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李方成: 作品数：74 被引量：251H指数：8; 供职机构：中山大学附属第二医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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胶原酶诱导不同部位脑出血大鼠模型的神经功能比较被引量：6: 2008年; 目的观察胶原酶诱导纹状体和内囊部位脑出血模型的行为学和神经纤维损伤差异。方法利用立体定向技术，将一定量的Ⅳ型胶原酶用微量进样器分别精确注入大鼠纹状体和内囊诱导脑出血模型，观察两组大鼠的运动功能差异，并进行大体形态学和神经纤维受损程度的比较。结果内囊组大鼠的运动功能受损程度明显重于纹状体组大鼠，前者的神经纤维破坏程度显著重于后者。结论不同部位的脑出血模型的神经损害程度存在差异，内囊区脑出血模型更适合于研究神经纤维的损伤机制及神经纤维的再生和修复。; 刘安民罗铭金华伟潘伟生朱献伦李方成黄正松; 关键词：脑出血胶原酶

光动力法制备DC胶质瘤疫苗抗肿瘤作用的研究: 2007年; 目的:研究光动力法(photodynamic therapy,PDT)处理后,用酸洗法获取C6胶质瘤细胞的抗原肽,制备树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗,诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)在体外杀伤C6细胞的活性,以及PDT对C6胶质瘤细胞免疫原性的直接影响。方法:自大鼠骨髓分离DC前体细胞于体外诱导、扩增获得成熟DC。C6细胞经PDT处理后,对尚贴壁的细胞以酸洗法获取其表面抗原,从上清液中提取全细胞抗原,未作PDT处理的C6细胞以酸洗或冻融法提取抗原。分别以这4种抗原致敏DC,制成DC疫苗接种SD大鼠后,取脾作CTL的体外杀伤活性测定。结果:用PDT处理后酸洗法获得的抗原刺激DC成熟的能力最强,它制备的DC疫苗诱导的CTL的体外杀伤率最高,为(95.5±1.6)%,而光照后上清组为(90.2±2.4)%,酸洗组为(73.3±2.7)%,冻融组为(63.6±4.9)%,PBS对照组为0。结论:PDT能直接增强肿瘤细胞的免疫原性,用酸洗法获取PDT处理后的肿瘤细胞的抗原肽制备DC疫苗是一种有前景的新方法。; 袁士翔李方成周何军孙希阴慧娟; 关键词：光化学疗法癌症疫苗树突细胞

逆转录病毒介导的Flt-1M基因对大鼠胶质瘤的治疗作用: 2003年; 目的观察Flt-1M基因治疗对大鼠胶质瘤血管形成及肿瘤生长的影响。方法将转染了pLXSN-Flt-1M的产病毒细胞注入大鼠额叶胶质瘤瘤体内。随后处死动物,检测肿瘤的直径、微血管密度及凋亡细胞。结果肿瘤的微血管密度和直径都较对照组明显降低,而凋亡细胞则显著增多。结论Flt-1M基因治疗对大鼠胶质瘤具有显著的抗血管形成和抗肿瘤生长作用。; 金必连李方成刘斌李龄; 关键词：胶质瘤血管形成

胶质瘤细胞的生长速度与葡萄糖摄取的关系被引量：2: 2003年; 目的　探讨胶质瘤细胞的生长速度与葡萄糖转运系统的关系。方法　用C6细胞克隆培养得到不同细胞形态、不同生长速率的细胞株。Northernblot和Westernblot检测生长最慢的C61细胞和最快的C64 细胞葡萄糖转运体 1(GLUT1)mRNA表达及其蛋白水平 ;同时检测其葡萄糖摄取率。结果　C6胶质瘤细胞克隆培养产生C61、C62 、C63 、C64 4种细胞 ,4种细胞的生长速度不同 ,C64 细胞的生长速度约为C61细胞的 8倍。C6胶质瘤细胞的克隆细胞株主要表达GLUT1,C64 细胞比C61细胞的GLUT1mRNA水平明显增加 ,条带的吸光度分析显示C64 细胞的GLUT1蛋白水平约为C61细胞的 3倍 [(3 10± 2 1) % ,P <0 .0 0 1]。葡萄糖摄取率以每分钟液闪次数计 :C64 细胞 (7680± 180 ) /min·10 4cells ;C61细胞 (3 0 0 0± 12 5 ) /min·10 4cells ,C64 细胞约为C61细胞的2 .5倍。结论　葡萄糖转运系统与葡萄糖摄取相匹配 ,与胶质瘤细胞的生长密切相关。; 李方成余进陶宗玉李军亮林吉惠; 关键词：胶质瘤细胞葡萄糖脑胶质瘤

颅眶及球后眶内肿瘤手术治疗:附16例临床分析被引量：1: 2005年; 背景和目的:颅眶区解剖复杂,有许多孔隙、开口与颅内、眶内相通。由于肿瘤邻近重要的颅神经和血管,手术切除和重建颅底往往困难。本文探讨经颅入路切除颅眶沟通性肿瘤和球后眶内肿瘤的手术方法。方法:回顾性分析16例经颅入路手术切除的颅眶沟通性肿瘤和球后眶内肿瘤的临床资料,分别采用经额经眶上缘入路和经眶上-翼点入路进行。结果:全切除肿瘤14例,次全切除2例。手术后患眼失明1例,动眼神经麻痹2例,无手术死亡,手术效果满意。结论:经颅入路切除颅眶沟通性肿瘤和球后眶内肿瘤时,根据肿瘤所在眶内的位置选择恰当的手术入路是手术成功的前提,合理的手术方式和熟练的手术技巧是提高全切率、减少并发症的关键。; 刘安民李方成邓跃飞蔡望青钟志光钟伟健吴中耀; 关键词：颅眶沟通性肿瘤手术治疗

大鼠GLUT3基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：3: 2006年; 目的构建携带大鼠葡萄糖转运体3(GLUT3)基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,为研究GLUT3的生物学功能提供工具。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT3基因全长cDNA片段,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-GLUT3,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-GLUT3,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印记法(westernblot)的方法从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒。结果经DNA测序和PCR分析显示GLUT3cDNA序列正确。成功筛选出重组腺病毒质粒pAd-GLUT3后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及westernblot检测表明重组腺病毒包装成功。结论本研究成功构建了携带大鼠GLUT3基因的复制缺陷型重组腺病毒载体。; 李方成李军亮吴中华张培峰黄文林刘然义; 关键词：基因克隆重组腺病毒

重组人肝细胞生长因子在人脐带间质干细胞中高效表达被引量：6: 2008年; 目的:构建能表达人肝细胞生长因子(hHGF)的pWPI-hHGF载体,并将含hHGF基因的重组慢病毒载体转染人脐带间质干细胞(hUCMSCs),观察人脐带间质干细胞中hHGF的表达情况。方法:将携带目的基因hHGF的pUC-SRα/hHGF质粒亚克隆到真核细胞表达载体pWPI载体上,构建重组质粒pWPI-hHGF。基因测序进行HGF的鉴定。用磷酸钙沉淀法,将pWPI-hHGF、pAX2、pMD2G共同转染包装细胞293T细胞,获得携带目的基因hHGF和GFP基因的重组慢病毒pWPI-hHGF。将pWPI-hHGF及阳性对照质粒pWPI-GFP分别用Lipo-fectamin 2000介导转染体外培养的hUCMSCs。在荧光显微镜下计数,确定阳性对照质粒的转染数,从而估计该基因的转染效率。蛋白印迹法检测HGF和GFP蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液hHGF含量。结果:DNA测序显示hHGF基因成功地插入到pWPI载体中。包装细胞293T转导pWPI-HGF质粒后,转染阳性率达100%。阳性对照质粒转染人脐带间质干细胞24 h后,在荧光显微镜下观察,其转染效率达80%以上。蛋白印迹法检测靶细胞中hHGF表达呈强阳性,而对照组表达量极低,两者差异显著(P<0.01)。检测收集转染hHGF后的人间质干细胞上清液中hHGF的表达含量明显高于对照组(P<0.01)。结论:构建的在真核细胞内表达hHGF的重组质粒pWPI-hHGF转染人脐带间质干细胞,能获得hHGF基因在人脐带间质干细胞中大量、稳定的表达。; 刘安民罗铭李国蔡望青李方成邓跃飞潘伟生; 关键词：肝细胞生长因子慢病毒载体脐带间质干细胞基因表达

葡萄糖转运体在脑胶质瘤中的表达及其意义被引量：1: 2003年; 目的观察葡萄糖转运体(GLUT1、GLUT3)在脑胶质瘤中的表达及其意义。方法应用 Northern blot技术检测不同级别脑胶质瘤葡萄糖转运体 mRNA表达情况,用 Western blot检测葡萄糖转运体的蛋白水平。结果 Ⅰ/Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤GLUT1 mRNA/肌动蛋白(actin)mRNA分别为0.12、0.17、0.21;4.2 kb GLUT3 mRNA/actin mRNA分别为0.178.0568、0.710;2.7kb GLUT3 mRNA/actin mRNA分别为0.075、0.216、0406。随着脑胶质瘤分级的增高,GLUT1/actin 转录物比率有随之增加的趋势,但无显著相关。4.2 kb GLUT3是2种转录物中丰度较高的一种,2种转录物的 GLUT3/actin比率与胶质瘤的分级呈线性正相关。结论恶性胶质瘤细胞可能分泌某种因子增强 GLUTs mRNA表达,但抑制 GLUT1 mRNA翻译而促进 GLUT3蛋白表达,使GLUT3成为供应恶性胶质细胞能量代谢底物的主要载体。; 郭希高李方成容耔耘苏杭陈建民李子坚郭希高; 关键词：脑胶质瘤葡萄糖转运体基因表达 MRNA 预后

异丙酚预先给药对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织葡萄糖转运体-3表达的影响被引量：3: 2006年; 目的研究异丙酚预先给药对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织葡萄糖转运体-3(GLUT3)表达的影响。方法健康雄性SD大鼠90只,体重290-310 g,随机分成3组:假手术组(S组,n=6)、生理盐水组(NS组,n=42)、异丙酚组(P组,n=42)。NS、P组采用线栓法阻断大脑中动脉1 h行再灌注,制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,P组在缺血前10 min腹腔注射异丙酚10 mg／100 g,NS组给予等量生理盐水,S组只作切口,不行缺血。NS、P组分别在再灌注即刻、2 h、5 h、11 h、23 h、71 h、1周各处死6只大鼠,S组于实验11 h处死大鼠,断头取脑,计算脑梗塞体积比,用RT-PCR法测定GLUT3 mRNA表达水平,用免疫组织化学法测定GLUT3蛋白表达水平。结果NS组及P组再灌注期脑梗塞体积比、GLUT3 mRNA及GLUT3蛋白表达均高于S组,与NS组比较,P组脑梗塞体积比降低,脑组织GLUT3 mRNA及GLUT3蛋白表达升高(P<0．05)。结论异丙酚预先给药可上调脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织GLUT3的表达,可能是其减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的机制之一。; 叶西就李方成曹德雄曹明辉陶宗玉彭书崚; 关键词：二异丙酚单糖转运蛋白质类再灌注损伤

脑立体定向多靶点毁损术治疗精神分裂症: 2010年; 目的探讨脑立体定向多靶点毁损术治疗精神分裂症的疗效。方法对精神分裂症患者行双侧扣带回、内囊前肢及杏仁核毁损术,并随访观察疗效。结果本组无围手术期死亡病例发生,术后发生并发症如下:①毁损灶出血8例,标准嗜睡和偏瘫,术后2周均吸收。②膀胱功能障碍,表现为尿失禁,其中1周内42例尿失禁症状自动消失,4例1个月内症状消失。③偏瘫8例,术后CT,MRI证实为基底节缺血性改变,扩张血管治疗后均恢复正常。术后随访1年,有效为43.5%,显效为42.5%,无效为14%。随访二年,有效为35.0%,显效为43.8%,无效为21.2%。结论脑立体定向多靶点毁损术治疗精神分裂症有一定的临床治疗效果,术后需适当服药及心理治疗。; 陈志平李方成唐运林刘伟钦何启明; 关键词：脑立体定向多靶点毁损术精神分裂症

李方成

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