刘涛
- 作品数：35 被引量：47H指数：4
- 供职机构：天津市第一中心医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市卫生局科技基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 真核表达载体介导的ICOSIg基因在大鼠脂肪间充质干细胞中表达的实验研究被引量：2
- 2020年
- 目的构建含可诱导共刺激分子(ICOS)融合蛋白(ICOSIg)基因的真核表达载体,探讨其能否在大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)中表达。方法克隆编码大鼠ICOS的胞外片段,将其与编码人免疫球蛋白IgG Fc段的基因融合,构建ICOSIg融合基因及其分泌型真核表达载体pcDNA3.1(+)/ICOSIg。经测序鉴定后转染ADSCs,Western blot法检测ICOSIg在ADSCs中的表达。结果经测序鉴定验证pcDNA3.1(+)/ICOSIg质粒构建成功,且能在ADSCs中成功表达。结论ICOSIg在ADSCs中成功表达,为进一步研究免疫耐受机制提供了实验基础。
- 耿洁刘涛姜锦李光黄志伟王玉亮
- 关键词：基因融合可诱导共刺激分子真核表达载体脂肪间充质干细胞
- miR-506对结肠癌细胞增殖和转移活性的影响
- 2023年
- 目的:观察miR-506对结肠癌细胞活性、增殖、转移等恶性表型的影响。方法:以结肠癌细胞系HCT116为模型,以处理方式不同分为pcDNA3空载体对照组、过表达miR-506组、pSIH1空载体对照组及抑制miR-506组。荧光实时定量PCR检测各组中miR-506的表达水平,CCK8实验检测细胞的活性,集落形成实验检测细胞的集落形成能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果:与pcDNA3空载体对照组比较,过表达miR-506后HCT116细胞内miR-506表达水平升高,差异有统计学意义(t=28.97,P<0.05),而细胞活性、集落形成能力、迁移和侵袭的能力减弱,差异有统计学意义(t=6.14、8.63、5.32、3.24,P<0.05);抑制miR-506组与pSIH1组比较,miR-506的相对表达量、细胞活性、集落形成能力、迁移和侵袭能力比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-506抑制结肠癌细胞HCT116活性、集落形成能力、侵袭和迁移能力,在结肠癌细胞中发挥抑癌基因的作用。
- 祖彩华张瑞红刘涛臧静媛曹毅
- 关键词：结肠癌微小RNA肿瘤抑制
- 特异性致敏效应细胞对体外HBV复制影响的研究
- <正>目的探讨转乙型肝炎病毒(HBV)基因的小鼠树突状细胞(DCs)刺激自体淋巴细胞在体外对乙肝病毒复制的影响。方法 1.实验对象选择HBV全基因转基因C57 BL/6J小鼠;细胞株HepG2.2.15细胞。2.实验分组...
- 宋红丽沈中阳郑卫萍刘涛吴本娟杨洋
- 文献传递
- 卡培他滨免疫抑制效应的大鼠实验观察被引量：3
- 2020年
- 目的采用单纯大鼠喂药模型及原位肝移植急性排斥模型,观察卡培他滨(CAP)的免疫抑制效应。方法建立单纯大鼠喂药模型,选取18只成年清洁级雄性BN大鼠,数字随机分为CON组、CAP节拍剂量组(MET组)和CAP足量剂量组(MTD组)。于喂药前、喂药后第7 d、14 d和21d,流式细胞术(FCM)检测外周血T淋巴细胞及其亚群CD4^+和CD8^+T淋巴细胞数目,ELISA检测IL-2和IFN-γ浓度。建立20对Lewis→BN大鼠原位肝移植急性排斥模型,数字随机分为模型.对照组(A组)、他克莫司单药组(B组)他克莫司+节拍剂量CAP组(C组)和他克莫司+足量剂量CAP组(D组)。术后7d处死,流式细胞术(FCM)检测外周血T淋巴细胞及其亚群CD4^+和CD8^+T淋巴细胞数目,ELISA检测IL-2和IFN-γ浓度,HE染色观察移植肝病理变化。结果单纯大鼠喂药模型中,与CON组相比,在14d、21d时,MET组和MTD组中T淋巴细胞、CD4^+和CD8^+T淋巴细胞数目均减少,差异具有统计学意义(P<0.05);IL-2和IFN-γ于给药7 d、14 d和21 d均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。移植排斥模型中,与A、B组相比,术后7 d时,C组和D组的大鼠外周血T淋巴细胞、CD4^+和CD8^+T淋巴细胞数目均降低,RAI指数下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论卡培他滨可降低大鼠外周血T淋巴细胞及其亚群CD4^+和CD8^+T细胞数目,并抑制IL-2和IFN-γ的分泌,具有免疫抑制效应。卡培他滨联用他克莫司可减轻大鼠肝移植术后急性排斥反应强度,预示卡培他滨可能成为一种具有抗肿瘤效应的免疫抑制剂,值得进一步深入探讨。
- 张思睿王政禄刘涛张赛吴迪侯文郑虹
- 关键词：肝移植卡培他滨免疫抑制效应T淋巴细胞
- miR-130b对宫颈癌细胞修复TNF-α诱导性基因组双链DNA断裂作用的影响及机制被引量：4
- 2019年
- 目的观察miR-130b对宫颈癌细胞修复基因组双链DNA断裂作用的影响,并探讨其机制。方法将宫颈癌细胞Siha分成6组,分别转染细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物1A(CDKN1A)基因过表达质粒pc DNA3. 1-CDKN1A(CDKN1A组)、pc DNA3. 1空载质粒(pc DNA3. 1组)、miR-130b mimics (miR-130b组)、miR-130b阴性对照核酸(NC组),共转染pc DNA3. 1-CDKN1A和miR-130b mimics (CDKN1A+miR-130b组)、pc DNA3. 1和miR-130b mimics (pc DNA3. 1+miR-130b组)。TNF-α刺激细胞,用彗星试验测定基因组DNA尾距,流式细胞术测定磷酸化组蛋白2A变异体(γ-H2AX)蛋白; Real-time PCR、Western blotting法检测CDKN1A mRNA及其蛋白。分别将pc DNA3. 1/EGFP、pc DNA3. 1/EGFP-CDKN1A-wtUTR(野生型)、pc DNA3. 1/EGFP-CDKN1A-mutUTR(突变型)与miR-130b mimics或NC共转染Siha细胞,测定报告基因荧光相对活性;以TNF-α和DNA损伤增强剂AZD2461刺激各组细胞,用流式细胞术测定细胞凋亡水平。结果与pc DNA3. 1组比较,CDKN1A组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平降低(P均<0. 05);与NC组比较,miR-130b组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平、细胞凋亡率升高,CDKN1A mRNA、蛋白表达水平下降(P均<0. 05);与pc DNA3. 1+miR-130b组比较,CDKN1A+miR-130b组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平、细胞凋亡率下降(P均<0. 05);与共转染NC细胞相比,共转染miR-130b mimics使野生型细胞荧光相对活性降低(P <0. 05),而未改变突变型细胞荧光相对活性。结论 miR-130b通过直接靶定CDKN1A mRNA抑制其表达干扰宫颈癌细胞修复双链DNA断裂位点,从而促进细胞凋亡。
- 杨磊刘涛段继惠穆红
- 关键词：宫颈癌DNA修复
- 表达microRNA-203tough decoy的慢病毒载体构建及应用
- 2014年
- 目的建立表达microRNA(miRNA)tough decoy(TuD)的慢病毒载体构建方法,并检测其对细胞内miRNA表达水平及细胞表型的影响。方法在慢病毒表达质粒pSIH1-H1-copGFP中通过两步克隆,首先构建miRNA TuD通用骨架质粒,进一步构建特异性针对大鼠miR-203的TuD表达载体。在293T细胞中包装成慢病毒后,感染大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs),同时用pSIH1-H1-copGFP空质粒包装慢病毒,感染BM-MSCs作为对照。定量RT-PCR检测细胞中miR-203的水平变化,并用CCK-8法和Annexin V-PI双标记法分别检测BM-MSCs的活性和凋亡。结果成功构建了基于pSIH1-H1-copGFP质粒的miR-203 TuD表达载体,并对其序列进行了验证。用表达miR-203 TuD的重组慢病毒感染BM-MSCs后第3、6、9天检测细胞内源性miR-203表达水平降低,同时细胞活性增高,凋亡比例降低,与对照组相比差异有统计学意义。结论两步克隆法构建miRNA TuD表达载体是一种简便高效的方法,其表达产物能够有效抑制细胞内源性miRNA水平,同时影响细胞表型。
- 刘涛王玉亮宋红丽付楠楠吴本娟沈中阳
- 关键词：间质干细胞慢病毒属微RNASTOUGHDECOY
- HO-1修饰的BMMSC对大鼠小肠移植免疫功能的影响被引量：3
- 2018年
- 目的探讨在小肠移植排斥反应中血红素加氧酶-1(HO-1)是否能增强骨髓间充质干细胞(BMMSC)对移植免疫功能的影响。方法建立异位大鼠小肠移植排斥反应模型,实验分为生理盐水组(NS)、BMMSC组和HO-1/BMMSC组,经阴茎背静脉给予输注BMMSC和HO-1/BMMSC,观察术后各组移植小肠组织病理、调节T细胞(Tregs)、自然杀伤细胞(NK)及细胞因子的改变。结果小肠移植急性排斥反应模型组术后5天发生轻至中度的急性排斥反应,术后7天发生中至重度的急性排斥反应,术后第10天发生重度的急性排斥反应。HO-1/BMMSC处理组与BMMSC处理组相比,显著提高了BMMSC保护移植小肠的作用;并且NK细胞活性显著下降而Tregs水平显著升高;细胞因子白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)显著上升而白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-23(IL-23)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及γ-干扰素(IFN-γ)则显著降低。结论 HO-1/BMMSC能够更好地发挥移植免疫抑制作用,HO-1可增强BMMSC抑制小肠移植急性排斥反应大鼠体内免疫功能的作用。
- 宋红丽杨洋尹明丽郑卫萍刘涛董冲沈中阳
- 关键词：小肠移植急性排斥反应血红素加氧酶-1
- 内含子源性长链非编码RNA SOS1-IT1对肝癌细胞的调控被引量：1
- 2021年
- 目的探寻内含子来源的长链非编码RNA(lncRNA)SOS1-IT1对肝癌细胞的影响及分子机制。方法用人肝癌细胞系QGY-7703作为细胞模型,CCK-8实验检测细胞活性,EdU实验检测细胞DNA复制活性。生物信息学预测RNA序列中的miR-124潜在结合位点(MRE)。用真核表达质粒pcDNA3.1(+)作为SOS1-IT1及其MRE,以及miR-124的过表达载体。将MRE克隆插入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的编码区下游,构建荧光报告基因质粒。荧光报告基因实验检测miR-124对MRE序列的特异性结合和调控。结果在人肝癌QGY-7703细胞系中,过表达lncRNA SOS1-IT1能够增强细胞的活性[(1.184±0.114)vs.(0.928±0.104),P<0.05]并加速DNA复制[(0.625±0.013)vs.(0.206±0.016),P<0.05],抑制SOS1-IT1则降低细胞活性[(0.648±0.062)vs.(0.870±0.091),P<0.05]并减缓DNA复制[(0.126±0.022)vs.(0.271±0.033),P<0.05]。生物信息学预测发现,SOS1 mRNA及SOS1-IT1分别包含3个和1个潜在的miR-124的MRE。荧光报告基因实验确定,SOS1 mRNA的前2个MRE,以及SOS1-IT1的MRE均为miR-124的有效结合位点。用包含SOS1-MRE的荧光报告基因质粒转染QGY-7703细胞,同时表达SOS1-IT1的MRE能够增强荧光强度[(3.68±0.315)vs.(2.71±0.180),P<0.05]。进一步过表达miR-124后,荧光强度发生回落[(1.09±0.143)vs.(4.04±0.079),P<0.05]。若将任意一个MRE序列突变,荧光强度不再发生变化[(2.57±0.244)vs.(2.71±0.180);(2.66±0.200)vs.(2.88±0.169),均P>0.05]。结论内含子来源的lncRNA SOS1-IT1能够与宿主基因SOS1竞争性结合细胞内源性miR-124,通过竞争性内源RNA(ceRNA)机制促进SOS1的表达,并促进肝癌细胞的活性和DNA复制。
- 付楠楠刘蕊刘涛
- 关键词：肝细胞癌长链非编码RNA微RNA内含子
- 树突状细胞肿瘤疫苗及其制备方法和用途
- 本发明公开了一种树突状细胞肿瘤疫苗及其制备方法和用途，属于含有抗原或抗体的医药配制品。本发明将带有GPC3基因的质粒与真核表达载体pcDNA-DEST53重组，得到pGFP-GPC3重组质粒，并通过核转染的方式将重组质粒...
- 王玉亮刘涛穆红江雁
- 文献传递
- 反相-高效液相色谱对人体血液和尿液中草酸浓度的测定方法
- 本发明公开了一种反相-高效液相色谱测定人体血液和尿液中草酸浓度的方法，属于用色谱法分析材料领域，本发明包括血液和尿液的预处理、血液和尿液的衍生处理、高效液相色谱操作条件、草酸工作曲线的制备以及血液和尿液中草酸含量的测定。...
- 刘宏胜徐新女吴胜群王玉亮王树森刘涛
- 文献传递
