左泽华
- 作品数：13 被引量：23H指数：3
- 供职机构：武汉大学基础医学院病原生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- siRNA对HeLa细胞膀胱癌相关蛋白基因表达的抑制作用被引量：2
- 2011年
- 目的:构建抑癌基因膀胱癌相关蛋白(BLCAP)基因高效真核siRNA载体,转染人宫颈癌细胞系HeLa,构建BLCAP基因沉默细胞系,以观察靶向siRNA对BLCAP基因的表达抑制作用。方法:设计并重组靶向siRNA各3条,分别命名为pRNA-U6.1-B1,B2,B3-siRNA,重组体经脂质体转染细胞,通过荧光显微镜观察细胞内质粒表达情况,并采用RT-PCR和Western blot方法检测转染前后BLCAP基因mRNA及蛋白的表达,验证RNAi作用的特异性及时效性。结果:同对照组相比,各BLCAP siRNA均可引起靶基因表达水平的显著性下降(P<0.05),尤以pRNA-U6.1-B2-siRNA的作用效果最强(P<0.01);而空脂质体组及阴性对照siRNA组的靶基因表达水平则无明显变化。将pRNA-U6.1-B2-siRNA转染细胞后12,24,48h均可观察到靶基因表达的显著性降低(P<0.05),其中在24h后达到最强抑制效果。结论:不同序列的siRNA,对靶基因的干扰效率不同;BLCAP基因siR-NA能够特异、高效性的抑制靶基因的表达;抑制作用在24h达到高峰,并可维持到转染后48h。试验结果为进一步研究采用RNA干扰技术进行宫颈癌的生物治疗奠定了基础。
- 左泽华张力伍欣星赵旻
- 关键词：宫颈癌SIRNABLCAP基因
- 膀胱癌相关蛋白基因对HeLa细胞增殖的抑制作用被引量：8
- 2006年
- 背景与目的:通过癌基因与抑癌基因的基因分类表达芯片筛选发现,在宫颈癌组织中,膀胱癌相关蛋白基因(bladdercancerrelatedprotein,BLCAP)表达降低最为明显。提示该基因可能与宫颈癌发生相关。本研究旨在探讨该基因对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。方法:用RT-PCR法检测54例宫颈癌组织和25正常宫颈组织中BLCAP基因的表达情况。制备BLCAP全长cDNA并克隆到真核表达载体pLXSN上,稳定转染至宫颈癌细胞系HeLa中,细胞计数方法和克隆形成实验观察稳定转染BLCAP基因的HeLa细胞的细胞形态、细胞增殖及集落形成能力;利用DNAladder检测BLCAP基因引起HeLa细胞凋亡情况;裸鼠体内抑瘤实验观察BLCAP基因的抑瘤作用。结果:BLCAP在宫颈癌组织中不表达或低表达,与正常宫颈组织相比明显降低;转染BLCAP基因的HeLa细胞倍增时间为69.4h,较未转染HeLa细胞(27.5h)和转染空载体的HeLa细胞(30.2h)明显延长,差异有显著性(P﹤0.05);细胞同步对比实验显示,转染BLCAP基因的HeLa细胞的克隆形成率明显低于未转染HeLa细胞(t=5.98,P<0.01)和转染空载体的HeLa细胞(t=4.69,P﹤0.01);HeLa细胞在转染BLCAP基因后出现了DNA梯形条带。将转染BLCAP基因的HeLa细胞、转染空载体的HeLa细胞和未转染的HeLa细胞分别注射入BALB/c裸鼠体内,30天后处死动物,剥离肿瘤组织并称重,各组平均瘤重分别为1.015g、1.612g和1.530g,转染BLCAP基因的细胞抑瘤能力与两对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。肿瘤病理切片结果显示,稳定转染BLCAP基因的HeLa细胞所成肿瘤组织,癌组织被纤维组织包裹,边缘整齐,未侵犯肌层和脂肪组织,部分癌巢边缘癌细胞可见散在类似凋亡细胞的细胞群。而未转染质粒组及转染空载体pLXSN质粒组所成肿瘤组织癌组织突破肌层呈浸润性生长,癌巢边缘癌细胞病理性核分裂像多见。结论:BLCAP基因在宫颈癌组织中表达下调,对HeLa细胞的增殖具有
- 左泽华赵旻刘娟魏芸伍欣星
- 关键词：宫颈肿瘤HELA细胞抑癌基因
- CDC 25A和CDC 25B基因在宫颈癌中的表达和临床意义被引量：4
- 2008年
- 目的：检测及讨论CDC 25A和CDC 25B基因在宫颈癌中的表达水平及其临床意义。分析CDC 25A和CDC 25B基因剪切变异分子CDC 25A1—2、CDC 2581—4在宫颈组织中的表达分布规律。方法：采用RT—PCR和Western印迹法检测61例宫颈癌组织、18例宫颈良性病变组织中CDC 25的表达情况，并分析CDC 25的表达水平与宫颈癌临床病理参数之间的关系。结果：CDC 25A和CDC 25B基因在宫颈癌组织和宫颈良性病变组织中的表达差异有统计学意义（P〈0．05）；CDC 25的各剪切变异分子表达在宫颈癌患者不同年龄、癌组织病理类型、临床分期及癌细胞分化程度间差异有统计学意义（P〈0．05），而与宫颈癌的淋巴结转移无关（P〉0．05）。结论：宫颈癌组织中存在CDC 25A和B的高表达，CDC 25分子及其剪切变异体的表达异常可能是宫颈癌发生、发展的重要细胞内调控机制之一。
- 赵旻左泽华邱小萍谭云魏芸伍欣星
- 关键词：宫颈肿瘤基因表达
- 湖北土家族人群HLA-A、B等位基因及单倍型多态性的分布被引量：4
- 2006年
- 目的研究湖北五峰县土家族190名无亲缘关系健康个体HLA-A、B等位基因及单倍型频率的分布,为进一步研究HLA基因多态性与疾病的关联奠定基础。方法采用序列分型(sequence-basedtyping,SBT)法对最具多态性的HLA-A、B基因2、3外显子进行了基因型分析,采用Arlequin软件对群体基因、单倍型频率进行最大估计值的计算。结果HLA-A、B等位基因符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0·05),无显著的连锁不平衡现象,共检测出26个HLA-A等位基因及41个HLA-B等位基因,其中频率最高的为A*0201(0.16053),A*110101(0.14737),A*24020101(0.14211),B*4001(0.14737),B*4601(0·13947),其次为A*0207(0.08947),A*0206(0.08158),B*1301(0.07632),B*5801(0.08947),B*1501(0·09737),而大于0.05%的为A*330301(0.05526),B*1502(0.05526),B*3501(0.05263),单倍型分布较普遍的为A*0202-B*4001(0.04196),A*0201-B*4601(0.03625)。结论采用高分辨测序分型法对土家族人群HLA-A、B等位基因进行分型的实验结果可做为湖北土家族人HLA-A、B等位基因、单倍型频率的群体资料,对进一步开展群体遗传学、临床器官移植、疾病关联、HLA遗传学特征、法医学、人类学等研究具有重要意义。
- 邱小萍谭云左泽华魏芸伍欣星
- 关键词：土家族人白细胞抗原单倍型遗传多态性
- pEGFP-HPV16 E7重组融合蛋白质粒的构建及其表达被引量：1
- 2003年
- 应用基因重组技术,构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)与人乳头瘤病毒16型E7(HPV16E7)的重组融合表达质粒,经限制性内切酶酶切鉴定和PCR分析后,用基因转染技术将其导入小鼠肝癌细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的表达。酶切鉴定和PCR分析证实重组质粒中插入目的基因片段的大小、方向和插入位点均正确,在转染的小鼠肝癌细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达。构建的pEGFP-HPV16E7融合表达质粒能直观地反映转染细胞中EGFP-HPV16E7融合蛋白的表达。由于转化率与表达率融为一体,故有利于对转染细胞的筛选,缩短转染细胞在体外的筛选的时间适用于对HPV16E7分子生物学特性、致瘤机理及APC提呈等的研究。为建立表达HPV16E7的实体瘤动物模型奠定了基础。
- 左泽华李辉伍欣星
- 关键词：人乳头瘤病毒基因转染真核表达
- 宫颈癌细胞中HMAT1基因的功能预测及其干扰小RNA的筛选被引量：1
- 2005年
- 目的 预测宫颈癌细胞中人类与鼠同源乳腺转化基因(HMATI)的功能及筛选出能有效沉默该基因的干扰小RNA。方法 采用细胞原癌基因、抑癌基因分类芯片对原发性宫颈癌标本进行筛选,通过生物信息学分析HMAT1 基因,针对HMAT1基因设计了三条特异性干扰小RNA,分别与pRNAU6.1 Hygro重组后,与含有该基因的重组体瞬时共转染B16F0细胞,用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术检测对HMAT1基因的干扰效果。结果 细胞原癌基因、抑癌基因分类芯片筛选出表达量明显上调的基因共四条。对其中上调明显的HMAT1基因,通过生物信息学预测其为一个调节细胞生长的看家基因,其编码的蛋白质为一个Ⅰ型跨膜蛋白,且其酪氨酸蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点可能与HMAT1 蛋白功能活化有关。半定量检测结果表明其中第一条特异性干扰小RNA有显著性抑制效果(P<0.05)。结论 初步预测HMAT1 基因很可能是与宫颈癌相关的癌基因,其编码的蛋白质可能参与细胞的信号转导,设计出针对该基因的干扰小RNA可以有效沉默HMAT1基因。
- 欧璇赵旻左泽华李辉魏芸伍欣星
- 关键词：宫颈肿瘤RNA干扰
- 宫颈癌差异表达新基因抑癌功能及机制的研究
- 宫颈癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一。尽管高危型人乳头瘤病毒的感染是导致宫颈癌发生的重要危险因素，然而，和其他肿瘤一样，宫颈癌的发生和发展也是一个多因素、多步骤的复杂过程。其病因和发病机制并未完全了解。我科室利用基因表...
- 左泽华
- 关键词：宫颈癌病理机制
- 文献传递
- siRNA抑制eIF4E基因的表达对卵巢癌A2780细胞生物学行为的影响被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因在卵巢癌细胞生长增殖、迁移侵袭以及对顺铂敏感性中的作用。方法:采用eIF4E基因的特异shRNA表达质粒转染卵巢癌A2780细胞,通过siRNA抑制eIF4E的表达,采用real time-PCR和Western印迹法检测siRNA对eIF4EmRNA和蛋白表达水平的抑制作用,优化转染作用条件。进而分析eIF4E敲降后,A2780细胞生物学行为的变化。结果:特定的siRNA对eIF4E基因的表达有显著的抑制作用;eIF4E敲降后,与对照组比较,A2780细胞的增殖明显受到抑制(P<0.05),对顺铂的敏感性明显增强;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验发现A2780细胞的运动侵袭能力显著下降(P<0.05);细胞周期分析发现A2780细胞S期细胞比例略有下降,G1期细胞比例略有上升,但无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制eIF4E基因的表达,可以显著抑制卵巢癌细胞增殖、抑制细胞的迁移侵袭能力,增强细胞对顺铂敏感性。上述结果为卵巢癌的分子机制及顺铂敏感性的研究提供了新依据;也为卵巢癌的临床治疗提供了新靶点基因。
- 石芳徐战战左泽华赵旻
- 关键词：卵巢癌SIRNA
- 宫颈癌相关新基因的筛选、克隆及鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:筛选、克隆及鉴定宫颈癌相关基因———BLCAP。方法:利用基因芯片技术对1例原发性宫颈癌患者的癌组织及其癌旁正常组织进行分析;将在宫颈癌组织中表达显著降低的BLCAP基因克隆到pET-28(a)表达载体上,以构建原核表达重组质粒pET-28(a)-BLCAP,通过PCR、限制性内切酶酶切和DNA测序等技术鉴定阳性重组子。结果:通过基因芯片分析发现存在表达差异的原癌和抑癌基因共11条,其中表达降低最明显的是BLCAP基因。构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,即BLCAP基因共264 bp,基因序列无改变,基因插入后阅读框(ORF)正确。结论:筛选出了在宫颈癌中表达显著降低的BLCAP基因并成功构建了pET-28(a)-BLCAP原核表达质粒,为表达BLCAP目的蛋白及研究该蛋白的性质奠定了基础。
- 解庭波左泽华彭敏许蓓妮赵旻伍欣星
- 关键词：宫颈癌BLCAP基因克隆
- 人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白在HeLa细胞中的表达及亚细胞定位被引量：1
- 2007年
- 目的构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)-人乳头瘤病毒16型变异株E7(HPV16-HBE7)重组质粒pEGFP-HBE7,研究HPV16-HBE7蛋白亚细胞定位,为进一步了解其生物学功能奠定基础。方法采用分子克隆技术,将HPV16-HBE7基因克隆在pEGFP-C1表达载体上,用脂质体法导入宫颈癌细胞中;West-ern印迹检测HBE7蛋白的表达;同时借助免疫荧光技术和EGFP-融合蛋白技术,采用激光共聚焦显微镜观察HBE7蛋白的亚细胞定位。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定,其目的片段大小、插入位点和核苷酸序列完全正确;结果表明,转染细胞HBE7蛋白的相对表达量其胞浆明显多于胞核;各个时间段HBE7蛋白均以胞浆分布为主,绿色荧光密集点状分布于细胞浆内,而野生株E7(WE7)蛋白分布在核内。结论人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白主要分布在细胞浆内,以胞浆为主的分布可能和HBE7基因发生突变后丢失核定位信号有关。
- 刘金花俞娟许蓓妮姚军左泽华赵旻伍欣星
- 关键词：人乳头瘤病毒亚细胞定位核定位信号激光共聚焦
