王永庆
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
- 供职机构：第四军医大学基础医学部细胞工程研究中心更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段的原核表达与免疫学活性分析被引量：7
- 2003年
- 目的 :利用大肠杆菌高效表达肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段 ,并分析其与相应抗体的结合活性 ,进而明确表达产物用于筛选基因工程抗体的可行性 .方法 :用PCR技术扩增出HAb18G胞外区基因片段 ,克隆入原核表达载体pGEX 4T 3中 ,筛选及鉴定阳性重组子 ,IPTGv诱导表达后对表达产物进行纯化及复性等处理 ,同时利用SDS PAGE ,Western Blot以及ELISA等方法检测蛋白表达情况及其免疫学特性 .结果 :成功构建了肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段的原核表达载体 pGEX 4T 3/HAb18GE ,并在大肠杆菌中成功实现高效融合表达 .表达蛋白Mr 4 6 0 0 0 ,表达量约占菌体总蛋白量的 4 3% ,表达产物主要以包涵体形式为主 .另外 ,表达蛋白在变性和非变性的条件下均可以与HAb18GmAb特异性结合 .结论 :原核融合表达的HAb18G胞外区片段可以替代天然的HAb18G蛋白 ,以用做抗原来筛选新型的基因工程抗体 .
- 邢金良王永庆杨向民姚西英陈志南
- 关键词：抗原胞外区
- 抗人HAb18G分子单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中的分泌表达被引量：1
- 2003年
- 目的 :构建抗人HAb18G分子单链抗体基因 ,并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法 :通过连接肽 (Gly4Ser) 3基因序列将已成功克隆的抗人肝癌单抗HAb18轻、重链可变区基因拼接成单链抗体 (ScFv)基因 ,并在 5′和 3′端引入相应的酶切位点 ,克隆至改造的分泌性表达载体pCANTAB 5His之中 ,转化到E coliHB2 15 1中进行诱导表达。亲和层析纯化表达蛋白后 ,以SDS PAGE电泳、Westernblot及ELISA等方法分析检测表达产物。结果 :经限制性酶切鉴定及DNA测序分析 ,证实基因构建正确。SDS PAGE电泳和Westernblot分析表明ScFv基因在大肠杆菌中成功表达。表达产物的相对分子质量 (Mr)为 31kD ,与理论预期值相符 ,并且可与相应的抗原特异结合。结论 :成功实现了抗人HAb18G分子单链抗体的原核分泌表达 ,为其在人肝癌诊治中的进一步应用奠定了基础。
- 邢金良杨向民王永庆姚西英陈志南
- 关键词：单链抗体基因大肠杆菌分泌表达
- 抗人肝癌单克隆抗体HAb18 Fab基因的克隆和表达被引量：8
- 2003年
- 目的:克隆抗人肝癌单抗(mAb)HAb18的Fab基因,并在大肠杆菌中表达。方法:采用RT-PCR法,利用设计的引物扩增mAb Fd和K链全长基因,并分别克隆到T载体中进行序列分析。然后,亚克隆到原核表达载体pComb3中,转化感受态大肠杆菌后以IPTG诱导表达。采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的特异性。结果:克隆了mAb HAb18的Fah基因,并在大肠杆菌中获得表达。竞争性ELISA和免疫荧光检测证实,表达产物具有与相应抗原特异结合的活性。结论: 成功地构建了抗人肝癌小分子Fab抗体,为其进一步在肝癌诊断与治疗中的应用奠定了基础。
- 邢金良王永庆杨向民宋斐陈志南
- 关键词：肝癌单克隆抗体FAB
