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Calbindin-D28K经PI-3K/Akt信号通路抑制6-OHDA诱导的DA神经元凋亡: 本实验研究了PI3 K/A KT信号转导通路在Calbindin-D28K(CaBP)抑制6-OHDA诱导的DA神经元凋亡中的作用。以pcDNA3-GFP转染MN9D细胞作为对照,用含有CaBP cDNA的真核表达载体p...; 孙申李富珍高秀先朱园园陈静朱孝荣袁红花高殿帅

小鼠酪氨酸羟化酶启动子克隆被引量：3: 2008年; 为了克隆小鼠酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)启动子,并对其特异性调控能力进行研究,本实验采用重叠延伸PCR高保真扩增出小鼠TH启动子片段,测序正确后,重组构建质粒,并用TH启动子调控EGFP基因的表达。然后分别转染MN-9D细胞(TH+)和ECV细胞(TH-),观察EGFP基因在细胞内表达情况。结果显示:扩增出小鼠TH启动子序列与GenBank报道一致;单酶切和质粒PCR鉴定证实小鼠TH启动子和EGFP基因已经克隆入重组质粒中;小鼠TH启动子能调控EGFP在MN-9D细胞中表达,不能调控EGFP在ECV细胞内表达。初步确定克隆的小鼠TH启动子具有特异性调控目的基因表达的能力。; 朱孝荣高秀先朱园园袁红花孙怀昌高殿帅; 关键词：PCR 转染小鼠

Lenti-CB转基因保护多巴胺能神经元及作用机制的研究: 为了探索慢病毒介导的钙结合蛋白-D28K(Lenti-CB)对中脑黑质多巴胺能神经元的保护作用及作用机制。本实验:(1)将Lenti-CB转染MN9D多巴胺能神经元,采用Western blot方法、流式细胞仪、细胞原位...; 刘洪梅朱园园高殿帅

小鼠酷氨酸羟化酶启动子克隆: 目的：克隆小鼠酪氨酸羟化酶(TH)启动子,并对其特异性调控能力进行研究。方法：采用了重叠延伸PCR高保真扩增出小鼠TH启动子片段,测序正确后,重组构建质粒,并用TH启动子调控EGFP基因的表达，并分别转染MN...; 朱孝荣高秀先朱园园袁红花孙怀昌高殿帅; 关键词：动物学实验酪氨酸羟化酶基因克隆基因鉴定; 文献传递

Calbindin-D-28k对MPTP致小鼠黑质凋亡相关蛋白Bax表达的影响: 2009年; 目的探讨在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致小鼠黑质多巴胺(DA)能细胞发生凋亡时,calb ind in-D-28k(CB)抗细胞凋亡的作用机制。方法MPTP连续5天腹腔注射构建中脑黑质DA能细胞损伤的小鼠模型,模型鼠脑黑质致密部立体定位注射携带CB基因的高滴度慢病毒颗粒(CB-H IV-Ⅰ),W estern b lotting方法检测CB的在体过表达以及鼠脑黑质部位凋亡相关蛋白Bax的表达变化。结果与空白对照组(control)和黑质定位注射空病毒颗粒组(H IV-Ⅰ)相比,注射CB-H IV-Ⅰ的实验组的黑质中CB的表达量显著升高(P<0.05),而Bax的表达量明显降低(P<0.05)。结论病毒颗粒CB-H IV-Ⅰ携带的CB基因在黑质细胞中获得了高效的表达;凋亡相关蛋白Bax可能参与了CB对黑质DA能神经细胞的保护作用。; 高锦朱园园刘美英高殿帅; 关键词：细胞凋亡 BAX

小鼠Calbindin-D28k基因体外表达及其抗凋亡作用的研究: 2010年; 目的:研究钙结合蛋白D28k(calbindin-D28k,CaBP)体外表达及其对神经元细胞抗凋亡作用。方法:RT-PCR从小鼠脑组织中扩增出小鼠CaBP的cDNA片段;重组构建pTH-CB质(pcDNA3-TH-CB),脂质体包裹pTH-CB质粒转染MN-9D细胞(多巴胺能杂交瘤神经元细胞);RT-PCR、免疫沉淀法检测CaBP的cDNA在细胞内表达情况;Hoechst染色、Caspase-3活性检测、AnnexinV/PI法对CaBP过表达的抗凋亡作用进行检测。结果:小鼠脑组织RT-PCR扩增出785bp条带,测序结果与Genebank中报道完全一致。脂质体包裹重组构建pTH-CB质粒转染MN-9D细胞后,转染pTH-CB质粒的MN-9D细胞中,CaBP的mRNA表达量和CaBP水平显著高于转染pc-DAN3组和正常MN-9D细胞组(P<0.05),3种细胞凋亡检测方法结果显示,CaBP过表达的细胞抗凋亡能力显著提高。结论:体外克隆CaBP的cDNA能在细胞内表达,过表达的CaBP通过抑制细胞的caspase-3活性,起抗凋亡作用。; 朱孝荣朱园园李富珍袁红花孙怀昌高殿帅; 关键词：基因表达凋亡小鼠

小鼠酪氨酸羟化酶启动子序列分析: 2009年; 目的对小鼠酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）启动子进行序列分析,研究启动子不同区域对下游基因表达调控能力。方法高保真PCR分别扩增出450、1500、2000、2400、3400bp TH启动子片段置换pcDNA3中CMV启动子,并在多克隆位点插入EGFP报告基因,重组后质粒分别瞬时转染MN-9D细胞（TH^＋）和ECV细胞（TH^-）,流式细胞仪观察EGFP基因在细胞内表达情况。结果转染后MN-9D细胞中EGFP阳性率分别为8.01%、7.97%、7.85%、7.72%、7.74%,差异无显著性。转染ECV细胞（TH^-）中,EGFP阳性率分别为6.51%、6.35%、6.71%、0.89%、1.02%。3400bp、2400bp启动子片段在TH^-细胞中调控能力受到明显抑制。结论上述启动子片段均有调控基因表达能力,初步证明TH启动子中特异性调控区域在2400-2000bp范围内。; 朱孝荣朱园园高秀先袁红花孙怀昌高殿帅; 关键词：小鼠

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