丁焕平
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：复旦大学生物医学研究院更多>>
- 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 四环素诱导的丙型肝炎病毒非结构蛋白5B稳定细胞株的构建和检测
- 2011年
- 丙型肝炎病毒(HCV)感染个体后在宿主细胞内长时间保持低水平复制,与慢性肝炎、肝硬化及肝细胞肝癌的发生密切相关。目前,HCV感染后肝细胞发生转化的具体机制还不清楚。非结构蛋白5B(NS5B)是HCV编码的非结构蛋白之一,具有RNA依赖的RNA聚合酶活性(RdRp),是病毒复制所需的关键酶。除参与病毒复制外,NS5B通过直接与宿主蛋白相互作用影响细胞的正常功能逐渐成为人们关注的焦点。为深入了解NS5B在病毒复制和致病过程中的作用,本研究在肝癌细胞系HepG2细胞中构建了可由四环素诱导(Tet-On)的NS5B稳定细胞株。结果显示,与对照组相比,加入四环素可成功诱导NS5B。加入不同浓度的四环素或经过不同的诱导时间,目的蛋白均能同时被标签抗体和抗NS5B抗体检测。免疫荧光法进一步证实NS5B存在于细胞质内。本研究所构建的NS5B稳定细胞株可用于诸多后续试验,为深入研究NS5B的功能提供了细胞模型。
- 王耀辉丁焕平王燏婵袁正宏
- 关键词：丙型肝炎病毒HEPG2TET-ON
- 核酸类似物PNA在HepG 2.2.15细胞中对乙型肝炎病毒复制的抑制作用被引量：1
- 2012年
- 目的评价核酸类似物PNA在HepG2.2.15细胞中对乙型肝炎病毒复制的抑制作用。方法以HepG2.2.15细胞作为细胞模型,拉米夫定作为阳性对照药物。HepG 2.2.15细胞于药物处理14 d后,收集上清液及细胞。采用ELISA检测上清液中HBsAg和HBeAg含量,HBV荧光定量检测上清液和细胞内HBV DNA水平,CCK-8试剂盒检测药物对细胞的毒性作用。结果核酸类似物PNA与拉米夫定在浓度1.6～1 000μmol·L^(-1)内对HepG 2.2.15细胞的毒性均较小。与药物未处理组比较,PNA和拉米夫定均可有效抑制细胞上清HBV DNA,半数抑制浓度(IC_(50))分别为0.05～0.10μmol·L^(-1)和0.09～0.18μmol·L^(-1),两者之间差异无统计学意义。结论在体外细胞实验中,PNA对细胞的毒性小,与拉米夫定的安全指数相当;PNA对乙型肝炎病毒复制有较强的抑制作用,且具有一定时效量效关系,与拉米夫定的抑制强度相当。
- 刘江霞宋武慧熊雅婷丁焕平袁正宏
- 关键词：PNA乙型肝炎病毒抗病毒药物
