党占国
- 作品数：26 被引量：122H指数：6
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
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- 整合PRRSV GP5囊膜蛋白的假型鼠白血病病毒的构建
- 通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了PRRSV GP5,GP6基因并进行了克隆与鉴定。构建了含GP5基因的真核表达载体pcDNA-GP5,pcDNA-GP5/6,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假病毒构建体系的...
- 夏平安党占国周斌王臣崔保安陈溥言
- 关键词：PRRSVGP5基因鼠白血病病毒假病毒
- 文献传递
- 整合猪瘟病毒囊膜蛋白的假型鼠白血病病毒感染性的研究被引量：3
- 2008年
- 通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了猪瘟病毒(CSFV)的E0、E2和E012基因并进行了克隆与鉴定。构建了真核表达载体pcDNA-E0、pcDNA-E2和pcDNA-E012,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假型病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111瞬时共转染人胚肾细胞(293T),48h后收集假型病毒上清液,将假型病毒上清液超速离心后用抗CSFV的多抗进行Western-blot检测。结果证明E012蛋白能够在假型病毒颗粒表面表达,说明E012能够整合到此病毒粒子表面;用其感染多种宿主细胞,48h后检测发现在猪肾细胞(SK6,PK15)和猪睾丸细胞(ST)上,标记基因LacZ能有效表达,证实构建的CSFV假型病毒具有感染性。
- 周斌党占国刘珂陈溥言
- 关键词：囊膜蛋白鼠白血病病毒感染性
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白的高效表达及间接ELISA方法的建立被引量：19
- 2009年
- 根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株ATCC VR2332的N蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从PRRSV Hn-1/06株中克隆了大小为372bp的N蛋白基因(EU025136)。将N蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-N,在IPTG的诱导下成功表达了相对分子质量约为33000的可溶性融合蛋白N-His;经SDS-PAGE和凝胶薄层扫描分析,融合蛋白的表达量约占细菌总蛋白量的29%。将融合蛋白加入镍琼脂糖凝胶树脂层析柱,经300mmol/L咪唑磷酸盐缓冲液洗脱,其纯度可达91%。用Western blotting分析纯化后的融合蛋白,显示良好的生物学活性。利用纯化融合蛋白作包被抗原及优化ELISA反应条件,建立了可检测抗PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法(N-ELISA),并将所建立的N-ELISA与国外进口的PRRS检测试剂盒IDEXX-ELISA对200份临床送检血清进行平行检测,阳性符合率为92.7%。结果表明,本试验建立的N-ELISA与IDEXX-ELISA具有同样高的特异性。
- 夏平安尹彦涛李素平党占国王建举王中明李伟娟崔保安
- 关键词：PRRSVN蛋白ELISA
- 整合猪瘟病毒囊膜蛋白的假型鼠白血病病毒感染性的研究
- 通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了猪瘟病毒(CSFV)的EO、E2、E012基因并进行了克隆与鉴定,构建了真核表达载体pcDNA-E0,pcDNA-E2,pcDNA-E012,通过与鼠白血病病毒(MuLV)...
- 周斌党占国刘珂陈溥言
- 关键词：CSFV囊膜蛋白鼠白血病病毒假病毒感染性
- 文献传递
- 猪繁殖和呼吸综合症病毒河南地方株ORF5/6基因的克隆及真核表达
- 2008年
- 应用RT-PCR方法分别扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)河南地方株的ORF5和0RF6基因。将扩增基因克隆入真核表达载体pcDNA3.0中,设计不同引物自行构建重组质粒PcDNA-ORF5、ORF6和pcDNA-ORF5/6。运用磷酸钙法将重组质粒分别瞬时转染293T细胞,经流式细胞和westbloting试验分析表明共表达重组质粒PcD-NA-ORF5/6表达蛋白能够与PRRSV的阳性血清发生特异性反应,而pcDNA-ORF5-ORF6在293T细胞很难检测到蛋白表达。该结果表明蛋白质生物活性和其蛋白质空间构象有一定关系,也为下一步进行构建PRRSV假型病毒来研究ORF5/6蛋白的结构与功能的关系奠定了基础。
- 党占国李志勇夏平安陈溥言崔保安李伟娟王中明
- 关键词：PRRSV克隆真核表达
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白介导的E蛋白假型鼠白血病病毒的构建
- 利用RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5和ORF6基因,分别构建pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6真核表达载体,磷酸钙共沉淀法瞬时转染293T细胞,4...
- 党占国夏平安周斌陈溥言崔保安邱璜卢高峰
- 关键词：假病毒鼠白血病病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白介导的E蛋白假型鼠白血病病毒的构建被引量：3
- 2008年
- 利用RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5和ORF6基因,分别构建pcDNA-ORF5、pcD-NA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6真核表达载体,磷酸钙共沉淀法瞬时转染293T细胞,48h后收集细胞,流式细胞仪检测,结果表明:PRRSVORF5基因编码囊膜蛋白(E蛋白)能在在293T细胞表面表达,而由共表达M蛋白(ORF6基因编码的基质蛋白)介导的E蛋白的表达量比单独E蛋白表达量高,串联表达与单独E蛋白相比较低。将pcDNA-ORF5、pcDNA-ORF5/6和pcDNA-ORF5-ORF6分别与MuLV假病毒构建体系的两种骨架载体pHIT60(包括MuLV的结构蛋白基因,即gag和pol)和pHIT111(为MuLV的基因组,还包括一个报告基因LacZ)瞬时共转染293T细胞,48h后收集假病毒上清,超速离心后通过Westernblot证实E蛋白能够在此假病毒颗粒表面表达,证明E蛋白已整合到此假病毒粒子表面。将整合PRRSVE蛋白的假病毒粒子分别感染Marc-145和PAM宿主靶细胞,均能检测到LacZ基因的表达,结果表明:所构建的假病毒粒子具有感染性,且由M蛋白介导的MuLV-E/M感染性比MuLV-E假病毒感染性高。
- 夏平安党占国周斌陈溥言崔保安邱璜卢高峰
- 关键词：假病毒鼠白血病病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒河南分离株的遗传变异分析
- 经间接免疫荧光试验和RT-PCR鉴定,用Marc-145细胞从河南省不同地区送检的疑似猪繁殖与呼吸障碍综合征的病料中分离到16株猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV).扩增分离株的ORF5基因并进行序列测定.比较分析和...
- 李伟娟夏平安卢高峰党占国尹彦涛王中明邱璜崔保安
- 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒ORF5基因基因克隆
- 河南株约氏乳杆菌的分离鉴定及变异分析
- 从3日龄小鸡肠道中分离到的一株乳杆菌(HN0711),进行了鉴定,并利用乳杆菌特异性引物对该菌株进行了16srRNA 基因的克隆及序列分析,结果扩增出长约1.4kb 的目的片段,测序得到一条长度为1340bp 核苷酸序列...
- 张凤华夏平安崔保安张红英杨霞党占国
- 关键词：乳酸杆菌系统进化树
- 文献传递
- tPA信号肽和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因原核表达载体的构建被引量：5
- 2009年
- 根据GenBank(序列号E00896)上公布的人组织型纤溶酶原激活因子(tissue plasminogen activator,tPA)的序列,利用在线信号肽分析工具Signal P3.0 Server预测出人tPA的信号肽共有63bp,设计1对能互为模板直接进行扩增的特异性引物,通过重叠PCR的方法扩增出tPA信号肽。另设计1对连接引物,利用PCR方法将tPA信号肽与已删除自身信号肽的ORF5基因相连,成功构建了用tPA信号肽取代猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因原有信号肽的原核表达质粒,为下一步GP5蛋白分泌表达及猪繁殖与呼吸综合征疫苗开发、诊断试剂盒的研制与应用奠定基础。
- 邱璜夏平安卢高峰王中明刘明莉李伟娟党占国
- 关键词：PRRSVORF5基因原核表达载体
