贵州医科大学干细胞研究中心
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
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- 丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂诱导白血病细胞凋亡和自噬分子机制研究被引量：7
- 2018年
- 目的达努塞替(Danu)是一类主要产生激酶抑制作用的吡咯-吡唑类化合物,能有效抑制在细胞有丝分裂中产生关键作用的极光激酶A和B。为了寻找新型靶向小分子药物治疗白血病,本研究探讨小分子丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂Danu对人白血病细胞的周期阻滞、自噬和凋亡的影响及相关机制。方法采用MTT法检测Danu对人髓系白血病细胞株THP-1和红白血病细胞株K562的生长抑制作用;采用流式细胞术检测不同浓度药物处理组的细胞周期、凋亡及自噬情况;采用蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白CDK1/CDC2、CDK2和Cyclin B1的表达情况,凋亡相关蛋白Bcl-xl、Bcl-2、Bax、c-Caspase-3及c-Caspase-9以及自噬相关蛋白p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、Beclin 1、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ的水平。结果 Danu显著抑制THP-1、K562细胞的活性,其中半数抑制浓度(IC_(50))值分别为26.89和32.51μmol/L;Danu可以诱导THP-1、K562细胞周期阻滞,其中THP-1细胞中Danu浓度梯度处理组细胞后G_2/M期百分率与对照组细胞(9.9%)相比增加至(31.3±2.1)%、(35.6±2.7)%、(39.1±1.5)%,F=108.5,P<0.01;K562细胞中G_2/M期百分率与对照组细胞(5.3%)相比分别增加至(5.8±3.6)%、(15.8±1.4)%、(45.1±4.2)%,F=112.1,P<0.01;Danu可抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导细胞自噬,其中,THP-1细胞中对照组自噬率为5.2%,而Danu浓度梯度处理后分别为(10.4±0.5)%、(16.1±1.7)%和(17.1±1.6)%,F=59.5,P<0.01。K562细胞中,细胞自噬率分别为(22.7±0.8)%、(23.0±2.6)%和(24.9±4.1)%,与对照组自噬率6.9%相比显著增高,F=30.17,P<0.01;Danu可以通过线粒体Caspase-3途径诱导细胞凋亡,其中THP-1细胞对照组总凋亡率为5.2%,而Danu浓度梯度处理总凋亡率分别为(10.4±0.5)%、(16.1±1.7)%和(17.1±1.6)%,F=11.8,P<0.001;而在K562细胞组中,与对照组(2.4%)相比,Danu浓度梯度处理总凋亡率分别为(11.3±1.8)%、(16.9±1.35)%、(18.4±2.4)%,F=31.6,P<0.01。结论 Danu可通过抑制极光激
- 何思佳何志旭舒莉萍周志伟
- 关键词：白血病细胞周期细胞凋亡细胞自噬
- 黔东南州育龄夫妇地中海贫血筛查被引量：2
- 2016年
- 目的:了解贵州省黔东南州地区部分育龄夫妇地中海贫血发生率。方法:采用血细胞分析和血红蛋白电泳对黔东南州部分地区1 516对育龄夫妇进行地中海贫血筛查,比较不同性别不同民族孕龄夫妇地中海贫血筛查阳性率。结果:1 516对育龄夫妇(共3 032人)中,血细胞分析有279例地中海贫血筛查阳性,阳性率为9.2%;血红蛋白电泳显示617例地中海贫血筛查阳性,阳性率20.3%;女性地中海贫血筛查阳性率高于男性(P<0.05),苗族与侗族地中海贫血阳性率高于汉族,侗族与壮族地中海贫血阳性率高于水族(P<0.05)。结论:黔东南州不同性别,不同民族间地中海贫血筛查阳性率差别较大。
- 孔义华戴志敏刘杰麟龙纯意吴秋阳梅艳
- 关键词：地中海贫血血细胞分析血红蛋白电泳
- 达努塞替通过极光激酶B/核糖体p70S6蛋白激酶/核糖体蛋白15信号通路调控白血病细胞自噬被引量：1
- 2018年
- 目的探索达努塞替处理人白血病细胞后极光激酶B/核糖体p70S6蛋白激酶/核糖体蛋白15(AuroraB/p70S6K/RPL15)信号通路的变化及细胞自噬的发生情况,并研究其作用机制。方法选择髓系白血病细胞株THP-1和K562为研究对象。实验分为2部分,第1部分:分别采用0.1μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L浓度达努塞替共培养THP-1和K562细胞,对照组(0μmol/L达努塞替)加入体积分数为2mL/L的二甲基亚砜(DMSO),以上各组均作用24h;采用四唑盐比色法检测细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞自噬情况,Westernblot法检测p70S6K、AuroraB、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、微管相关蛋白(LC3)、Beclin1、核糖体蛋白15(RPL15)的表达水平。第2部分:分别下调THP-1和K562细胞中AuroraB和RPL15,采用DMSO溶解达努塞替(5.0μmol/L),实验分组:DMSO组(空白对照组)、达努塞替处理组、空载质粒组、小干扰RNA(siRNA)组、空载质粒+达努塞替处理组和siRNA+达努塞替处理组。检测自噬信号通路PI3K/AKT/mTOR中AuroraB、p70S6K、RPL15和自噬蛋白Beclin1、LC3的表达情况。结果1.达努塞替可抑制THP-1、K562细胞生长,半抑制浓度分别为26.9μmol/L和30.2μmol/L。2.在THP-1和K562细胞中,0.1μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L浓度的达努塞替处理细胞后,p-AuroraB/AuroraB、p-p70S6K/p70S6K、RPL15、p-mTOR/mTOR、p-AKT/AKT蛋白表达水平均较对照组降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);自噬蛋白Beclin1、LC3表达量及细胞自噬率均升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。3.THP-1细胞中,下调AuroraB后,siRNA组及siRNA+达努塞替处理组p70S6K、RPL15分别低于空载质粒组22.1%、61.3%(F=18.1,P=0.001)和55.4%、56.1%(F=19.4,P=0.001);LC3表达量较空载质粒组升高13.6%、17.1%(F=15.4,P=0.001)。下调RPL15后,siRNA组及siRNA+达努塞替处理组Beclin1、LC3分别高于空载质粒组39.5%、92.3%(F=25.2,P=0.001)和40.2%、58.3%(F=23.9
- 何思佳何志旭舒莉萍周志伟
- 关键词：白血病细胞自噬
