严明总
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
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- 靶向Slug基因的腺相关腺病毒载体的构建与鉴定
- 2011年
- 目的:构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体.方法:首先构建pDC316-EGFP-Slug-siRNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-Slug-siRNA克隆为模板扩增EGFP-Slug-siRNA片段,EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收的PCR产物;酶切pSNAV2.0-lacz-α载体质粒,并与上述产物进行连接;转化感受态大肠杆菌DH5α,得到重组质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,酶切和测序对其进行鉴定.建立载体细胞株BHK/Slug-siRNA,大规模制备rAAV2-EGFP-Slug-siRAN并对其纯化、鉴定和滴度测定.结果:携带编码靶向Slug的小发夹状干扰RNA序列的腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,经PCR、酶切和测序鉴定,质粒构建正确.将构建成功的载体质粒与重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV1-rc/?UL2共转染包装细胞BHK-2,成功复制和包装出重组腺相关病毒rAAV2-EGFP-Slug-siRNA,经检测目的片段插入成功,滴度为9.23×1010puf.结论:成功制备出高滴度的携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体.
- 严明总张克君王齐全欧树安
- 关键词：SLUG基因小干扰RNA
- Slug-siRNA干扰Slug基因表达对胰腺癌的抑制作用被引量：4
- 2009年
- 目的:研究携带Slug-siRNA的rAAV对裸鼠体内胰腺癌的作用.方法:建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,2wk后随机将建模成功的裸鼠分为3组,每组6只.构建携带Slug-siRNA的rAAV载体,采用瘤体内多点注射的方法,阴性对照组裸鼠按1×109puf(50μL)标准注射rAAV-EGFP,空白对照组裸鼠注射等量生理盐水,实验组裸鼠按1×109puf(50μL)标准注射rAAV2-EGFP-slug-siRNA,只注射1次.观察裸鼠的一般情况,摄食,活动能力,每周用电子天平秤体质量,绘制裸鼠生长曲线.治疗6wk后二氧化碳吸入法处死裸鼠,切取肿瘤称质量;免疫组织化学SP法检测slug蛋白的表达,TUNEL检测皮下移植瘤细胞凋亡,透射电镜检测细胞超微结构.结果:3组裸鼠分别接受不同的处理后,在开始的2wk皮下移植瘤的生长无明显差别,2wk以后,实验组裸鼠皮下移植瘤的体积增长明显滞后于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05).治疗6wk后,实验组裸鼠皮下移植瘤的质量明显轻于阴性对照组和空白对照组差异有统计学意义(3.26±0.48gvs7.56±1.25g,7.50±1.23g,均P<0.05).实验组裸鼠皮下移植瘤的AI值明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(0.27±0.06vs0.024±0.01,0.025±0.01,均P<0.05);实验组的抑瘤率明显高于阴性对照组,差异有统计学差异(71.4%vs0.04%,P<0.01).透射电镜下,实验组肿瘤细胞可见细胞器结构模糊,核固缩,染色质边集等现象.免疫组织化学检测示实验组Slug表达明显减少.结论:Slug基因被有效沉默,Slug基因沉默后促进细胞凋亡,抑制胰腺癌实体瘤增殖和生长.
- 欧树安张克君严明总王齐全
- 关键词：胰腺癌基因治疗免疫组织化学
- 387例慢性乙型肝炎血清标志物模式与HBV-DNA检测的联合分析被引量：4
- 2010年
- 目的对慢性乙型肝炎血清标志物模式与HBV-DNA检测结果进行对比分析,探讨联合检测的意义。方法采用ELISA法检测血清标志物,实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA,对387例慢性乙型肝炎患者同时检测,以50例HBsAg阴性的正常健康人血清作为对照。结果 387例慢性乙型肝炎患者中,HBeAg阳性率为39.8%(154/387),PreS1Ag阳性率为30.5%(118/387),HBV-DNA阳性率为81.4%(315/387),均显著高于对照组;三组血清标志物模式中HBV-DNA阳性率均显著高于PreS1Ag阳性率。结论 HBV-DNA检测是诊断乙型病毒肝炎的金标准,PreS1Ag对临床乙型病毒肝炎诊断尚未定论,联合检测血清标志物与HBV-DNA可为临床诊治提供更准确的参考价值。
- 严明总符生苗邓立群
- 关键词：慢性乙型肝炎血清标志物PRES1AGHBV-DNA
- p53正向凋亡调控因子在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡过程中的作用被引量：1
- 2009年
- 目的:研究吉西他滨对人胰腺癌AsPC-1细胞体外生长的作用机制。方法:用脂质体转染法将含有p53正向凋亡调控因子(p53 upregulated modulator of apoptosis,PUMA)反义核酸的真核表达载体pcDNA3.1-PUMAAS和空载体pcDNA3.1导入AsPC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆。将转染载体的AsPC-1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC-1细胞分别暴露于浓度为1、5、10和15μmol/L的吉西他滨溶液中作用72h。RT-PCR和Western印迹法检测不同组细胞经吉西他滨作用72h后的PUMA表达水平,MTT检测细胞生长抑制情况,FCM、Hoechst 33258荧光染色和TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:吉西他滨促进AsPC-1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调;当细胞转染PUMA反义核酸抑制PUMA表达后,受吉西他滨作用的细胞中PUMA蛋白表达明显降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞增殖明显增加。结论:吉西他滨促进体外AsPC-1细胞凋亡,并抑制细胞生长,其诱导细胞凋亡与上调PUMA表达有关。
- 严明总张克君黄淘
- 关键词：胰腺肿瘤反义吉西他滨凋亡调节蛋白质类
- 肿瘤患者检测β_2-微球蛋白的初步探讨被引量：4
- 1993年
- 近年来,国内外学者对β2-微球蛋白（β2-mic-roglobulin,以下简称β2-m）的生物学功能和临床意义进行了研究,1980年Kourlsson发现多种血液病及实体恶性肿瘤患者血清β2-m浓度异常增高,引起临床工作者的注意。我院1988年2月以来采用放射免疫法测定血清β2-m,现将检测结果报道如下。材料和方法一、检测对象: （一）健康成人组:共52例,年龄18～55岁,其中男性23例,女性29例,选自输血员,本院工作人员、进修生及成年体检志愿者,经化验检查证实无肝、肾疾病,作为正常对照组。
- 严明总韩景辉陈家骐宋星宇倪贤珍王志刚杨兹炳
- 关键词：微球蛋白直结肠癌恶性肿瘤病人放免测定肿瘤早期诊断肿癌
- 荧光定量PCR检测HBV DNA的临床价值被引量：1
- 2003年
- 目的 乙肝两对半与HBVDNA检测结果不符的一些探讨。方法 ELISAF方法检测两对半和荧光定量PCR检测HBVDNA ,扩增片段为 3 14bp。结果 大三阳HBVDNA阳性率为 92 % ,小三阳为 16.47%。结论 乙肝患者或HBV携带者做HBVDNA检测 ,以确定其是否有传染性及提示有HBV基因变异的可能。多次检测HBVDNA可实时观察抗病毒疗效。
- 钟素萍严明总林海英韩英
- 关键词：乙肝两对半荧光定量PCR抗病毒
- 特异siRNA沉默Slug基因抑制体外胰腺癌AsPC-l细胞生长的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的:研究Slug基因沉默对胰腺癌AsPC-l细胞增殖、凋亡的影响。方法:构建靶向抑制S1ug的siRNA表达载体,瞬时转染AsPC-1细胞。采用RT-PCR和Westernblot法检测细胞Slug蛋白,MTT检测细胞增殖,AnnexinV-FITC/PI了解细胞凋亡的变化。结果:成功构建了pGenesil-l-Slug-siRNA(pSlug-siRNA)和pCenesil-1-Neg-siRNA(pNeg-siRNA)表达质粒。pSlug-siRNA瞬时转染AsPC-1细胞72h后,细胞S1ug表达及生长受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加。结论:Slug-siRNA抑制Slug表达,促进As-PC-1细胞凋亡并抑制细胞的增殖。
- 林晶严明总
- 关键词：SLUG瞬时转染ASPC-1
- Slug基因表达抑制对体外胰腺癌细胞生物行为的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨siRNA干扰Slug基因表达对胰腺癌转移、血管生成和生长的影响。方法用脂质体转染法将表达siRNA-Slug的真核表达载体pGenesil-1-Slug-siRNA(pSlug-siRNA)和空载体pGenesil-1-Neg-siRNA(pNeg-siRNA)导入AS-PC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆。采用RT-PCR技术检测不同处理组细胞中Slug mRNA表达水平,Western-blot测定Slug蛋白表达水平。观察Slug沉默后及对体外胰腺癌细胞侵袭作用的影响;鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验及CAM移植瘤实验检测Slug沉默对血管生成的影响,MTT比色法检测细胞存活率。结果pSlug-siRNA组细胞内Slug表达被有效沉默。重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭实验显示,pSlug-siRNA组、对照组、pNeg-siRNA组穿透基底膜细胞数分别为(38±6.56)、(164±15.39)、(159.67±8.96)个/高倍镜(×200),差异分别有统计学意义(P<0.05)。体外实验表明,AsPC-1细胞内Slug表达沉默后,血管密度明显降低,血管生成被抑制,细胞存活率明显降低。结论RNA干扰Slug基因抑制胰腺癌细胞生长、侵袭转移和血管生成,Slug可能成为胰腺癌基因治疗的新靶点。
- 陈彦福宋彩霞王全欧树安严明总
- 关键词：胰腺癌SLUG血管生成
