朱宝娥
- 作品数：3 被引量：38H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用基因工程方法制备新型重组人肿瘤坏死因子-α被引量：14
- 2002年
- 目的 应用基因工程技术 ,制备一种新型的重组人肿瘤坏死因子 α (novelrecombinanthumantumornecrosisfactor α ,nrhTNF α) ,并对其生物学活性、理化性质进行鉴定 ,为进入临床前研究提供基础。方法 应用PCR技术 ,将hTNF α基因的 5′端 17个氨基酸的编码序列删除 ,基因中Pro8Ser9Asp10 的编码序列用Arg Lys Arg的编码序列取代 ,同时Leu157的密码子被Phe的密码子所取代。将hTNF α突变基因 ,插入原核高效表达载体pBV2 2 0中 ,构建高表达工程菌株。纯化表达产物 ,对连续 3批制备的新型rhTNF α,按人用《重组DNA制品质量控制要点》检定要求进行鉴定。结果DNA序列分析和蛋白质N末端、C末端部分氨基酸序列分析表明 ,nrhTNF α与天然的hTNF α相比较 ,N末端缺失了 7个氨基酸 ,13位氨基酸为Arg Lys Arg ,其后为天然hTNF α 11位以后的氨基酸。 15 7位Leu的密码子被Phe的密码子所取代。产物表达量占菌体蛋白的 6 7.4 %。经 (NH4) 2 SO4沉淀、Q SepharoseF .F .及S SepharoseF .F .柱层析分离纯化后 ,产品的纯度达 99% ,比活性达 1× 10 9IU/mg蛋白。结论成功地制备了nrhTNF ,对连续 3批制备的nrhTNF α按人用《重组DNA制品质量控制要点》检定要求进行鉴定 。
- 张英起赵宁李波刘磊王增禄朱宝娥颜真苏成芝
- 关键词：重组人肿瘤坏死因子-Α基因表达大肠杆菌
- 热休克蛋白CpkB对nrhTNF体外复性的促进作用被引量：1
- 1999年
- 目的：探讨嗜热菌热休克蛋白CpkB在体外与新型重组人肿瘤坏死因子（nrhTNF）蛋白质复性的关系．方法：在原核细胞中表达并纯化CpkB蛋白;将nrhTNF在8mol／I-W中变性，然后在不同浓度的CpkB存在下进行体外复性，以复性后nrhTNF活性检测指标进行分析结果：在一定浓度下CpkB对nrhTNF的复性有明显的促进作用，最高复性率达到75％，而不使用CpkB的nrhTNF复性率最高仅引％结论：CpkB具有分子伴侣作用，可促进变性蛋白恢复正常结构与功能。
- 颜真张英起王俊楼赵宁朱宝娥苏成芝
- 关键词：肿瘤坏死因子复性
- 胸腺素α_1 基因的克隆表达及其生物活性被引量：23
- 2001年
- 胸腺素α1(thymosinalpha 1 ,Tα1)作为一种免疫增强剂 ,临床用途广泛 .为大量制备Tα1,按大肠杆菌惯用密码子合成Tα1基因 ,克隆于质粒pUC1 9的EcoRⅠ和PstⅠ位点 .经测序证明序列正确后 ,串联为 4串体 (Tα1④ ) ,经再次测序确认后克隆入pThioHisA的EcoRⅠ和PstⅠ位点 .转化大肠杆菌T0P1 0 ,酶切鉴定正确后 ,经 1mmol LIPTG诱导 4h ,获得硫氧还蛋白与Tα1④的融合表达 ,用离子交换层析纯化融合蛋白 .溴化氰裂解融合蛋白 ,释放出Tα1单体 ,经离子交换色谱纯化出Tα1.采用3 H TdR参入法进行生物活性测定 ,证实融合蛋白和Tα1均具有刺激小鼠脾淋巴细胞分裂增殖的能力 .
- 石继红张英起赵永同赵宁朱宝娥颜真韩苇
- 关键词：胸腺素Α1基因克隆蛋白质纯化生物活性
