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全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白在毕赤酵母中的表达及其活性被引量：4: 2013年; 目的在毕赤酵母中表达全长甲状旁腺激素(Parathyroid hormone,PTH)(1-34)与人血清白蛋白(Human serumalbumn,HSA)的融合蛋白PTH(1-34)-HSA,并检测其活性。方法在质粒pPIC9K-PTH(1-34)2-HSA的基础上设计引物,引入6His标签及肠激酶酶切位点,从该质粒中扩增6His-EK-PTH(1-34)-HSA基因,插入pPIC9K载体中,构建重组表达质粒pPIC9K-6His-EK-PTH(1-34)-HSA,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达;表达的6His-PTH(1-34)-HSA融合蛋白通过两步亲和层析纯化和肠激酶酶切,获得全长的PTH(1-34)-HSA融合蛋白;检测融合蛋白对UAMS-32P成骨细胞增殖活力、碱性磷酸酶活性以及RANKL和OPG基因转录水平的影响。结果重组表达质粒经测序证实构建正确;表达的6His-PTH(1-34)-HSA融合蛋白相对分子质量约70 000,可与PTH抗体和HSA抗体特异性结合,发酵获得的融合蛋白的浓度为200 mg/L;纯化的融合蛋白可与抗PTH、HSA和6His标签抗体特异性结合,经肠激酶酶切后,该蛋白失去了与6His抗体反应的能力,保持了与PTH和HSA抗体结合的能力;酶切后的全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白保持了PTH的生物活性,能促进UAMS-32P成骨细胞的增殖活力,提高细胞的碱性磷酸酶的活性,上调细胞RANKL基因的转录水平以及抑制OPG基因的转录水平。结论成功在毕赤酵母中表达了全长PTH(1-34)-HSA融合蛋白,有望提高PTH的成药性。; 李俊毅彭林唐存多邬敏辰金坚; 关键词：人血清白蛋白融合蛋白组氨酸标签肠激酶

液体发酵条件对灵芝菌体形态及胞外多糖活性的影响被引量：16: 2014年; 作者主要研究灵芝在液体发酵过程中,发酵时间、初始p H值、培养温度等发酵条件对灵芝菌体形态、胞外多糖产量及多糖抗肿瘤活性的影响,其目的在于通过调控发酵条件获得高活性、高产量的灵芝多糖。依据灵芝菌球直径的大小,所有菌球被分为小型、中型和大型菌球,结果表明,发酵过程中菌体形态以中型菌球为主,在中小型菌球比例较高时有利于胞外多糖的合成,并且小型菌球比例大于大型菌球时,发酵液中多糖含量较高;在比较不同发酵条件下获得的胞外多糖对肿瘤细胞抑制作用时发现,p H 4.0和30℃条件下获得的多糖对小鼠肝癌细胞Hepa 1-6和人乳腺癌细胞MDA-MB-231具有更高的抑制作用。; 乔双逵彭林丁重阳顾正华张梁石贵阳; 关键词：灵芝液体发酵胞外多糖菌体形态抗肿瘤活性

凝血因子Ⅶ高表达细胞的高通量筛选方法被引量：1: 2018年; 针对哺乳动物细胞表达克隆的耗时较长的筛选过程,作者通过流式细胞仪对细胞进行快速筛选和纯度检测。利用流式细胞仪对电转细胞进行分选,利用点杂交和western blot方法筛选高表达克隆。流式细胞仪分选后的细胞,经点杂交和WB检测后获得的CHO-r FVII-1细胞,表达r FVII细胞的比例为99.9%,同时与传统筛选方法获得的CHO-r FVII克隆比较后发现,两株细胞具有相同的r FVII产量。作者基于流式细胞仪建立了快速筛选高表达重组药物蛋白克隆的筛选的高通量方法和纯度检测的方法,为其他在哺乳动物细胞中表达重组蛋白的筛选提供参考。; 彭林李成媛熊文典蔡燕飞金坚李华钟; 关键词：高通量中国仓鼠卵巢细胞流式细胞仪重组蛋白

重组凝血因子Ⅶ表达和合成机制的研究进展被引量：2: 2015年; 血友病是由于人体内缺乏相应凝血因子造成的凝血障碍,目前主要利用基因重组技术在不同细胞中表达重组凝血因子Ⅶ(Ⅶ因子)从而对血友患者出血进行治疗。为有效提高重组Ⅶ因子的产量及活性,已有研究者尝试利用不同真核表达系统合成重组Ⅶ因子,如BHK细胞、CHO细胞、昆虫细胞和鱼胚胎等。同时,不同外源功能性基因对重组Ⅶ因子活性和翻译后修饰对表达产量的影响也通过不同方法进行探究。本文从Ⅶ因子在凝血途径中的作用、重组表达重组Ⅶ因子和翻译后修饰对合成的影响3个方面对重组Ⅶ因子表达和合成机制研究进行了综述。; 彭林于笑蔡燕飞金坚李华钟; 关键词：血友病凝血机制哺乳动物细胞翻译后修饰

人血清白蛋白-白介素-2融合蛋白在CHO细胞中的表达: 2017年; 白细胞介素-2在人体免疫应答中具有重要作用,常用于治疗肿瘤、肝炎和免疫缺陷性疾病等多种疾病,但因其体内半衰期短而限制了其临床应用。文中构建了含有融合蛋白基因HSA-IL-2的p MH3质粒,并通过电转染的方法转入中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO细胞)中,利用p MH3质粒所携带的neo基因进行筛选,经96孔板培养并筛选得到稳定表达目的蛋白质的重组细胞,融合蛋白HSA-IL-2表达量达到2.26 mg/L。利用反转录PCR和Western blot对重组细胞鉴定后发现,融合蛋白编码基因整合入重组CHO细胞基因组中,而且融合蛋白同时具有HSA和IL-2双重免疫原性。利用对IL-2具有依赖性的CTLL-2细胞进行活性分析后发现,筛选得到的表达细胞分泌得到的融合蛋白具有较高的生物活性,表明成功构建具有表达IL-2生物活性能力的CHO细胞。; 卢慧惠彭林段作营蔡燕飞金坚李华钟; 关键词：人血清白蛋白融合蛋白中国仓鼠卵巢细胞

基于抑制非酶糖基化效果的金耳液体发酵被引量：1: 2013年; 非酶糖基化是引起糖尿病并发症的主要因素之一,因此抑制非酶糖基化反应成为控制糖尿病并发症的重要手段。作者以抑制非酶糖基化反应活性为指标,对金耳液体发酵培养基和发酵条件进行了优化。培养基经正交实验优化后,最优培养基组成为:葡萄糖10 g/L,蛋白胨5 g/L,玉米粉20 g/L,麸皮15 g/L,CoCl20.5 g/L,MnSO40.5 g/L。最适发酵条件为:培养温度25℃,培养基初始pH 6.5,500 mL三角瓶装液量150 mL,接种体积分数10%。经发酵条件优化后,金耳发酵液对非酶糖基化抑制率达89.74%。在对金耳发酵液活性物质分析中发现,金耳发酵液对非酶糖基化的抑制作用是由金耳多糖及其它小相对分子质量物质共同作用的结果。; 郑俊丽陶冠军彭林丁重阳顾正华张梁石贵阳; 关键词：金耳非酶糖基化液体发酵

阿魏蘑液体发酵过程菌体形态变化对产漆酶的影响被引量：2: 2013年; 本文旨在研究阿魏蘑菌体形态与漆酶产量之间的关系。结果显示，玻璃珠的添加可改变发酵过程中菌体形态，漆酶产量在球状菌体条件下高于丝状、絮状菌丝：直径分布在0．2～0．4mm范围的菌球对漆酶的合成具有明显的促进作用；适合的葡萄糖、玉米粉和麸皮添加量，对直径在0．2～0．4mm范围的菌球形成具有重要影响。此外，添加惰性载体同样可以控制菌球的直径分布，但对漆酶的合成无促进作用。; 陈友枝王璐彭林丁重阳张梁顾正华石贵阳章克昌; 关键词：阿魏蘑漆酶液体发酵

阿魏菇与胶红酵母共培养产漆酶对活性艳蓝W-RV的脱色被引量：2: 2015年; 利用阿魏菇与胶红酵母共培养所产漆酶对染料活性艳蓝W-RV进行脱色,同时考察不同p H、温度、染料浓度和漆酶酶活等条件对脱色的影响。结果显示,酸性范围内的p H有利于活性艳蓝W-RV的脱色,较高温度并不适于脱色反应。在研究不同染料浓度的影响时发现,不同浓度染料的脱色率在7 h反应后都达到了稳定,而漆酶酶活在达到200 U/L后脱色率不再变化。因此,最终得到的最适反应条件为p H 4.5、30℃、染料质量浓度100 mg/L、漆酶酶活200 U/L,在此条件下,活性艳蓝W-RV的最高脱色率为89.91%。; 王寒彭林丁重阳顾正华张梁石贵阳; 关键词：漆酶阿魏菇脱色

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彭林

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