张严峻
- 作品数：162 被引量：888H指数：15
- 供职机构：浙江省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金国家科技重大专项浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测志贺氏菌被引量：7
- 2016年
- 【目的】将环介导等温扩增技术（LAMP）与横向流动试纸条（LFD）联合应用,建立一种可应用于志贺氏菌快速检测的LAMP-LFD技术。【方法】以福氏志贺氏菌的侵袭性质粒抗原H（ipa H）基因为检测靶标设计3对特异性引物（其中上游内引物Sfl-ipa H-FIP由生物素标记）,进行LAMP反应;同时设计1条异硫氰酸荧光素（FITC）标记的探针Sfl-ipa H-HP,与获得的LAMP产物进行特异性杂交,杂交产物经LFD完成检测。【结果】优化后的LAMP反应条件为63℃ 40 min,加上LFD结果判读共需50 min。LAMP-LFD方法能够特异性检测出福氏志贺氏菌,而对肠炎沙门氏菌等其它4种导致腹泻的致病菌和创伤弧菌等5种常见食物源性致病菌,以及4株不同大肠杆菌的检测结果呈阴性。该方法针对福氏志贺氏菌的检测灵敏度为1.0×10^2 CFU/m L或4 CFU/反应,针对人工污染鲤鱼肠组织的检测灵敏度是5.0×10^2 CFU/m L,是以LAMP外引物Sfl-ipa H-F3/Sfl-ipa H-B3的常规PCR方法的100倍。【结论】建立的LAMP-LFD技术具有操作简单、检测快速准确、检测成本低等优点,有望在志贺氏菌的常规监测和即时检测中被普及使用。
- 李尚阳周前进张严峻潘军航陈炯
- 关键词：志贺氏菌环介导等温扩增技术
- 甲3型流感病毒的环介导等温扩增检测试剂盒及检测方法
- 本发明提供了一种甲3型流感病毒的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)检测方法。所述方法为：根据甲3型流感病毒血凝素基因设计特异性引物序列，提取待测样品R...
- 卢亦愚严菊英陈寅徐昌平姜晓慧李榛张严峻
- 文献传递
- 多重荧光PCR结合Allglo探针技术检测艰难梭菌相关毒素基因被引量：12
- 2014年
- 目的采用多重荧光PCR结合Allglo探针技术，建立一种快速、特异、灵敏的鉴定艰难梭菌相关毒素基因的方法，并对浙江杭州地区腹泻患者的产毒型艰难梭菌感染现状进行调查研究。方法应用型研究。针对艰难梭菌毒素tcdA和tcdB基因设计引物和相应的Allglo探针，优化PCR扩增体系，并评价其特异性、灵敏度、重复性。收集2012年8至12月杭州市第一人民医院的门诊腹泻患者粪便标本共180份，对粪便中携带tcdA和tcdB基因的产毒型艰难梭菌进行鉴定，同时通过对tcdA和tcdB基因直接测序进一步验证荧光PCR检测结果的可靠性。结果本试验建立的结合Allglo探针的多重荧光PCR方法可同时、准确、特异地鉴定艰难梭菌tcdA和tcdB基因，灵敏度可达10CFU／mI。定量检测tcdA基因的循环阈值（Ct）值变异系数分别为2．30％、0．42％、0．81％，检测tcdB基因的ct值变异系数分别为1．91％、1．02％、1．18％，均小于5％。在180份腹泻粪便样本中，检测m26份阳性样本，阳性率为14．4％，其中tcdA和tcdB毒素基因均阳性的样本为23份（23／26，88．5％），仅tcdA毒素基因阳性的样本为2份（2／26，7．7％）；仅tcdB毒素基因阳性的样本为1份（1／26，3．8％）。同时，采用直接测序方法对样本进行扩增检测和序列比对，与荧光定量PCR结果完全一致。结果显示浙江杭州地区腹泻患者感染的产毒型艰难梭菌以同时携带tcdA和tcdB毒素基因的菌株为主。结论本研究建立的Allglo探针的多重荧光PCR方法可用于临床上快速、准确地检测产毒型艰难梭菌。
- 金大智罗芸罗丽张政叶菊莲张严峻吴方方小飞李辉王贤军
- 关键词：梭菌细菌毒素类肠毒素类细胞毒素类
- 浙江省传染性非典型肺炎冠状病毒分离株ZJ01的细胞病变与增殖滴度
- 2005年
- 目的 观察分离自浙江省 1例早期SARS患者的病毒ZJ0 1株在Vero、Vero E6及RD细胞上进行适应 ,以及在上述几种细胞中ZJ0 1株的增殖滴度。方法 病毒增殖采用观察细胞病变及荧光染色法进行。结果 证实ZJ0 1病毒株对Vero、Vero E6及RD等细胞均敏感 ,但在几种细胞中的增殖滴度有较大的差别 ,其中以Vero E6感染滴度最高可达 10 6.0～ 7.0 ,Vero和RD细胞的增殖滴度在 10 3 0～ 4.0 。结论 本文认为SARS病毒ZJ0 1株对上述细胞均敏感 ,其中以Vero E6细胞滴度最高。
- 翁景清卢亦愚严菊英李敏红程苏云史雯龚黎明姚苹苹朱函坪陆群英葛琼冯燕谢荣辉茅海燕李婵梅玲玲张严峻汤鋆赵芝雅朱智勇
- 关键词：SARS冠状病毒细胞病变
- 生物反应器扩增流感病毒H1N1的优化工艺方法
- 本发明公开了一种生物反应器扩增流感病毒H1N1的优化工艺方法。该方法用聚纤维纸片（Fibra disk）载体和生物反应器系统扩增犬肾上皮细胞（MDCK）从而建立流感病毒复制扩增的整套工艺流程。本发明建立在对H1N1型流感...
- 李兰娟陈科达余东山吴晓鑫张严峻欧会林
- 文献传递
- 新型布尼亚病毒荧光定量检测试剂盒及该病毒的检测方法
- 本发明涉及新型布尼亚病毒核酸荧光定量RT-PCR检测试剂盒及新型布尼亚病毒检测方法。目的是提供的试剂盒应使用方便、检测准确，检测方法应检测准确性高、检测效率高。技术方案是：一种新型布尼亚病毒荧光定量RT-PCR检测试剂盒...
- 张严峻张磊严杰
- 文献传递
- 金黄色葡萄球菌食品和病人分离株肠毒素基因和耐药性比较被引量：31
- 2008年
- 目的:对金黄色葡萄球菌食品(不含生牛奶)分离株和病人分离株的肠毒素基因进行分型和耐药性检测,比较两种分离菌株的肠毒素基因分布和耐药性差异。方法:用国标方法分离鉴定金黄色葡萄球菌,VITEK32生化验证,PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素基因(肠毒素SEA-SEJ基因),VITEK32测定分离菌株抗生素的耐药性。结果:从病人分离的80株金黄色葡萄球菌检测到9种基因。肠毒素基因携带率为85.0%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占76.3%,含传统肠毒素基因(SEA-SEE)的菌株占43.8%,有新发现肠毒素基因(SEG-SEJ)的菌株占71.3%。从食品中分离的51株金黄色葡萄球菌检测到7种肠毒素基因。肠毒素基因携带率为68.7%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株占21.6%。有SEA基因的占27.5%,含其它传统的毒素基因类型(SEB-SEE)基因的菌株占23.5%,携带新发现的毒素基因SEG、SEH、SEI的菌株只占9.8%。金黄色葡萄球菌病人分离株与食品分离株的耐药谱和耐药率有较大差异。结论:金黄色葡萄球菌食品分离株和病人分离株的肠毒素基因分布不同,其耐药性有明显区别。
- 张严峻王志刚程苏云朱敏张俊彦
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素耐药性
- 家蚕核多角体病毒感染与昆虫围食膜
- 该文应用电子显微镜技术观察了家蚕核多角体病毒入侵中肠细胞及其感染途径,还观察了五龄起蚕围食膜的形态结构,以及低温和各种酶处理后围食膜形态的变化.同时应用生化技术初步分析了围食膜蛋白质的种类,测定了蛋白质和糖的含量,及用各...
- 张严峻
- 关键词：家蚕核多角体病毒围食膜酶处理
- 肠道病毒EV71荧光定量RT-PCR法快速检测被引量：9
- 2009年
- 严菊英卢亦愚徐昌平龚黎明葛琼李榛陈寅张严峻
- 关键词：手足口病肠道病毒荧光定量RT-PCR
- 食品中单增李斯特菌血清型及耐药性监测被引量：17
- 2008年
- 潘军航梅玲玲张严峻汪炜朱敏潘雪霞张俊彦
- 关键词：单增李斯特菌耐药性监测各类食品血清型散装熟肉制品病致病菌
