杨向民
- 作品数：32 被引量：89H指数：6
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- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的差异表达及其意义
- 2006年
- 目的:测定转化生长因子β(TGF-β)诱导分子βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的表达情况。方法:培养人肝癌细胞T7721(转染并稳定高表达HAb18G/CD147)、7721(未转染HAb18G/CD147)、人肝细胞癌细胞系(HHCC)和正常人张氏肝细胞QZG,提取总RNA,设计合成特异性引物,以β-肌动蛋白(β-actin)作为内参照,检测βig-h3 mRNA的差异表达情况。结果:逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)结果显示,TGF-β诱导分子βig-h3的mRNA在人肝癌细胞中的表达水平明显高于正常肝细胞(P<0.01),其在人肝癌细胞系中的表达水平依次为HHCC>T7721>7721,在正常肝细胞QZG中表达水平最低。结论:证明了βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中高表达,为进一步探讨βig-h3在肝癌细胞黏附和转移过程中的作用机制奠定了基础。
- 周宏伟蒋建利郭卫平陈志南杨向民
- 关键词：肝癌HAB18G/CD147
- 抗人大肠癌抗体CAb-1 Fab基因的克隆、表达和鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的 :从杂交瘤细胞中克隆mAbCAb 1所编码Fab抗体基因 ,并在大肠杆菌中进行表达和鉴定 .方法 :采用RT PCR方法 ,扩增mAbCAb 1的Fd片段和全长κ链基因 ,分别克隆到T载体后进行序列测定和分析 .依次亚克隆两个基因到噬粒 pComb3中 ,去除该载体上的 gIII基因 ,构建成分泌表达载体Fd L/pComb3.转化XL1 BlueE .coli菌株 ,IPTG诱导表达 .采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的特异性 .结果 :克隆了大肠癌mAbCAb 1的Fab基因 ,并在E .coli中获得表达 .产物CAb 1Fab具有与大肠癌细胞株SW4 80特异结合的活性 .结论 :成功构建了在E .coli中表达抗人大肠癌mAbCAb 1的小分子单价Fab抗体的载体 .
- 杨向民邢金良姚西英张思河陈志南
- 关键词：结直肠肿瘤FAB抗体克隆
- 抗人肝癌单克隆抗体嵌合Fab在巴氏毕赤酵母中的高效分泌表达被引量：2
- 2005年
- 目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定。将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达。结果:成功地表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab,表达水平为26mg/L。Westernblot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性。结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础。
- 董红霖邢金良安家泽杨向民姚西英窦科峰陈志南
- 关键词：肝癌单克隆抗体毕赤酵母分泌表达
- βig-h3对肝癌细胞黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶的影响被引量：1
- 2006年
- 目的:研究βig-h3对肝癌细胞SMMC-7721黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:通过黏附、侵袭及明胶酶谱实验,检测瞬时分别转染βig-h3基因和转染空载体的SMMC-7721细胞的黏附、侵袭能力和分泌MMP的变化。结果:转染βig-h3基因的SMMC-7721细胞的黏附率、侵袭率及MMP-2、MMP-9的分泌量,均明显高于转染空载体的SMMC-7721细胞。结论:βig-h3具有促进肝癌细胞浸润和转移的作用,是肝癌发生发展过程中的促进因子。
- 唐娟蒋建利周宏伟杨向民陈志南
- 关键词：肝癌细胞
- 治疗性单抗的免疫原性研究进展被引量：5
- 2009年
- 朱宏斌杨向民陈志南
- 关键词：治疗性单克隆抗体免疫原性研究单抗人源化单克隆抗体
- 人源噬菌体Fab抗体库构建过程中引物的优化和初步鉴定被引量：8
- 2004年
- 目的 优化设计一套引物 ,扩增全套人抗体Fd片段和L链基因 ,改善扩增效率 ,益于人源噬菌体抗体库的构建。方法 根据V BASE数据库提供的人抗体可变区胚系基因 ,在其家族分类基础上 ,根据FR1区 5’端保守序列重新分组 ,设计特异性的 5’端扩增引物。同时对设计引物的匹配情况进行分析 ,并应用PCR扩增和测序反应对其扩增效果进行鉴定。结果 Fd链 5’端扩增引物有 5条 ,κ轻链有 6条 5’端扩增引物 ,而λ轻链 5’和 3’扩增引物有 10条。分析表明 ,人抗体可变区胚系基因与 5’引物有较好的匹配率 ,数目较少 ,匹配率较高。PCR结果显示 ,全部的重链及轻链引物对均能高效扩增出特异性较高的目的片段。测序结果表明PCR扩增产物具有较好的亚类和可变区家族分布。结论 优化了一套扩增全套人抗体Fd片段和L基因的引物 。
- 包国强马庆久邢金良杨向民陈志南
- 关键词：抗体库FAB引物
- 医学细胞生物学启发互动式教学探索与实践被引量：3
- 2012年
- 细胞生物学是生命科学的重要支柱,是生命科学最重要的基础学科之一。启发互动式教学对于学生理解和掌握所学内容有着重要意义,如何开展细胞生物学教学中进行启发互动式教学,并结合教学实例对怎样合理使用这些方法进行详细的阐述。
- 杨向民
- 关键词：细胞生物学互动式教学
- 用导向选择链更替技术建立抗肝癌抗原HAb18G的人源性Fab基因库被引量：2
- 2004年
- 目的 :在嵌合HAb18 Fab抗体的基础上 ,利用载体pComb3X ,采用导向选择链更替技术建立全人源性Fab基因库。方法 :用RT PCR自肝癌患者外周血单个核细胞 (PBMC)中 ,扩增全套人抗体Fd基因片段和L链基因。首先 ,将Fd基因克隆入已含嵌合L链基因的展示载体pComb3X/CL中 ,建立人 -鼠杂合的Fab基因库 ,以原核表达的非融合HAb18G的胞外区片段为抗原 ,筛选杂合的Fab基因 ,以得到人Fd基因。然后应用筛选出的Fd基因与人L链基因库配对 ,建立全为人Fab的基因库 ,并筛选全人Fab基因。将IPTG诱导的表达菌裂解 ,取其上清对pⅢ Fab融合蛋白的功能进行分析 ,并对其编码基因进行测序。结果 :建立了库容为 2× 10 7的杂合Fab基因库 ,经 6轮筛选后得到 7株杂合Fab基因。利用筛选的人Fd基因建立了库容为 0 .8× 10 7的全人Fab基因库 ,经 4轮筛选得到 2株亲和力较高、特异性强的人Fab基因。测序结果显示 ,2株Fab基因具有相同的Fd基因序列 ,与亲本抗体同属IgG2亚类 ;L链基因为κ型 ,可变区均属于Vκ3家族。结论 :利用导向选择链更替技术 ,筛选出特异性较强、完全人源化的抗肝癌抗原HAb18G的Fab抗体 ,为进一步的工作打下了基础。
- 包国强马庆久邢金良杨向民陈志南
- 关键词：人源化肝癌
- 一株新的针对亲环素A的单域抗体抑制荷人RA滑膜-正常软骨免疫缺陷鼠嵌合体模型滑膜炎症和软骨侵蚀的研究
- 类风湿关节炎是一种常见慢性、自身免疫病,其病理特点为大量炎性细胞在滑膜的浸润和在滑液的渗出,由此导致滑膜增生、血管翳形成,最终造成关节软骨破坏.RA的病因及发病机制仍不清楚,目前治疗RA的生物制剂主要是以炎性细胞因子和炎...
- 汪莉贾俊峰王聪华马小魁廖成功付之光王彬杨向民朱平李郁陈志南
- 关键词：类风湿关节炎亲环素A单域抗体
- 嵌合轻链为模板导向筛选人源性抗肝癌抗体重链Fd片段被引量：1
- 2004年
- 目的:利用噬菌体抗体库和导向选择技术,以抗HAb18G嵌合抗体轻链为模板,筛选人源性抗肝癌抗体Fd片段。 方法:利用RT-PCR自肝癌患者外周血淋巴细胞中扩增全套人抗体重链Fd基因片段,克隆入含嵌合L链的展示载体 pComb3X,建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库。然后,利用大肠杆菌表达的非融合HAb18GE为抗原进行亲和筛选,利用pⅢ 融合抗体的形式进行克隆鉴定,并对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测。结果:构建成功库容量为2×107PFU的杂合 人-鼠噬菌体抗体库,利用非融合表达的HAb18GE进行6轮筛选。ELISA及流式细胞仪检测,其中7个克隆呈特异性阳性反 应。其中克隆AP6-2和AP6-7亲和力较高,测序显示其基因序列相同,且与亲本抗体恒定区序列相同,属IgG2亚类,可变区属 VH3家族。结论:通过本实验,利用嵌合轻链为模板,进行Fd片段替换,成功筛选到人源性抗体Fd片段。
- 包国强马庆久邢金良杨向民陈志南
- 关键词：噬菌体抗体库轻链肝癌重链人源性片段
