安然
- 作品数：21 被引量：23H指数：3
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金霍英东青年教师基金安徽省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学环境科学与工程理学更多>>
- 与14-3-3ζ相互作用的蛋白Polo样激酶1的筛选与鉴定
- 2012年
- 目的:应用酵母双杂交系统筛选与14-3-3ζ相互作用的蛋白,进一步鉴定其与Polo样激酶1(Plk1)相互作用。方法:构建pGBKT7-14-3-3ζ诱饵表达载体,筛选HeLa细胞cDNA文库中与14-3-3ζ相互作用蛋白,进一步通过共转酵母、免疫荧光以及外源性和内源性的细胞免疫共沉淀实验验证两者的相互作用。结果:通过酵母双杂交系统筛选出的阳性相互作用蛋白中包括Plk1,进一步通过共转酵母,外源性和内源性的细胞免疫共沉淀实验证实两者的相互作用,免疫荧光实验证实两者共定位于有丝分裂过程中胞质分裂期的中体。结论:Plk1是高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在中体的成熟,有丝分裂期染色体的分离,胞质分裂以及DNA的损伤应答等环节发挥重要作用,其与14-3-3ζ的相互作用为14-3-3蛋白家族参与有丝分裂(M期)的调控提供了直接证据。
- 都建程里陈立建陈滢安然
- 关键词：POLO样激酶1酵母双杂交蛋白质相互作用有丝分裂
- 浅谈医学院校生物化学与分子生物学实验室安全管理被引量：2
- 2017年
- 高校生物化学与分子生物学实验室是高校进行科学研究、实践教学的重要场所,在教学和科研中需运用大量仪器设备和试剂药品,因此,实验室的安全管理尤其重要,本文针对本校生物化学与分子生物学实验室,指出存在的安全隐患并提出对策,为实验教学的有效进行提供参考。
- 安然都建
- 关键词：生物化学与分子生物学实验室安全隐患安全管理
- 一种预防弓形虫病的ME49Δcdpk3减毒活疫苗及其制备方法和应用
- 本发明涉及弓形虫疫苗技术领域，具体来说是一种用于预防弓形虫病的ME49Δcdpk3减毒活疫苗，减毒活疫苗是通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术在ME49上敲除CDPK3构建的ME49Δcdpk3虫株，减毒活疫的制...
- 都建吴敏敏蔡海建安然陈滢周南
- 文献传递
- 一种预防弓形虫病的ME49Δcdpk3减毒活疫苗及其制备方法和应用
- 本发明涉及弓形虫疫苗技术领域，具体来说是一种用于预防弓形虫病的ME49Δcdpk3减毒活疫苗，减毒活疫苗是通过CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术在ME49上敲除CDPK3构建的ME49Δcdpk3虫株，减毒活疫的制...
- 都建吴敏敏蔡海建安然陈滢周南
- 阻塞性黄疸肝损伤及慢性肝病患者血清肝活素水平测定的临床意义
- 目的： 探究肝活素（HPS）在阻塞性黄疸所致肝损伤的诊断以及慢性肝病肝功能评估中的作用。 方法： 随机选择60例阻塞性黄疸患者、68例慢性肝病患者及30例健康体检者，ELISA法测定其血清HPS水平，丙氨酸氨基转移...
- 安然
- 关键词：阻塞性黄疸肝损伤慢性肝病肝功能评估
- 弓形虫感染可能引起“路怒”被引量：1
- 2018年
- 路怒症是一种汽车综合症,在一些不文明驾驶行为时,驾驶员由于开车压力和挫折感而导致的愤怒情绪,路怒的出现会引起交通事故,给社会带来不稳定因素。弓形虫是重要的食源性寄生虫之一,严重危害人类身体健康,弓形虫偏向损害中枢神经系统,与成年人一系列神经精神症状(特别是精神分裂症)密切相关,而间歇性暴发性障碍(IED)的精神疾病患者存在突发性的攻击冲动,包括容易"路怒"。因此本文综述弓形虫感染与路怒的关系。
- 李厚都安然
- 关键词：弓形虫精神分裂症中枢神经系统
- 刚地弓形虫巨噬细胞迁移抑制因子基因敲除虫株的构建与鉴定被引量：1
- 2022年
- 目的构建并鉴定刚地弓形虫RH株巨噬细胞迁移抑制因子(Tgmif)基因敲除虫株。方法设计刚地弓形虫RH株Tgmif的单向导RNA(sgRNA)和点突变引物,将pSAG1::Cas9-U6::sgUPRT质粒定点突变为针对Tgmif基因的pSAG1::Cas9-U6::sg Tgmif质粒。构建含有Tgmif上游1001 bp(Tgmif-up)、二氢叶酸还原酶-胸苷酸合成酶基因(dhfr-ts)和Tgmif下游1011 bp(Tgmif-down)等3个片段的Tgmif供体质粒,从Tgmif供体质粒PCR扩增获得Tgmif供体DNA。将pSAG1::Cas9-U6::sg Tgmif质粒和Tgmif供体DNA混合后电击转染野生型刚地弓形虫RH株(RH_(WT))速殖子,用乙胺嘧啶培养7 d,筛选获得稳定表达乙胺嘧啶抗性的虫株并进行单克隆筛选,PCR扩增dhfr-ts上、下游同源臂和Tgmif鉴定Tgmif基因敲除单克隆株(RH_(ΔTgmif))。提取RH_(ΔTgmif)和RH_(WT)株虫体蛋白,蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析TgMIF蛋白的表达情况。RH_(ΔTgmif)在人包皮成纤维(HFF)细胞中传代10代,吉氏染色,镜检计数100个HFF中速殖子数,评估RH_(ΔTgmif)在体外培养HFF细胞中的增殖能力,以RH_(WT)为对照。将20只BABL/c小鼠随机分为RH_(WT)组和RH_(ΔTgmif)组(10只/组),各组分别腹腔注射RH_(WT)或RH_(ΔTgmif)株速殖子(1000个/鼠),记录小鼠生存情况。弓形虫增殖能力的比较采用独立样本t检验,小鼠生存率的比较采用Log Rank检验。结果PCR检测结果显示,含Tgmif-up、dhfr-ts和Tgmif-down等3个片段的Tgmif供体DNA片段长5049 bp,与预期相符;RH_(ΔTgmif)株分别扩增出1387、1524 bp的dhfr-ts上、下游同源臂条带,RH_(WT)株无相应条带;RH_(WT)株扩增出1837 bp的Tgmif条带,RH_(ΔTgmif)株无相应条带。Western blotting分析结果显示,RH_(WT)株在相对分子质量(M_(r))12500处出现1条蛋白条带,RH_(ΔTgmif)株无相应的蛋白条带。吉氏染色镜检结果显示,100个HFF中RH_(ΔTgmif)株速殖子为(2986±69.20)个,高于RH_(WT)株的(2067±51.08)个(t=18.50,P<0.01)。体内毒力试验结果显示,RH_(WT)组小鼠在第7天出
- 王杰温红阳陈滢安然罗庆礼沈继龙都建
- 关键词：刚地弓形虫巨噬细胞迁移抑制因子基因敲除
- 弓形虫毒力因子ROP18激酶的致病分子机制研究
- 背景: 弓形虫是一种专性细胞内寄生虫,可以感染几乎所有的温血动物,会引起世界范围内传播的人兽共患病。免疫功能正常人群感染弓形虫不会出现明显症状,但免疫功能低下或缺陷者感染弓形虫则会引发严重的并发症,目前弓形虫感染已经成...
- 安然
- 关键词：弓形虫致病机制
- 文献传递
- 高表达毒力因子ROP18的转基因刚地弓形虫株的建立及鉴定
- 2015年
- 目的构建并鉴定高表达毒力因子ROP18的转基因刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)虫株。方法 RTPCR扩增刚地弓形虫RH株速殖子的ROP18基因片段。将纯化的PCR产物克隆至p CR-BluntⅡ-Topo载体构建p ROP18质粒,PCR扩增ROP18基因序列。将纯化的PCR产物亚克隆至p TUB8-myc GFPPftail-Ty1载体,构建p TUB8-ROP18-Ty1质粒。将质粒电穿孔转染刚地弓形虫RH株,刚地弓形虫悬液转移到长有贴壁细胞的培养瓶中培养,用含25μg/ml霉酚酸和50μg/ml黄嘌呤的DMEM培养基筛选高表达ROP18的刚地弓形虫RH株。免疫荧光和蛋白质印迹(Western blotting)检测ROP18在转基因刚地弓形虫株中的表达。吉氏染色比较弓形虫RH株和高表达ROP18的转基因RH株弓形虫分别感染人包皮成纤维细胞(HFF细胞)的增殖情况。20只昆明小鼠均分为2组,每鼠分别腹腔内注射1×103高表达ROP18弓形虫RH株和1×103弓形虫RH株,统计小鼠存活率。结果 RT-PCR扩增出1 665 bp的ROP18基因序列。经酶切和测序鉴定证明p TUB8-ROP18-Ty1质粒构建成功。Western blotting分析结果显示,高表达ROP18 RH株可表达相对分子质量(Mr)为56 000的蛋白,与ROP18-Ty1蛋白预期结果一致。免疫荧光结果发现,ROP18-Ty1定位于弓形虫前端的棒状体。吉氏染色结果表明,高表达ROP18 RH株弓形虫感染HFF细胞6、12和24 h后的速殖子数量分别为100.0±16.9、476.0±31.1和860.0±52.3,均显著高于RH株弓形虫(88.0±16.9,300.0±11.3,675.0±35.4)(P<0.05)。弓形虫毒力实验结果显示,RH株弓形虫感染小鼠在第8天均存活,第14天存活率下降至30%(3/10),至第16天全部死亡;高表达ROP18 RH株弓形虫感染小鼠在第5天均存活,第8天存活率下降至30%(3/10),至第9天全部死亡。结论构建了高表达毒力因子ROP18的转基因弓形虫虫株。
- 蒋宗儒安然杨杰万俐娟都建
- 关键词：弓形虫
- AECOPD患者呼出气一氧化氮与外周血EOS百分数的相关性分析
- 目的检测慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)患者呼出气一氧化氮(FeNO)与其外周血嗜酸性粒细胞百分数(EOS%)，探究二者与COPD急性加重的关系。 方法收集六安市人民医院呼吸科2018年10月至2019年6月期...
- 安然
- 关键词：慢性阻塞性肺疾病急性加重呼出气一氧化氮外周血嗜酸性粒细胞
- 文献传递
