崔雄鹰
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科委国际合作基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 造血干细胞移植建立血小板整合素β3胞内段截短体转基因小鼠模型
- 2013年
- 本研究通过逆转录病毒感染整合素β3缺陷小鼠(β3-/-)骨髓造血干细胞再进行骨髓移植建立β3及其胞内段不同截短体的转基因小鼠模型,为进一步研究整合素β3胞内段在血小板双向信号转导途径中的作用提供基础。将整合素β3野生型、β3-Δ759(缺失R760GT762氨基酸片段)和β3-Δ754(缺失T755NITYRGT762氨基酸片段)的cDNA分别克隆至带有GFP编码基因的MSCV MigR1逆转录病毒载体质粒中,用质粒转染BOSC23包装细胞株包装出带有β3全长及不同突变体的逆转录病毒,再感染β3-/-供体小鼠骨髓细胞,尾静脉注射移植入经致死剂量辐照的野生型C57BL/6小鼠体内,移植后6-8周流式细胞术检测GFP和β3的表达率以评估转基因效率。结果表明,成功建立了空载(Vector)、β3野生型和截短突变β3-Δ759、β3-Δ754等4种小鼠模型,血小板转基因成功的比率(即GFP阳性率)为18%-66%,转基因血小板β3表达可达到β3+/-水平。结论:利用逆转录病毒感染的造血干细胞移植建立血小板转基因小鼠模型是一种高通量快速有效的建立转基因小鼠模型的方法,这为进一步研究整合素β3胞内不同区段对血小板整合素信号转导途径的影响及体内对血小板进行基因操作和基因治疗奠定了基础。
- 崔雄鹰施小凤黄建松刘萍陶岚岚周玉兰阮铮奚晓东
- 关键词：逆转录病毒转基因小鼠模型造血干细胞移植
- 整合素β3胞浆段尾部序列对αvβ3介导的细胞行为的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨在与整合素αv复合的模式下,整合素β3亚基胞浆段序列在肿瘤细胞的黏附、伸展和迁移中所起的作用,从而为寻找干扰肿瘤进展的分子靶点提供思路。方法:利用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞模型,建立共表达整合素αv与整合素β3全长及其T758、Y759位截短体的稳定细胞株,检测各稳定细胞株在固相化的αvβ3配体玻璃黏连蛋白上的黏附、伸展功能,运用transwell观察各细胞株的迁移能力。结果:稳定表达整合素αvβ3全长的CHO细胞具有在固相化玻璃黏连蛋白上的黏附、伸展和迁移能力。相较于CHO-αvβ3全长细胞株,CHO-αvβ3△758截短体细胞株的黏附、伸展以及迁移能力均明显受损;而CHO-αvβ3△759截短体细胞株仍保留着黏附能力,但伸展能力减弱,并且迁移能力受损明显。结论:整合素β3胞浆尾端YRGT和RGT氨基酸序列在αvβ3介导的细胞黏附和迁移方面发挥不同的作用,提示β3亚基胞内段参与调控肿瘤细胞的重要细胞行为,是潜在的肿瘤治疗靶点。
- 周玉兰黄建松刘萍施小凤崔雄鹰阮铮奚晓东
- 关键词：整合素ΑVΒ3
- 实时定量PCR检测骨髓移植转基因动物模型移植嵌合率
- ＜正＞目的:用带有突变整合素β3基因和GFP基因的逆转录病毒MSCV MigR1感染小鼠造血干细胞并移植到野生型小鼠体内,建立血小板整合素β3转基因小鼠模型,从而在体内研究整合素β3对血小板功能的调控作用。造血干细胞移植...
- 施小凤黄建松周玉兰崔雄鹰刘萍陶岚岚奚晓东
- 文献传递
- 利用显性负模型研究整合素β3胞浆段RGT序列对信号转导的调控机制被引量：2
- 2012年
- 该研究探讨整合素β3胞浆段RGT序列在整合素信号转导中的作用。利用IL-2R胞外段和跨膜段(Tac)与整合素β3胞浆段全长或截短序列构建Tac-β3嵌合体,即Tac-β3和Tac-β3Δ759,使其分别在表达GPIbIX、整合素αIIbβ3的CHO细胞株(IbIX/IIbIIIa-CHO细胞株)中稳定表达(即IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-β3、IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-β3Δ759细胞株)。利用竞争酶联免疫法对Tac-β3嵌合体进行定量,观察IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-β3、IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-β3Δ759细胞株在固相化纤维蛋白原上的伸展情况(代表外向内的信号转导);Co-IP研究Tac-β3嵌合体、β3与下游信号分子Src的结合情况。结果发现:竞争酶联免疫法证实了两个细胞株的Tac-β3嵌合体表达都高于野生型β3,保证了Tac-β3嵌合体对内源性β3在结合胞内分子中的显性负效应;IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-β3细胞株在固相化纤维蛋白原上的黏附伸展能力受到抑制,而IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-β3Δ759细胞株在固相化纤维蛋白原上的黏附伸展能力并未受到明显影响。Co-IP结果显示:Tac-β3能结合内源性Src,而胞浆段RGT序列缺失的Tac-β3Δ759则不与内源性Src结合。选择性地破坏Tac-β3的Src结合能力即足以去除其对外向内信号转导的显性负效应,从而表明:整合素β3尾端RGT序列与Src的相互作用在这一信号转导通路中起决定性的作用。
- 陶岚岚黄建松吕媛靖周玉兰崔雄鹰阮铮奚晓东
- 关键词：蛋白质相互作用信号转导
- 活化型c-Src对整合素αvβ3相关肿瘤行为的影响
- 2013年
- 目的:探讨活化型c-Src对整合素αvβ3相关肿瘤行为的影响及其分子机制,为寻找治疗肿瘤的分子靶点提供思路。方法:通过定点突变的方法构建活化型c-Src真核表达载体,应用脂质体法转染至表达有整合素αvβ3的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,即CHO-αvβ3细胞中建立稳定细胞株。通过流式细胞术、蛋白印迹法检测细胞中目的蛋白的表达,检测稳定细胞株在固相化αvβ3配体玻连蛋白(Vn)上的黏附、伸展功能,利用人工重组基底膜侵袭小室,观察细胞株的迁移能力,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞中整合素β3酪氨酸磷酸化的水平。结果:流式细胞术和蛋白印迹法检测结果均证实,CHO-αvβ3中成功表达活化型c-Src。活化型c-Src对CHO-αvβ3细胞在固相化Vn上的黏附、伸展能力无明显影响,但增强了细胞迁移能力及整合素β3的磷酸化水平。结论:活化型c-Src参与αvβ3相关肿瘤行为的调节,可能与增强整合素β3磷酸化水平相关,为进一步深入了解相关机制奠定基础。
- 刘萍周玉兰黄建松崔雄鹰施小凤阮铮奚晓东
- 关键词：整合素ΑVΒ3迁移磷酸化
- 通过转基因小鼠模型的建立在体内研究整合素β3胞浆段对血小板功能的调控作用
- 本研究通过逆转录病毒感染的造血干细胞移植建立含血小板整合素β3胞浆段突变的转基因小鼠模型，在体内研究整合素β3胞浆段对血小板功能的调控作用。将整合素β3野生型、β3-Δ759（缺失R760GT762氨基酸片段）、β3-Δ...
- 崔雄鹰
- 关键词：逆转录病毒
- 文献传递
- 剪切力对血栓形成作用的研究进展被引量：3
- 2013年
- 随着人民生活水平的提高,心脑血管动脉血栓性疾病致残率和死亡率逐年升高,居各类疾病死亡率的前两位,血小板在心血管疾病中起着重要的作用[1].血小板可黏附聚集到受损的血管,这一过程因剪切力的存在变得异常复杂.剪切力使血小板在黏附聚集时受到血液动力学作用,同时血小板也进化产生了具有特殊功能的黏附受体,从而能在剪切力的环境下黏附到血管壁上.近几年因为体外微流控高剪切力模拟仪的开发和高分辨力实时成像技术的发展,人们对剪切力下血栓的形成有了新的认识.本综述拟结合近几年的最新研究进展,从剪切力和剪切率的定义、剪切力对血栓形成的双重作用、剪切力下血栓形成的过程、急性冠状动脉综合征等病理状态下剪切力对血栓形成的影响及病理性高剪切力下抗血栓药物的选择等几个方面对剪切力与血栓形成之间的关系做一阐述.
- 施小凤黄建松周玉兰崔雄鹰刘萍奚晓东
- 关键词：血栓形成剪切力急性冠状动脉综合征动脉血栓性疾病疾病死亡率心脑血管
