曾思聪
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划湖南省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 端粒酶shRNA慢病毒载体的构建及转染人类胚胎干细胞被引量：1
- 2011年
- 目的:构建端粒酶shRNA慢病毒载体及建立端粒酶稳定干扰的人类胚胎干细胞系。方法:将端粒酶基因特异性shRNA靶序列与慢病毒载体PLKO.1-puro连接、转化、挑取阳性克隆进行PCR及测序鉴定;利用包装细胞293T获得重组的慢病毒,感染人类胚胎干细胞,分为干扰组ShTert、载体组vector和野生型组wt;Realtime-PCR检测端粒酶mRNA的表达。结果:经PCR和DNA测序鉴定,成功构建端粒酶特异性shRNA慢病毒载体,并感染人类胚胎干细胞;经检测shTert组端粒酶mRNA表达较vector和wt组明显降低,vector组和wt组之间无明显差异。结论:通过成功构建的端粒酶特异性shRNA慢病毒载体对人类胚胎干细胞的转染实现了对其端粒酶mRNA的调控。
- 曾思聪周菂卢光琇
- 关键词：人类胚胎干细胞慢病毒载体转染
- 荧光定量PCR精确检测人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数方法的建立被引量：5
- 2012年
- 建立一种精确定量人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的方法。构建包含线粒体DNAND1和核单拷贝基因β-globin基因序列的重组质粒作为标准品;收集无饲养层培养体系下人胚胎干细胞DNA样本,结合2个单独的Taqman探针实时荧光定量PCR对待测样本中线粒体ND1和核β-globin基因分别进行定量,从而对人胚胎干细胞线粒体DNA的含量进行了精确定量。结果提示,人胚胎干细胞线粒体DNA的平均拷贝数/细胞为1 321±228。研究表明,该技术可对人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数进行准确的测定,为研究培养条件对人胚胎干细胞线粒体DNA拷贝数的影响及优化体外培养条件奠定了基础。
- 孙懿曾思聪胡亮卢光琇林戈
- 关键词：人胚胎干细胞线粒体DNADNA拷贝数
- 利用慢病毒载体构建稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系被引量：2
- 2012年
- 目的建立β-catenin稳定干扰的人胚胎干细胞系。方法利用β-catenin慢病毒干扰质粒PLKO.1-puro-β-catenin转染包装细胞293FT制备重组慢病毒,并感染人胚胎干细胞,采用嘌呤霉素筛选稳定表达shβ-catenin人胚胎干细胞克隆;试验分为稳定转染β-catenin干扰质粒组(Shβ-catenin)、稳定转染空白载体组(VECTOR)和对照未感染组(WT)三组,RT-PCR检测干扰后β-catenin mRNA表达;进一步免疫荧光检测干扰后细胞β-catenin和OCT4的蛋白表达。结果β-catenin特异性shRNA的慢病毒感染人胚胎干细胞后,获得稳定表达shβ-catenin的人胚胎干细胞系,Shβ-catenin组β-catenin mRNA表达明显降低,只有WT组mRNA表达的1%,而VECTOR组和WT组之间无明显差异;免疫荧光染色进一步验证shβ-catenin组中基本无β-catenin蛋白的表达,但表达多能性标记OCT4。结论通过β-catenin特异性shRNA慢病毒载体构建了稳定干扰β-catenin的人胚胎干细胞系。
- 孙懿曾思聪卢光琇林戈
- 关键词：人胚胎干细胞RNA干扰Β-CATENIN
- 端粒酶介导的HESCs端粒延长&HER2转基因小鼠病理改变的研究
- HER2转基因小鼠的病理改变研究 目的:ERBB2/HER2/NEU，是上皮生长因子(EGFR)受体家族中的成员之一，在25％的非小细胞肺癌病人中过表达，被认为是显著的独立的肺癌预后指标。但是其参与肺癌发生的过程及机制...
- 曾思聪
- 关键词：上皮生长因子预后指标免疫组化染色
- 文献传递
- 肺癌转基因小鼠的构建
- 目的：近十年来，肺癌已经成为致死率最高的癌症，超过了乳腺癌，胰腺癌，前列腺癌和直肠癌的总和。在人类肺癌的发生发展过程中，原癌基因neu的过表达和K-ras基因的突变在临床检测中都频繁的出现。在国内外的研究中建立了各种肺癌...
- 曾思聪
- 关键词：肺癌转基因动物NEUK-RAS淋巴细胞
- 文献传递
- 定量荧光原位杂交测定端粒长度被引量：1
- 2011年
- 目的:应用定量荧光原位杂交(Q-FISH)方法测定端粒长度。方法:选取4种端粒长度均一的标准细胞株采用Q-FISH的方法做出荧光亮度与端粒长度的标准曲线,从而得出实验细胞株的端粒长度,与DNA印迹法测定末端限制性片段(TRF)长度进行二者之间的相关性分析。结果:检测荧光强度的最佳线性曝光时间为400ms,相对于DNA印迹法,定量荧光原位杂交(Q-FISH)法所需标本量少,实验周期短,端粒长度结果与Southern杂交法具有很好的相关性。结论:采用定量荧光原位杂交方法测端粒长度具有重复性好、精确可靠的特点,适用于对珍贵标本的端粒改变进行分析。
- 曾思聪卢光琇
- 关键词：端粒
- 人类早期胚胎发育端粒维持初步研究被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨人类胚胎在早期发育过程中端粒维持的机制。方法:利用端粒特异性探针对临床ⅣF过程中2～8细胞时期停止发育不适合移植的胚胎和来自于囊胚期的人类胚胎干细胞进行荧光原位杂交检测端粒重组。结果:人类早期胚胎发育中存在端粒交换的结构APB小体,而来自于囊胚期的胚胎干细胞不再具有这种结构,胚胎干细胞端粒交换发生频率较低(0.15%)。结论:结合其他实验报道,提示人类胚胎早期发育过程中出现两种端粒维持机制的并存。
- 曾思聪周菂卢光琇
- 关键词：胚胎干细胞端粒
