孙立霞
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响及机制被引量：2
- 2013年
- 目的:研究锌离子(Zn)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转分化(EMT)的影响及机制,从而为Zn在腹膜透析(PD)中的应用提供理论基础。方法:胰蛋白酶消化法原代培养腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组:(1)正常对照组;(2)LPS组:100μmol/L作用48h;(3)ZnSO4作用组:30μmol/L ZnSO4作用24h后加100μmol/L LPS作用48h。应用RT-PCR方法和免疫荧光方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)基因表达。应用Western Blotting检测核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制蛋白(I-κB)、磷酸化的NF-κB(p-NF-κB)、磷酸化的I-κB(p-I-κB)蛋白表达;应用流式细胞术,采用活性氧自由基(ROS)检测试剂盒检测各组别的ROS情况。结果:LPS培养48h后细胞形态开始发生变化,由典型的上皮逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞,而硫酸锌(ZnSO4)作用组细胞表型改变明显减轻。与对照组相比,LPS组RPMC的α-SMA、CollagenⅠ基因表达明显升高,而E-cadherin基因表达降低;与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC的α-SMA、CollagenⅠ表达明显降低、E-cadherin基因表达增多;LPS组ROS显著高于对照组,ZnSO4作用组ROS显著低于LPS组;与LPS组相比,ZnSO4作用组p-NF-κB、p-I-κB蛋白表达降低。结论:ZnSO4可逆转LPS所致的RPMC的EMT,对腹膜透析过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制氧化应激反应和NF-κB信号通路转导而发挥作用。
- 张秀丽梁单樊怡孙立霞杨丽娜王力宁马健飞
- 关键词：脂多糖转分化
- 高糖对腹膜间皮细胞β-连环蛋白及骨桥蛋白表达的作用被引量：4
- 2012年
- 目的观察高糖对大鼠腹膜间皮细胞(ratperitoneal mesothelial cell RPMC)中β-连环蛋白(β-Catenin)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)2者mRNA及蛋白表达的影响。方法胰蛋白酶法行RPMC的原代培养和传代,经鉴定第3代细胞融合至80%时分组。分为:正常对照组;不同浓度葡萄糖(1.5%,2.5%,4.25%)组作用24h;2.5%高糖作用不同时间(8,12,24,34,48h)组,细胞免疫组织化学法检测β-Catenin蛋白在细胞上的表达情况,RealTime-RT-PCR技术检测β-Catenin、OPN、TGF-β1mRNA的表达。ELISA法检测OPN蛋白表达。结果高糖刺激下RPMC的β-catenin表达增加,与0h组比较,在8h即出现(但不具有统计学意义),12h具有统计学意义,24h达到高峰,48h仍存在,组间差异均有统计学意义(P<0.05);高糖可刺激RPMCOPN的表达显著增加,呈剂量、时间依赖性(P<0.05);TGF-β表达增加,在8h表达于较高水平,12h降低,24h达到高峰,48h仍存在,与0h组比较,组间差异均有统计学意义(P<0.01);高糖刺激下,β-Catenin、TGF-β1表达显著增加,呈剂量依赖性,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论高糖通过上调β-Catenin、OPN的表达,引起腹膜损伤导致腹膜纤维化,β-Catenin、OPN参与了腹膜间皮细胞透析相关性腹膜纤维化的病理过程。
- 霍爱晶马健飞杨丽娜孙立霞王力宁
- 关键词：高糖腹膜间皮细胞Β-连环蛋白骨桥蛋白转移生长因子-Β
- MG132对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞ERK1／2及结缔组织生长因子表达的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨在高糖作用下泛素蛋白酶体途径（UPP）对大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）、结缔组织生长因子（CTGF）蛋白表达的影响，并用蛋白酶体抑制剂MG132为阻断剂，探讨泛素蛋白酶体途径在腹膜纤维化中的作用。方法胰蛋白酶消化法原代和传代培养RPMC，经鉴定后第2代用于实验。随机分为对照组、不同浓度葡萄糖组（1．5％、2．5％、4．25％葡萄糖作用24h）、高糖作用不同时间组（2．5％葡萄糖分别作用于RPMC0、12、24、48h）和MG132组（0．5、1、2umol／LMG132预孵30min后加2．5％葡萄糖作用24h）。Western印迹法检测ERK1／2蛋白的表达。ELISA法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的含量。结果与对照组相比，高糖可刺激RPMC磷酸化（P）ERKI／2蛋白表达上调，24h时达高峰（P〈0．01），48h时下调，但仍高于正常组（P〈0．01）。高糖诱导RPMCCTGF蛋白表达增高，且呈时间、剂量依赖性（P〈0．05）。与高糖组相比，MG132能明显降低高糖所致的腹膜间皮细胞p-ERK1／2、CTGF蛋白的表达（P〈0．05）。结论MG132可降低由葡萄糖诱导的腹膜间皮细胞p-ERK1／2、CTGF蛋白的表达；泛素蛋白酶体途径参与了由高糖诱导的腹膜纤维化，阻断泛素蛋白酶体途径有利于防治腹膜纤维化。
- 邓文艳马健飞樊怡孙立霞杨丽娜
- 关键词：丝裂原激活蛋白激酶类腹膜间皮细胞高糖MG132
- 水飞蓟宾对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞整合素连接激酶、转化生长因子β1及α平滑肌肌动蛋白表达的影响被引量：2
- 2013年
- 目的研究水飞蓟宾对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）整合素连接激酶（ILK）、转化生长因子β1（TGF—β1）及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。方法胰蛋白酶消化法原代及传代培养RPMC，经鉴定后第2代用于实验。细胞随机分组：（1）正常对照组；（2）高糖组：不同质量浓度的葡萄糖（1．5％、2．5％、4．25％）作用24h；2．5％葡萄糖分别作用RPMC12、24、48、72h；（3）水飞蓟宾组：不同质量浓度的水飞蓟宾（5、10、20mg／L）预孵育2h，加入2．5％葡萄糖再作用24h。实时定量PCR检测ILK及α-SMA mRNA的表达。Western印迹法检测ILK蛋白表达。ELISA法检测细胞培养上清液中TGF—β1的表达。结果与正常对照组相比，高糖可以刺激RPMCILK及α-SMAmRNA的表达增高（均P〈0．05）；高糖诱导RPMCILK及TGF-β1蛋白的表达增高（均P〈0．05）；与高糖组相比，水飞蓟宾能显著降低高糖所致的RPMCILK、TGF-β1及d．SMA的高表达（均P〈0．05）。结论高糖可上调RPMCILK、TGF—β1及α-SMA的表达；水飞蓟宾可以抑制高糖所致的RPMCILK、TGF-β1及α—SMA的高表达。
- 孙立霞马健飞樊怡杨丽娜邓文艳王力宁
- 关键词：细胞转分化整合素连接激酶转化生长因子Β1Α平滑肌肌动蛋白
- 水飞蓟宾对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞整合素连接激酶、TGF-β_1及α-SMA表达的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:研究水飞蓟宾(SB)对脂多糖(LPS)作用下大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)整合素连接激酶(ILK)、转化生长因子β1(TGF-β1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响。方法:胰蛋白酶消化法原代及传代培养RPMC,经鉴定后第2代用于实验。细胞随机分组:(1)正常对照组;(2)不同浓度的LPS(1mg/L、10mg/L、100mg/L)作用24h组;(3)不同时间LPS组:10mg/LLPS分别作用于RPMC12h、24h、48h、72h;(4)水飞蓟宾组:不同浓度的SB(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)分别预孵育2h,加入10mg/LLPS再作用24h。实时定量PCR检测ILK及α-SMAmRNA的表达;Western印迹法检测ILK蛋白表达;ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1的表达。结果:与正常对照组相比,LPS可刺激RPMCILKmRNA和蛋白的表达增高,且在一定范围内呈时间和剂量依赖性(P<0.05);LPS诱导RPMCα-SMAmRNA呈时间和剂量依赖性表达增高(P<0.05);LPS诱导RPMCTGF-β1蛋白表达升高,呈现时间和剂量依赖性(P<0.01);水飞蓟宾组能浓度依赖性地降低LPS所致的RPMCILK、TGF-β1及α-SMA的表达(P<0.05),随水飞蓟宾浓度的增加,抑制作用越强。结论:LPS可以上调RPMCILK、TGF-β1及α-SMA的表达;水飞蓟宾可以抑制LPS所致的RPMCILK、TGF-β1及α-SMA的过度表达。ILK参与了腹膜透析相关性腹膜炎腹膜纤维化的病理过程,水飞蓟宾对腹膜透析相关性腹膜炎具有一定的抑制作用,并具有抑制腹膜纤维化的作用。
- 孙立霞马健飞樊怡杨丽娜邓文艳王力宁
- 关键词：腹膜间皮细胞脂多糖整合素连接激酶Α-平滑肌肌动蛋白
- 高糖对大鼠腹膜间皮细胞整合素连接激酶、结缔组织生长因子及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响被引量：2
- 2013年
- 目的研究高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells,RPMC)整合素连接激酶(integrin liked kinase,ILK)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达的情况,为防治腹膜透析相关性腹膜纤维化提供新的思路。方法胰蛋白酶消化法原代及传代培养RPMC,经鉴定后第2代用于实验。细胞随机分组:①正常对照组;②高糖组:不同浓度的高糖(1.5%、2.5%、4.25%)作用24h;2.5%高糖分别作用RPMC12h、24h、48h、72h。实时定量PCR检测ILK及α-SMAmRNA的表达。Western印迹法检测ILK蛋白的表达。ELISA法检测细胞培养上清液中CTGF的表达。结果与正常对照组相比,高糖可刺激RPMCILK及α-SMA的表达增高(均P<0.05),高糖诱导RPMCCTGF的表达增高(P<0.05)。结论高糖可上调RPMCILK、CTGF及α-SMA的表达。ILK及CTGF参与了高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞腹膜纤维化过程,为防治腹膜透析相关性腹膜纤维化提供新的思路。
- 孙立霞马健飞邓文艳
- 关键词：腹膜间皮细胞高糖整合素连接激酶结缔组织生长因子
