2005年
- 为寻找新型抗结核药物靶标 ,采用体内诱导抗原技术筛选结核分枝杆菌的体内诱导基因。首先构建了结核分枝杆菌基因组质粒表达文库 ,库容量为 1 0 2× 1 0 5CFU。再用经过结核分枝杆菌和大肠杆菌的裂解产物吸附过的结核病人血清 ,通过原位免疫印迹来筛选基因组表达文库 ,共获得 1 6个阳性克隆。对阳性克隆进行测序和生物信息学分析 ,发现该 1 6个阳性克隆可能包含 2 2个开放阅读框 (ORF)。按照功能将其分为 7类基因 :脂类代谢 2个、信号途径 5个、PE/PPE蛋白家族 2个、中间产物与能量代谢 6个、细胞壁与细胞处理 1个、假想蛋白 4个和与牛型分枝杆菌定向进化同源的 2个 ,其中部分基因可能与毒力相关 。
- 李霆高志勇王恒冯尔玲陈宗德李新月黄留玉黄翠芬
- 关键词：结核分枝杆菌药物靶标毒力
