南京师范大学生命科学学院分子细胞生物学研究所
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
- 相关作者：沈曦于影黄修沦杨洋赵丽更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 143抑制LPS诱导的细胞炎症反应被引量：2
- 2019年
- 机体异常炎症反应与各种疾病的发生息息相关.实验室通过前期工作,筛选出抗炎效果较好的化合物,并将其命名为143.通过LPS诱导RAW264.7细胞和BV2细胞作为炎症细胞模型,用不同浓度的143处理细胞,观察其抗炎效应.用MTS检测不同浓度143对细胞活力的影响,NO试剂盒检测细胞培养上清NO含量的变化,Western blot检测NF-κB p-p65、iNOS、COX-2蛋白的表达情况.结果显示,143在浓度小于10μmol/L时对两种细胞活力没有影响;143在浓度为10μmol/L时能显著抑制细胞上清中NO的含量,并显著抑制细胞中炎症相关蛋白因子NF-κB p-p65、iNOS、COX-2的表达.
- 张广芹马梦娇于晓璐温传俊
- 关键词：炎症反应INOSCOX-2NF-ΚB
- PQQ对巨噬细胞炎症抑制及机制的初步研究被引量：4
- 2017年
- 探讨吡咯喹啉醌(PQQ)对LPS诱导的巨噬细胞炎症因子基因表达的影响及机制.培养RAW264.7细胞、BMDM细胞和THP-1细胞,分为对照组和实验处理组,用MTT方法检测PQQ对细胞增殖的影响,并分别用RT-qPCR和Western Blot检测各炎症因子的基因及蛋白表达情况.PQQ预处理能使LPS诱导的炎症因子表达量下降,并使P-P65蛋白表达下降,Nrf2蛋白表达增加.PQQ预处理降低细胞内炎症反应,这一过程可能通过增加Nrf2表达和抑制NF-κB表达而发挥作用.
- 刘海霞蔡秀丽金冬张广芹温传俊
- 关键词：PQQLPSNRF2NF-ΚB
- 茎-环RT-PCR法定量miRNA-421的引物设计被引量：6
- 2012年
- 本研究旨在通过茎-环RT-PCR法,建立有效定量miRNA-421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA-421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-421,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎-环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎-环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点.
- 赵丽杨洋温传俊
- 关键词：引物设计
- TIMP-1对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制被引量：2
- 2003年
- 构建含人组织金属蛋白酶抑制物TIMP1基因的表达载体 ,以磷酸钙沉淀法转染人肝癌细胞系1 BEL 740 2 ,研究过表达TIMP1对肝癌细胞生长的影响 .本研究首先从正常流产胎儿组织中提取总RNA ,通过RT PCR扩增获得TIMP1基因 ,并克隆到pcDNA6表达载体中 ,经酶切鉴定、序列测定结果正确后 ,转染人肝癌细胞系BEL 740 2 .采用MTT(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法 )、细胞生长曲线等方法 ,经数据统计分析发现 :TIMP1过表达能够抑制肝癌细胞BEL 740
- 郭仕英袁俊沈曦洪建军温传俊赵东红张锡然李朝军
- 关键词：肝癌MTT
- 基于双荧光素酶报告基因系统建立miR-140生物传感器
- 2014年
- 目的:利用双荧光素酶报告基因系统构建可检测miR-140活性的生物传感器。方法:首先,在psiCHECK-2双荧光报告基因质粒的多克隆位点插入miR-140成熟体的4个拷贝反义序列,构建miR-140sensor。其次,将miR-140 sensor和miR-140 mimics共转染HEK-293T细胞,利用双荧光素酶报告基因系统检验miR-140 sensor的功能。最后,转染miR-140 sensor至大鼠骨髓间充质干细胞(rat MSCs),分析在成软骨诱导中miR-140的活性变化,并与miR-140的表达水平相比较。结果:在HEK-293T细胞中,相对于阴性对照组,miR-140 sensor与miR-140 mimics共转能明显降低49%(20 nmol·L-1)和65%(50 nmol·L-1)的荧光活性。将转染miR-140 sensor的rat MSCs成软骨诱导7 d后,荧光活性降低43%,提示miR-140活性升高,与RT-qPCR法检测的miR-140表达水平相一致。结论:构建的miR-140 sensor是一种简单方便有效的miRNA传感器,可用于检测miR-140活性。
- 高原邹阳于影林金德张春丽温传俊沈干
- 关键词：荧光素酶实时荧光定量聚合酶链反应
- 人NRAGE基因启动子转录活性的初步研究
- 2011年
- 利用生物信息学软件搜寻NRAGE启动子区域的转录因子结合位点,并根据这些位点利用PCR技术克隆NRAGE启动子不同区域的缺失突变体,分别插入Luciferase报告载体pGL3-Basic载体中,构成8种缺失突变体的报告基因表达载体.通过双荧光素酶体系检测在HEK-293细胞中NRAGE启动子不同区域的转录活性,从而确定起主要作用的启动子区域.结果发现NRAGE基因转录起始位点上游-300 bp到-100 bp的区域起到主要的转录调控作用.
- 吴寅子张丽温传俊
- 关键词：缺失突变转录活性
- 采用GFP标记技术研究钙调蛋白在活细胞中与细胞周期相关的分布
- ＜正＞采用GFP融合蛋白技术研究胞质分裂时钙调蛋白（CaM）与中区微管结合的特异分布和作用.GFP和CaM的融合基因转染入Hela细胞,表达的融合蛋白可以揭示在特定的细胞时期CaM的分布.使用细胞松驰素B诱导含有GFP-...
- 李朝军
- 文献传递
- NRAGE基因甲基化调控其在乳腺癌细胞中的表达
- 2011年
- 目的:探讨人NRAGE(Neurotrophin receptor-interacting MAGE homologue)基因启动子区CpG岛甲基化状态及其在乳腺癌细胞中的表达调控.方法:用Real-time PCR检测NRAGE在乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中的表达;软件分析NRAGE启动子区是否存在CpG岛;脱甲基化药物5-Aza-CdR处理MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞,半定量RT-PCR法及Western blot法检测用药前后细胞中NRAGE的mRNA及蛋白表达的变化;MSP法检测MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞中NRAGE基因的甲基化状态.结果:NRAGE启动子区存在CpG岛;MDA-MB-231细胞中NRAGE启动子区CpG岛高甲基化,mRNA本底表达水平较低,脱甲基化药物5-Aza-CdR处理后mRNA及蛋白表达水平明显上升;MCF-7细胞中NRAGE启动子区CpG岛未发生甲基化,mRNA本底表达水平比MDA-MB-231细胞高,5-Aza-CdR处理后mRNA及蛋白表达无明显变化.结论:NRAGE基因甲基化可以对其在乳腺癌细胞中的表达进行调控.
- 黄银华黄修沦温传俊
- 关键词：DNA甲基化
- 一种新的咪唑通过AMPK/mTOR途径诱导肿瘤细胞自噬被引量：4
- 2020年
- 自噬与肿瘤的发生有着密切的关系.通过防止受损蛋白质和细胞器的毒性积累,自噬限制氧化应激、慢性组织损伤和致癌信号传导,抑制癌症的发生,这表明了自噬激活在癌症预防和治疗中的作用.研究发现一种新的咪唑,命名为NO.143.利用胰腺癌细胞PANC-1为模型,用MTS检测不同浓度NO.143对细胞活力的影响,共聚焦显微镜观察自噬荧光点,Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、ATG13、p62的表达情况,以及AMPK/mTOR信号通路相关蛋白的表达情况.结果表明,NO.143呈现浓度依赖性地抑制肿瘤细胞的增殖.NO.143能够明显增加细胞中自噬荧光斑点、LC3B表达、ATG13的含量和p62的降解,表明NO.143能够显著上调肿瘤细胞的自噬.进一步研究显示,NO.143能够增加AMPKα的磷酸化水平,降低哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和S6的磷酸化水平.相反的,在抑制AMPKα活性后,这种现象发生逆转.这些结果都可能表明NO.143通过AMPK/mTOR信号传导途径诱导肿瘤自噬,抑制肿瘤细胞的增殖.
- 马梦娇金冬张广芹于晓璐温传俊
- 关键词：自噬肿瘤
