张培峰
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠GLUT3基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的构建携带大鼠葡萄糖转运体3(GLUT3)基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,为研究GLUT3的生物学功能提供工具。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT3基因全长cDNA片段,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-GLUT3,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-GLUT3,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印记法(westernblot)的方法从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒。结果经DNA测序和PCR分析显示GLUT3cDNA序列正确。成功筛选出重组腺病毒质粒pAd-GLUT3后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及westernblot检测表明重组腺病毒包装成功。结论本研究成功构建了携带大鼠GLUT3基因的复制缺陷型重组腺病毒载体。
- 李方成李军亮吴中华张培峰黄文林刘然义
- 关键词：基因克隆重组腺病毒
- 大鼠GLUT1真核表达载体的构建及其在293细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的:构建大鼠葡萄糖转运体1(GLUT1)的真核表达载体。方法:以RT-PCR方法从大鼠脑组织中 获取GLUT1全长cDNA片段,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3．1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3．1(+)- Glutl,随后用lipofectamineTM2000介导转染HEK293细胞,以RT-PCR法检测重组质粒在mRNA水平的表达,以免疫 组化的方法检测重组质粒在蛋白水平的表达。结果:以构建的重组真核表达质粒pcDNA3．1(+)-Glutl转染293细 胞后,在基因及蛋白表达水平均检测到了葡萄糖转运体1的表达。结论:成功构建了携带大鼠葡萄糖转运体1的真 核表达载体pcDNA3．1(+)-Glutl,且证实其可在293细胞中成功表达目的基因,为进一步研究外源性GLUT1表达对 缺血缺氧脑细胞的保护作用奠定了基础。
- 李方成李军亮刘然义吴中华张培峰刘安民
- 关键词：葡萄糖转运体1真核表达脑缺血293细胞免疫组织化学
- 大鼠葡萄糖转运体3真核表达载体的构建及其在293细胞中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的构建大鼠葡萄糖转运体3(GLUT3)的真核表达载体,为进一步研究葡萄糖转运体3对缺血缺氧脑细胞的保护作用奠定基础。方法以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法从大鼠脑组织中获取GLUT3全长cDNA片段,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3．1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3．1(+)-Glut3,随后用LipofectarnineTM 2000介导转染HEK293细胞,以 RT-PCR的方法检测重组质粒在mRNA水平的表达,以免疫组织化学的方法检测重组质粒在蛋白水平的表达。结果克隆的大鼠GLUT3全长cDNA大小约1．5 kb且无碱基突变,以构建的重组真核表达质粒pcDNA3．1(+)-Glut3转染293细胞后,在基因及蛋白表达水平均检测到了葡萄糖转运体3的表达。结论成功构建了携带大鼠葡萄糖转运体3的真核表达载体pcDNA3．1(+)-Glut3, 且证实其可在293细胞中成功表达目的基因。
- 李方成李军亮刘然义吴中华张培峰
- 关键词：葡萄糖转运体真核表达脑缺血
- 大鼠GLUT1基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建被引量：2
- 2006年
- 目的:构建携带大鼠葡萄糖转运体1基因(GLUT1)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡机制奠定基础。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT1基因全长cDNA,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-G lut1,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-G lut1,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在HEK293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印迹法(W estern b lotting)从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒。结果:经PCR分析及DNA测序显示GLUT1 cDNA序列正确;筛选出重组腺病毒质粒pAd-G lut1后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及W estern b lotting检测表明重组腺病毒包装成功。结论:成功扩增了大鼠GLUT1基因并构建了携带大鼠GLUT1基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,这有助于研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡的机制。
- 李方成李军亮梁伟强刘然义吴中华张培峰袁开长
- 关键词：葡萄糖转运体1基因扩增重组腺病毒载体
