闫林慧
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金公益性行业(农业)科研专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
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- 抗山羊ΔfosB基因表达产物抗体的制备及应用
- 2010年
- ΔfosB是fosB基因的自然截短型,稳定存在于许多组织中,在脂肪细胞和成骨细胞的形成和分化中起到重要作用。ΔFosB蛋白可能与钙在骨和乳腺中的代谢有关,并且调控钙从骨向乳腺转移的信号通路。将奶山羊的ΔfosB基因亚克隆到pET32a载体得到pET32a-ΔfosB原核表达载体,IPTG诱导其在大肠杆菌中表达,纯化融合蛋白免疫兔子制备多克隆抗体。ELISA检测显示抗体效价达1:51200,Western blotting结果显示制备的抗体能特异性检测原核表达的ΔFosB蛋白以及在HEK-293细胞中表达的ΔFosB蛋白。进一步的组织差异表达检测表明ΔFosB在山羊的乳腺、骨髓、脑髓、肌肉、心脏、肝和肺组织中均有表达。
- 郑惠玲祝珍珍安俊辉杨振宇邢瑞芳闫林慧
- 关键词：山羊原核表达多克隆抗体
- 山羊Δfosb基因重组腺病毒载体的构建被引量：1
- 2010年
- 【目的】利用腺病毒pAdEasy-1表达系统构建含山羊Δfosb基因的重组腺病毒,为在原代细胞中研究该基因的功能奠定基础。【方法】扩增山羊的Δfosb基因,与pAdTrack连接构建pAdTrack-HA-Δfosb。用pAdTrack-HA-Δfosb转化含有pAdEasy-1的BJ5183细胞,同源重组后获得重组腺病毒质粒pAd-HA-Δfosb,用其转染HEK293细胞,包装得到重组腺病毒。对重组腺病毒进行PCR和Western blot鉴定。【结果】酶切鉴定、绿色荧光蛋白观察及PCR均证明,重组腺病毒质粒构建正确;Western blot检测到了Δfosb蛋白的表达。【结论】成功构建获得了可表达Δfosb蛋白的重组腺病毒rAd-HA-Δfosb。
- 郑惠玲袁超包黎娟闫林慧祝珍珍
- 关键词：山羊重组腺病毒
- 山羊ΔFosB基因对几个钙、脂代谢相关基因的mRNA表达调控研究
- ΔFosB是AP-1(activator protein-1,激活蛋白1)家族中FosB(Finkel-Biskis-Jinkins murine osteosarcoma B,小鼠骨肉瘤基因B)基因的一个自然截短型,缺...
- 闫林慧
- 关键词：山羊乳腺上皮细胞钙代谢脂代谢
- 文献传递
- 山羊PTHrP基因干扰重组腺病毒的制备与鉴定被引量：2
- 2011年
- 甲状旁腺激素相关蛋白(Parathyroid hormone related protein,PTHrP)具有广泛生物学功能,对调控钙代谢具有重要作用。采用RNA干扰和重组腺病毒技术,对山羊乳腺上皮细胞中PTHrP基因表达进行沉默,为进一步研究该基因在乳腺上皮细胞中的功能奠定基础。采用BLOCK-iT shRNA腺病毒干扰系统,将设计好的寡聚shRNA-322/357经退火复性后插入穿梭质粒pENTR/CMV-GFP/U6中。经Western blotting检测干扰效率后,选择pENTR/CMV-GFP/U6-322与病毒骨架质粒pAd/PL-DEST进行同源重组,成功获得重组干扰腺病毒载体pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-322,并转染HEK-293细胞,通过包装、扩增后产生干扰重组腺病毒AD-PTHrP-322,TCID50法测定其滴度为2.0×109 PFU/mL。用AD-PTHrP-322感染山羊原代乳腺上皮细胞(MOI=200),经实时定量PCR及Western blotting检测表明在病毒感染24 h、48 h和72 h后,山羊乳腺上皮细胞中PTHrP mRNA表达量分别下调了29.2%、68.1%和82.6%(P<0.05),其蛋白表达水平也明显下调,干扰效果明显。
- 邢瑞芳郑惠玲刘雪梅闫林慧安俊辉杨振宇祝珍珍
- 关键词：山羊甲状旁腺激素相关蛋白腺病毒
