刘雪梅
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项中央高校基本科研业务费专项资金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 山羊PTHrP基因干扰重组腺病毒的制备与鉴定被引量：2
- 2011年
- 甲状旁腺激素相关蛋白(Parathyroid hormone related protein,PTHrP)具有广泛生物学功能,对调控钙代谢具有重要作用。采用RNA干扰和重组腺病毒技术,对山羊乳腺上皮细胞中PTHrP基因表达进行沉默,为进一步研究该基因在乳腺上皮细胞中的功能奠定基础。采用BLOCK-iT shRNA腺病毒干扰系统,将设计好的寡聚shRNA-322/357经退火复性后插入穿梭质粒pENTR/CMV-GFP/U6中。经Western blotting检测干扰效率后,选择pENTR/CMV-GFP/U6-322与病毒骨架质粒pAd/PL-DEST进行同源重组,成功获得重组干扰腺病毒载体pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-322,并转染HEK-293细胞,通过包装、扩增后产生干扰重组腺病毒AD-PTHrP-322,TCID50法测定其滴度为2.0×109 PFU/mL。用AD-PTHrP-322感染山羊原代乳腺上皮细胞(MOI=200),经实时定量PCR及Western blotting检测表明在病毒感染24 h、48 h和72 h后,山羊乳腺上皮细胞中PTHrP mRNA表达量分别下调了29.2%、68.1%和82.6%(P<0.05),其蛋白表达水平也明显下调,干扰效果明显。
- 邢瑞芳郑惠玲刘雪梅闫林慧安俊辉杨振宇祝珍珍
- 关键词：山羊甲状旁腺激素相关蛋白腺病毒
