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嗜水气单胞菌外膜蛋白TolB的原核表达及生物信息学分析: 2024年; 为筛选TolB作为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)渔用疫苗候选抗原,从嗜水气单胞菌中克隆了外膜蛋白tolB基因并异源表达,采用生物信息学方法预测TolB的理化性质和结构特征。结果显示,tolB基因片段(去除信号肽)全长1 263 bp,编码1条含有420个氨基酸残基的多肽,分子质量45.78 ku。成功在大肠杆菌E. coli BL21(DE3)中异源表达TolB蛋白,其为稳定的亲水性外膜蛋白。TolB蛋白家族在不同菌株间具有同源性,尤其在气单胞菌间亲缘关系更近。TolB蛋白二级结构以无规则卷曲为主,具有潜在的B细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和辅助T细胞(Th)抗原表位;相互作用网络主要为TolPal系统蛋白。综上,TolB具有成为嗜水气单胞菌亚单位疫苗有效候选抗原的特性。; 陈甜梦蔡彤璇王嘉璐田牧野赵宝华刘东; 关键词：嗜水气单胞菌原核表达蛋白质纯化生物信息学

牡丹皮、黄连、大黄提取物对松材线虫生理代谢的影响被引量：5: 2014年; 对3种中草药黄连、牡丹皮、大黄的乙醇提取物毒杀松材线虫作用机制进行了初步研究。测定了其对线虫体内总糖和蛋白含量的影响,处理前后线虫体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和乙酰胆碱酯酶(AChE)酶活性变化和丙二醛(MDA)含量变化,处理前后SOD、CAT、GSH-Px和AChE表达量变化;并用松枝水培试验测定3种提取物对松材线虫病害的防控效果。结果表明,提取物处理后线虫体内总糖及蛋白含量显著下降,线虫体内糖及蛋白质的代谢受到干扰;线虫体内SOD、CAT、GSH-Px酶活性提高,POD活性显著下降,MDA含量升高,表明线虫体内氧化与抗氧化作用失衡,细胞功能受到极大影响;AChE活性被抑制,表明线虫的神经系统受到破坏,SOD、CAT、GSH-Px和POD表达量与酶活性变化基本一致。松枝水培试验表明中药提取物能够有效控制松材线虫病害发生。综上,3种提取物引起的松材线虫体内众多生理指标的改变是造成线虫死亡的主要原因。; 焦宏伟张璐刘东赵宝华; 关键词：中草药提取物松材线虫生理代谢

炭疽芽胞杆菌nprR突变株的生物学特性分析: 2018年; 目的:分析炭疽芽胞杆菌npr R突变株的生物学特性,研究基因缺失对菌株的影响。方法:利用PCR、免疫印迹等方法在基因水平和蛋白水平对菌株进行鉴定分析;绘制生长曲线比较突变株和A16R株的生长性能;芽胞形成实验分析突变株形成芽胞能力,糖酵解实验分析二者生化特性的差异。结果:突变株npr R基因缺失无回复突变,与出发株A16R相比,突变株蛋白酶活性大大降低,保护性抗原降解现象明显减少,生长速度和生化特性基本一致,但芽胞形成能力明显下降。结论:与A16R株相比,突变株蛋白酶活性降低且芽胞形成能力下降,可作为一种新的抗原表达宿主菌用于相关疫苗的抗原表达与制备。; 袁利思陶好霞江巍关清王博文刘纯杰刘东王艳春; 关键词：炭疽芽胞杆菌生物特性蛋白酶活性

猪肺炎支原体168弱毒菌株P65-DnaKc融合蛋白的表达及免疫原性被引量：4: 2015年; 研究猪肺炎支原体168(Mycoplasma hyopneumoniae 168,Mhp168)弱毒株融合蛋白P65-DnaKc免疫原性。根据GenBank中Mhp168弱毒株p65和dnaKc基因的开放阅读框设计特异性引物,进行PCR扩增,构建原核表达载体pET-28α-P65,pET-28α-DnaKc以及pET-28α-P65-DnaKc,经原核表达并纯化获得的蛋白与佐剂以体积比1∶1乳化后免疫小鼠,通过酶联免疫吸附反应(ELISA)测定小鼠血清的抗体效价。选取抗体效价较高的小鼠进行攻毒试验,记录分析试验结果。经间接ELISA试验证明单蛋白P65、DnaKc以及融合蛋白P65-DnaKc均具有良好的免疫原性,血清效价分别为:1∶12 800、1∶51 200和1∶204 800,融合蛋白的血清抗体效价明显高于单蛋白;攻毒试验证明,P65-DnaKc重组蛋白疫苗的保护率可达90%。融合蛋白P65-DnaKc具有良好的优于P65和DnaKc单蛋白的免疫原性。; 刘思远刘东关婉怡鞠建松赵宝华; 关键词：猪肺炎支原体 P65基因

泥河湾藉箕滩遗址土壤微生物的分离与系统发育分析被引量：2: 2017年; 采用平板稀释涂布法从泥河湾藉箕滩遗址土壤中分离微生物,结合菌株形态特征、生理生化特征及分子鉴定方法对分离到的微生物进行鉴定,以确定泥河湾藉箕滩遗址不同深度土层中微生物物种分布,为详细了解遗址土壤微生物物种多样性提供依据.结果表明:共分离鉴定到96株细菌、34株放线菌、15株真菌.根据同源性比对及构建系统发育进化树,确定细菌归属于芽孢杆菌属和短波单胞菌属;放线菌归属链霉菌属;真菌归属青霉属、曲霉属、被孢霉属和盐单胞菌藻.NHWB 1047,NHWA 1017,NHWF 1002等菌株与已知菌种相似度低于97%,可能为潜在新种.本研究首次从泥河湾藉箕滩遗址不同深度土层中分离鉴定微生物,是泥河湾考古研究的重要组成部分,为进一步了解史前时代生态环境提供了科学依据.; 吕春爽崔艳美梁思源水小溪赵亚超李忠达李越赵宝华刘东; 关键词：微生物扫描电镜观察

36种中草药提取物杀松材线虫活性研究被引量：12: 2014年; 为了从中草药中寻找高效杀线虫活性物质,本文测定了36种中草药提取物对松材线虫及其卵的毒杀活性。结果表明,牡丹皮、黄连和大黄3种中药的乙醇提取物杀线虫活性较强,以提取物浓度为10 g/L处理松材线虫72 h后,校正死亡率均为100%。3种中药提取物处理松材线虫72 h后半致死浓度(LC50)分别为1.81、0.2638和1.07 g/L。杀卵活性结果表明,3种中药提取物处理72 h后,线虫卵的孵化率均低于20%,虫卵的校正死亡率均高于60%。利用乙酸乙酯和水作溶剂对3种中草药进行初步的杀线活性成分分离的结果表明,牡丹皮的杀线活性物质存在于乙酸乙酯萃取物中,黄连和大黄的杀线活性物质存在于水萃取物中。3种中药的不同萃取物处理松材线虫72 h后的LC50分别为0.712、2.370和0.067 g/L。; 焦宏伟张璐赵宝华刘东; 关键词：中药提取物松材线虫杀线虫活性

丙氨酸脱氢酶研究概况被引量：1: 2011年; 丙氨酸脱氢酶(alanine dehydrogenase,ALD,EC 1.4.1.1)是一种以烟酰胺腺嘌呤(NAD)为辅酶的氨基酸脱氢酶。丙氨酸脱氢酶可逆催化丙氨酸氧化脱氨生成丙酮酸、氨及NADH。丙氨酸脱氢酶也是调节氨基酸代谢和糖代谢的重要酶类,其催化反应的产物丙酮酸广泛应用于医药、农药和食品等领域,具有良好的发展前景。主要介绍丙氨酸脱氢酶的纯化及活力检测、酶空间结构(底物结合位点),以及催化反应机理等方面的研究。; 何广正徐书景马宁刘东鞠建松; 关键词：丙氨酸脱氢酶丙酮酸脱氢酶

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刘东