吴星星
- 作品数：8 被引量：14H指数：2
- 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪圆环病毒Ⅱ型新疆分离株全基因组及ORF2基因的克隆与测序
- 2010年
- 根据GenBank中已发表的猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)全基因组序列,设计合成了2对特异性引物。将PCV2新疆分离株(PCV2-XJ)用PK15细胞培养数代,从细胞培养物中提取病毒总DNA,并取其作为模板,PCR扩增出病毒全基因和结构基因(ORF2)。将PCR回收产物克隆到pMD18-T载体,成功构建了重组质粒pMD18-TPCV2和pMD18-T-ORF2,并对筛选出的阳性质粒进行测序。应用序列分析软件对测序结果分析可知,克隆得到的PCV2-XJ基因组全长1 768 bp。通过序列分析结果显示,PCV2-XJ与国内外PCV1、PCV2参考毒株的核苷酸同源性分别为99.5%～99.7%和68.7%;与HuB08(FJ041151)参考株核苷酸同源性最高(99.7%)。PCV2-XJ株ORF2基因与参考株核苷酸和氨基酸同源性分别高达99.3%和98.8%。
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- 关键词：基因组克隆
- 牛病毒性腹泻病毒通用型RT-PCR检测方法的建立被引量：7
- 2012年
- 为建立一种快速、特异、简便的检测牛病毒粘膜腹泻病病毒Ⅰ、Ⅱ型抗原的通用RT-PCR方法,根据GenBank上已发表的牛病毒性粘膜腹泻病毒(BVDV)Ⅰ、Ⅱ型5’端非编码区保守序列设计合成了两条引物,其中上游引物为兼并引物。应用一步法RT-PCR技术分别对Ⅰ(Oregon C24V)、Ⅱ型(279)标准株进行扩增,将PCR产物胶回收后连与pMD18-T载体,经PCR、酶切鉴定条带均正确(288bp),测序结果与预期一致。同时设牛疱疹病毒Ⅰ型、牛传染性鼻气管炎、猪瘟病毒、蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、MDBK细胞作对照,结果均为阴性;并对新疆各地州的样品进行检测。优化反应条件后,检测其灵敏度为10-1 TCID50/mL。经对400份临床样品检测,阳性检出率为10.75%,明显高于ELISA检测。试验表明,该方法具有特异、灵敏、高效、快速、重复性好等特点,可用于牛病毒粘膜腹泻病的临床检测及流行病学检测。
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- 关键词：一步法RT-PCR
- 牛病毒性腹泻病毒E0基因原核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2012年
- 采用RT-PCR方法,利用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)C24V株接种MDBK细胞,提取病毒RNA,扩增出BVDV-E0基因,将所得片段与pET-28a表达载体连接,转化至BL-21大肠杆菌中,筛选阳性克隆,鉴定后证明pET-28a-E0原核表达载体构建成功。经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定,鉴定结果表明,目的蛋白在大肠杆菌中得以表达。
- 王璐郭春娟吴星星宫玉玲季新成冉多良
- 关键词：克隆原核表达
- 猪2型圆环病毒新疆株全基因组的克隆与序列分析
- 2012年
- 根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)的核苷酸序列,设计了一对引物,采用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪组织病料中扩增出一株PCV2全基因组,将其克隆到pMD simple18-T载体上,筛选获得了重组质粒pMD18-T-PCV2。对此重组质粒进行序列测定及同源性分析,结果表明,该PCV2新疆株的全基因组大小为1 767bp,与其它PCV2核苷酸序列同源性为95.0%～99.6%,而与PCV1的同源性仅为76.8%～76.9%。
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- 关键词：猪2型圆环病毒全基因组
- 猪圆环病毒2型新疆株的分离鉴定及感染性克隆的构建
- 猪圆环病毒2型(Porcinecircovirustype2,PCV2)被认为是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)的主要病原。该病毒可...
- 吴星星
- 关键词：猪圆环病毒2型全基因组序列感染性克隆
- 文献传递
- 猪圆环病毒Ⅱ型ORF1基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2011年
- 根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)ORF1基因序列,设计合成了一对引物,扩增出PCV2新疆株ORF1基因片段。将扩增出的ORF1基因(945 bp)插入到pMD18-T载体中,筛选获得重组质粒,命名为pMD18-ORF1。将ORFl酶切产物亚克隆到原核表达载体pET-32a中,获得重组质粒,命名为pET-32a-ORF1。用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE检测,结果显示PCV2-ORF1在pET-32a中获得了高效融合表达,其表达蛋白分子量约为54 kDa,Western blotting分析结果表明,获得的融合蛋白可与PCV2阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性。
- 曾朔吴星星冉多良陈丽娟胡雯婷
- 关键词：PCV克隆原核表达
- PRRSV新疆株N基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank上已发表的毒株,设计了一对引物扩增PRRSV新疆株N基因片段;将N基因克隆到pMD18-T,在亚克隆到pGEX-6p-1原核表达载体上,构建重组质粒pGEX-6p-N;在37℃条件下,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达4 h后,获得了可溶性融合蛋白;经SDS-PAGE电泳检测和Western blotting分析,该融合蛋白分子量约为39 kDa,与预期结果一致,并能与PRRSV阳性血清发生特异性反应,且非特异性背景很低。
- 王传锋马伟张伟薛英吴星星冉多良
- 关键词：PRRSVN基因克隆原核表达
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2011年
- 在最佳条件下,通过对重组质粒pGEX-6P-N进行诱导表达,并利用Glutathione Sepharose 4B亲和吸附柱对表达产物(重组N蛋白)进行纯化。用重组N蛋白作为包被抗原,通过对相关条件进行优化(如抗原包被量,血清稀释度,酶标二抗最佳工作浓度,底物作用时间等),确定判定标准,最终初步建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。用建立的间接ELISA方法检测360份血清样品,并与IDEXX公司研制的ELISA试剂盒检测的结果相比较,批内重复性试验变异系数均值为1.52%,批间变异系数为6.17%,符合率达92.5%,试验表明,建立的间接ELISA检测方法具有良好的重复性和特异性,可用于PRRSV血清抗体的检测。
- 沙娜瓦尔.塔希王传锋买买提艾力.斯迪克张伟茹鲜古丽.木明吴星星冉多良
- 关键词：重组质粒重组N蛋白猪繁殖与呼吸综合征病毒间接ELISA检测方法
