季新成
- 作品数：65 被引量：192H指数：7
- 供职机构：国家质量监督检验检疫总局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学理学更多>>
- 幼虫芽孢杆菌和蜂房蜜蜂球菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
- 2018年
- 为快速鉴别诊断蜜蜂美洲幼虫腐臭病(American foulbrood,AFB)和欧洲幼虫腐臭病(European foulbrood,EFB),本研究根据Gen Bank中登录的幼虫芽孢杆菌(Paenibacillus larvae)和蜂房蜜蜂球菌(Melissiciccus pluton)16S r RNA基因序列分别设计特异性引物和探针,建立了双重Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法与其他病原无交叉反应;对P.larvae和M.pluton的检测灵敏度均达10 copies/μL的阳性质粒;重复性试验结果显示批内、批间变异系数均小于2%。应用该方法对200份实验室模拟样品和200份临床样品进行了检测,与预期结果一致。本研究建立的方法可用于AFB与EFB的快速鉴别诊断和早期监测,以及蜂产品中P.larvae和M.pluton的定量分析。
- 何晓杰王科珂叶尔保勒阿斯喀张婕妤哈森季新成王振宝
- 关键词：美洲幼虫腐臭病欧洲幼虫腐臭病
- 新疆地区牛新孢子虫病血清抗体检测及结果分析被引量：4
- 2011年
- 为了解新疆地区牛新孢子虫病的流行情况,用ELISA方法对采自新疆6个地区327份的牛血清进行了新孢子虫病的抗体检测,并以第一次检测结果为依据,对20头牛进行了5次连续采样检测,每次间隔30～40天。检测结果表明,该病在新疆不同地区都有不同程度的发生和流行,平均阳性率为24.5%,且在年龄大和流产牛群中阳性率偏高,血清抗体阳性持续时间至少半年以上。
- 刘小兰张军张玲季新成
- 关键词：血清抗体ELISA检测
- 牛病毒性腹泻病毒不同检测方法的比较研究被引量：11
- 2009年
- 采用Idexx公司抗原捕获ELISA试剂盒对新疆部分地区160份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒抗原检测,结果有6份样品为阳性,对该6份血清用BVDV阴性血清进行了系列稀释后,分别用抗原捕获ELISA、RT-PCR和荧光RT-PCR进行检测,发现RT-PCR方法比ELISA检测灵敏度高10-100倍,荧光RT-PCR比RT-PCR灵敏度高约10-100倍。
- 季新成曾新强员丽娟牛国辉于学辉段晓东王大孝
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒RT-PCR荧光RT-PCR
- 牛病毒性腹泻病毒TC株的分离鉴定及E0基因的序列分析被引量：14
- 2016年
- 从新疆塔城地区某牛场采集患病犊牛全血,将RT-PCR方法鉴定为牛病毒性腹泻病毒（BVDV）阳性的样品接种到MDBK细胞,传代至第4代,出现典型病变（CPE）。通过间接免疫荧光试验,证明该分离病毒为BVDV,命名为BVDV-TC。设计引物对E0基因进行扩增和序列分析。所得片段与GenBank上已发表的BVDV毒株核苷酸序列的同源性为69.3%~93.8%,氨基酸同源性为73.6%~97.8%,TC株的遗传距离与VEDEVAC株最接近。BVDV-TC是第一个在新疆地区报道的1b亚型BVDV毒株,为新疆地区BVDV感染的防控提供依据。
- 梁霄勇季新成冉多良
- 关键词：E0基因
- 加速溶剂萃取–液相色谱法测定五灵脂药材中原儿茶酸的含量
- 2013年
- 建立了五灵脂中原儿茶酸含量的测定方法。利用加速溶剂萃取仪（ASE），以75％乙醇水溶液提取样品中的待测物，用Diamosil C18（4．61mm×250mm，5．0μm）色谱柱在梯度洗脱条件下分离待测物，外标法定量。原儿茶酸的线性范围为0．1—10．0mg／L，相关系数r=0．9998。方法的回收率为83％～107％，测定结果的相对标准偏差为4．6％～10．5％，方法的定量限为1．0mg／kg。该方法操作简便、快速，提取效率高，适用于检测和分析五灵脂中原儿茶酸的含量。
- 巩志国苏敏王静静员丽娟李世雨季新成朱建民
- 关键词：五灵脂原儿茶酸液相色谱
- 牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定被引量：12
- 2010年
- 【目的】为了解牛病毒性腹泻/黏膜病在新疆的流行现状,对疑似该病病料进行地方毒株的分离,并对其进行鉴定。【方法】将采自新疆不同地区疑似牛病毒性腹泻的病料接种MDBK细胞,并盲传2-4代;对分离株进行毒力测定及中和试验,应用RT-PCR方法扩增分离株的5’UTR基因片段并克隆测序分析。【结果】分离到的8株病毒可发生细胞病变,在MDBK细胞上的TCID50为103-106。毒株血清中和实验结果,RT-PCR反应结果,克隆后重组质粒经BamHI、HindIII双酶切鉴定、重组质粒PCR鉴定结果均得到预计扩增片段。重组质粒测序结果与GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒NADL株序列同源性为82.0%-94.8%。【结论】证实所分离到的病毒为BVDV,命名为B-S-1、B-S-2、B-S-3、B-S-4、B-S-5、B-S-6、B-G-1和B-G-2。
- 牛国辉季新成段晓东晁群芳
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒血清中和试验RT-PCR基因序列分析
- 牛新孢子虫内标多重PCR检测方法的试验被引量：2
- 2012年
- 本试验以牛新孢子虫NcSAG1基因、Nc-5基因和NcSRS2基因作为检测新孢子虫病的目的基因,以牛性腺(prolac-tin)基因作为内标对反应过程进行监测,对上述基因各设计1对引物。结果表明,4对引物可分别扩增出201bp、231bp、256bp和156bp的目的条带。经反应条件的优化,该方法具有较好的灵敏度,各质粒在103 copies/反应时,均可于同一管中扩增出较清晰的目的条带,只比单重PCR的灵敏度低了10倍,且不受内标模板存在的影响。经临床应用研究,该方法具有较好的特异性和重复性,可用来对新孢子虫进行快速准确的检测。
- 唐慧芬季新成于学辉
- 关键词：新孢子虫病多重PCR内标
- 猪瘟流行毒株E2基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建被引量：3
- 2004年
- 用RT PCR方法扩增了陕西省近期猪瘟流行野毒株E2基因 ,并将其克隆到 pMD 18 T载体 ;经转化、筛选、鉴定后 ,测定了核苷酸序列 ,根据C株、Brescia株和Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行 gp5 5氨基酸序列推导 ,并进行同源性比较。结果表明 ,该猪瘟流行毒株的E2核苷酸序列与C株、Brescia株和Alfort株的E2核苷酸序列同源性分别为 81.9%、83.4 %和83.5 % ;相应地 ,gp5 5氨基酸同源性分别为 94 .8%、95 .6 %和 95 .3%。将此E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体 pFastBacHTb后获得了重组质粒 pFBHT E2 ,进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中 ,发生转座作用 ;经抗性及蓝白斑筛选得到了含E2基因的重组DNA ,将其命名为rBacmid E2。此研究为进一步在昆虫细胞中表达E2基因、开发研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础。
- 季新成陈杰张彦明吴发兴李晓成黄保续张燕霞许信刚
- 关键词：猪瘟病毒野毒株E2基因重组DNA
- 牛传染性鼻气管炎病毒血清抗体检测试验及结果分析被引量：7
- 2008年
- 采用SYNBIOTICS公司酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒对来自新疆15个不同地区(包括4个养牛场)共635份牛血清进行了牛传染性鼻气管炎病毒血清抗体检测,共检出阳性血清329份,最高感染率达90%,最低感染率为5%,平均感染率为51.8%,结果显示该病已在全疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律。对其中的106份血清用Institute Pourquier公司ELISA试剂盒重新检测,发现两试剂盒的符合率为90.6%,Institute Pourquier公司ELISA检测试剂盒敏感性稍高。从该106份血清中再次随机抽取其中的35份用病毒中和实验(VN)检测方法进行了检测,检测结果与SYNBIOTICS公司ELISA检测试剂盒相比较,同为阳性样品24份,同为阴性样品7份,两者符合率88.6%;与Institute Pourquier公司ELISA检测试剂盒相比较,同为阳性样品24份,同为阴性样品6份,两者符合率85.7%。试验结果表明,与VN相比,ELISA检测试剂盒具有操作简便,敏感性高等优点。
- 季新成王振宝王文陈新民刘晓晖王陆宝
- 关键词：牛传染性鼻气管炎血清抗体ELISA流行病学
- 猪瘟病毒E2基因的扩增及序列分析被引量：3
- 2006年
- 本研究利用RT—PCR技术，对流行于国内部分地区的9株猪瘟病毒（CSFV）E2基因进行扩增，与C-株等4株参考毒株做了同源性比较，绘制了遗传进化关系发生树，结果表明，所测序列共由442个氮基酸残基组成。可将13株CSFV分为两个组群，其E2基因间的核苷酸序列同源性为81．9％～99．7％，所推导氨基酸序列同源性为88．2％～99．5％，其中9株CSFVE2基因的长度均为1324bp，编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和跨膜区序列，9株流行毒株与C-株之间核苷酸序列同源性为81．9％～95．3％。所推导氨基酸序列同源性为88．2％～95．5％。说明近期流行毒株的变异呈现一定的多样性，并且多数毒株已向远离疫菌株方向变异。
- 曲永利季新成王臣员丽娟李毅
- 关键词：猪瘟病毒E2基因扩增
