陈斐
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
- 供职机构：第二军医大学长征医院更多>>
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- 细胞外信号调节激酶1小干扰RNA对肝癌细胞增殖能力的影响
- 2013年
- 目的探讨ERKl小干扰RNA对大鼠肝癌细胞株生物学特性的影响及其可能的作用机制。方法采用实时RT-PCR及免疫组织化学等方法检测ERKl在大鼠肝癌细胞株、大鼠原代肝细胞与12份人肝癌及配对癌旁组织中的表达，应用腺病毒介导的细胞外信号调节激酶1小干扰RNA（AdshERKl）感染大鼠肝癌细胞株RH=35、H4IIE，观察下调肝癌细胞中ERKl表达后对其生物学特性的影响及下游癌基因表达的变化。采用t检验进行统计学分析。结果12份人肝癌组织中，有ll份的ERKl表达较相应癌旁组织明显增多。ERKl在大鼠肝癌细胞株RH=35、H4IIE中的表达较大鼠原代肝细胞表达上调（0．075±0．010、0．458±0．052比0．016士0．003，t=13．806、7．715，P均〈0．01）。AdshERKl感染RH=35、H4IIE细胞后，肝癌细胞增殖能力、克隆形成能力显著受抑制。与AdshNC组相比，AdshERKl可明显减少RH=35细胞中S期细胞比例（18．55％±4．80％比4．39％±0．85％，t=-6．826，P〈0．01），引起GO／G1期细胞周期阻滞（76．77％±0．93％比89．57％±1.26％，t=11．676，P〈0．01）；AdshERKl可显著抑制H4IIE细胞在裸鼠皮下成瘤能力[（0．603±0．284）mg比（0．051±0．074）mg，t=-5．340，P〈0．01]。AdshERKl下调RH=35、H4IIE细胞ERKl表达，并抑制其下游癌基因c-myc的表达。结论AdshERKl有抑制大鼠肝癌细胞株RH=35和H4IIE增殖、克隆形成及皮下成瘤能力的作用，且该作用可能与抑制ERKl下游肿瘤相关基因c-rnyc的表达密切相关。
- 于尊芳钟巍尹川许文萍赵娟陈斐张新谢渭芬
- 基于报告基因系统的肝细胞核因子4α活性检测体系的建立
- 2017年
- 目的建立一个基于荧光素酶报告基因系统的肝细胞核因子4α(HNF4α)活性检测系统,筛选可调控HNF4α活性的小分子化合物。方法采用亲和层析法纯化HNF4α蛋白,行蛋白热迁移实验检测相关DNA片段及小分子化合物与HNF4α蛋白的直接相互作用。分别构建含有3个拷贝和9个拷贝的Ninjurin1(NINJ1)基因启动子区HNF4α反应元件的荧光素酶报告基因质粒pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p,转染肝癌细胞,采用荧光素酶报告基因法检测肝癌细胞内HNF4α转录活性的改变,qPCR检测小分子化合物木犀草素或阿尔维林处理后肝癌细胞中HNF4α及下游基因的表达情况,荧光素酶报告基因法检测小分子化合物处理后细胞内HNF4α转录活性的改变。结果蛋白热迁移实验证实,NINJ1基因启动子区HNF4α的DNA结合片段可与HNF4α蛋白结合。在过表达HNF4α的肝癌细胞中,pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p均可检测到肝癌细胞中HNF4α活性的改变,且pGL3-NINJ1-9p较pGL3-NINJ1-3p的检测灵敏度更高(P<0.01)。木犀草素和阿尔维林与HNF4α蛋白存在直接相互作用,分别下调和上调HNF4α靶基因;pGL3-NINJ1-9p可检测到木犀草素和阿尔维林对HNF4α转录活性的影响。结论利用报告基因载体pGL3-NINJ1-9p成功建立了HNF4α活性的检测系统,为筛选调控HNF4α活性的小分子化合物等提供了基础工具。
- 孙冰洁陈示洁邓龙飞丁晨虹陈斐罗成谢渭芬张新
- 关键词：肝细胞核因子4Α报告基因系统小分子化合物
- HNF1α的Q511L点突变导致其转录活性的降低并减弱其抗肝癌功能
- 丁晨虹邓龙飞陈斐谢渭芬张新
- 肝细胞特异性敲除HNF1α诱发小鼠脂肪肝相关肝细胞癌
- 丁凯倪奇王珂琪何金陈斐张新石勇铨谢渭芬
