上海交通大学医学院上海市肿瘤研究所
- 作品数：15 被引量：64H指数：5
- 相关作者：邓云王弢蒋华孔娟王海更多>>
- 相关机构：江苏大学生命科学研究院华东师范大学生命科学学院复旦大学医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 药物基因组学对癌症化疗的启示被引量：3
- 2006年
- 药物基因组学的研究任务是阐明个体差异的遗传基础,并利用这些遗传信息来预测药物的疗效、毒性和安全性。绝大多数的癌症化疗药物在治疗效果及正常组织毒性上的个体差异一直广为关注。不仅诸多临床因素(如年龄、性别、饮食、药物相互作用等)与药物反应和治疗效果有关,而且药物分布(转运和代谢)和药物靶标的遗传变异同样可导致癌症治疗上的差异。本篇综述主要讨论当前和将来药物基因组学在临床癌症治疗和抗癌药物研制方面的应用。
- 周喆岳利多覃文新
- 关键词：药物基因组学癌症治疗
- 和厚朴酚抗血管生成作用的实验研究被引量：13
- 2007年
- 目的:本研究通过检测和厚朴酚在体内对鸡胚尿囊膜(chicken chorilallantoic membranes,CAM)血管生成的抑制作用及体外对肿瘤血管生成的影响,探讨和厚朴酚的抗血管生成作用及其初步机制。方法:(1)用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测和厚朴酚对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)、人成纤维细胞及人结肠癌RKO细胞增殖的抑制作用;(2)采用鸡胚绒毛尿囊膜模型,观测和厚朴酚对CAM新生血管生成的抑制作用;(3)逆转录聚合酶链反应(RT-RCR)方法检测和厚朴酚对RKO细胞血管内皮生长因子A(VEGF-A) mRNA表达及细胞培养上清液VEGF蛋白分泌的影响。结果:和厚朴酚对血管内皮细胞具有优先抑制作用,对HUVEC的半数抑制剂量(inhibitory concentration 50%,IC50)为14.5μmol/L,而对原代培养的人成纤维细胞的IC50高达150μmol/L,对人结肠癌RKO细胞的IC50为42μmol/L;和厚朴酚0.1μg/只和0.2μg/只剂量时显著抑制CAM新生血管形成,抑制率分别为58%和86%;和厚朴酚在10μmol/L和20μmol/L剂量时显著抑制RKO细胞的VEGF-A mRNA表达及细胞培养上清液中VEGF蛋白的分泌,具有显著性差异。结论:和厚朴酚在非凋亡剂量时具有抗血管形成作用,其机制与抑制血管内皮细胞增殖以及抑制肿瘤细胞表达VEGF有关。
- 王嘉王弢王自强陈菲覃文新
- 关键词：和厚朴酚血管生成抑制剂血管内皮生长因子类绒毛尿囊膜
- V-ATPase:结构、功能及其在肿瘤细胞中的作用被引量：10
- 2004年
- 真核细胞膜及管泡细胞器膜上广泛分布一种与H+主动转运有关的蛋白——V-ATPase。V-AT-Pase的结构由跨膜的V0和细胞质内的V1两个亚单位组成,前者为H+提供通道,后者能分解ATP,为逆浓度梯度转运H+提供能量。V0和V1只有在聚合时,V-ATPase全酶才有功能。肿瘤细胞中V-ATPase的过度表达或过度活跃,遏制了由酵解增强乳酸聚集导致的细胞内酸化趋势,使细胞避免了凋亡的命运。而H+排至细胞外,改变蛋白水解酶的活性,使细胞外基质分解增强,细胞更有侵袭力。肿瘤细胞的V-ATPase可望成为抑制细胞增生、扩散的有效靶点。
- 卢小东覃文新杨胜利
- 关键词：V-ATPASE肿瘤
- 千金藤碱对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药性的逆转作用和对HO-1和NQO1表达的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨千金藤碱(Cepharanthine,CEP)逆转人结肠癌耐药细胞株Lovo/5-FU对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的耐药性以及对HO-1和NQO1表达的影响。方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立结肠癌耐药细胞亚系LoVo/5-FU;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测千金藤碱和化疗药物对结肠癌细胞的细胞毒性;RT-PCR和Western blot技术检测NQO1和HO-1基因的mRNA和蛋白表达水平。结果:LoVo/5-FU细胞对包括5-FU在内的4种化疗药物产生耐药性,其中对5-FU耐药性最高,是LoVo细胞的18.82倍;千金藤碱对LoVo和LoVo/5-FU细胞增殖均有抑制作用,其浓度超过20-25μg mL-1时最为明显,但是对2种细胞的抑制效果无明显差别(P>0.05);千金藤碱(2.5-10.0μg mL-1)可降低LoVo/5-FU细胞5-FU的IC50值(P<0.05-0.01),在此浓度范围内,IC50值降低的程度与剂量成正相关;LoVo/5-FU细胞中HO-1和NQO1的mRNA和蛋白表达水平明显高于LoVo细胞(P<0.05-0.01),10.0μg mL-1千金藤碱与5-FU联合处理后,LoVo/5-FU细胞中两个基因的表达水平明显降低(P<0.05-0.01)。结论:千金藤碱可抑制结肠癌细胞增殖,增加结肠癌耐药细胞株Lovo/5-FU对5-FU的敏感性,原因可能与其抑制结肠癌细胞中HO-1和NQO1的表达水平有关。
- 马克龙汪远金汪天明宋睿罗晓莹
- 关键词：5-氟尿嘧啶HO-1NQO1
- EGFRvⅢ特异性单链抗体的制备及其靶向性能被引量：2
- 2011年
- 目的:应用噬菌体展示技术筛选出能与EGFRvⅢ特异性结合的单链抗体(single-chain Fv,scFv),并研究其靶向性能。方法:构建EGFRvⅢ特异性scFv噬菌体库,ELISA筛选阳性克隆,阳性EGFRvⅢ-scFv质粒重新克隆入pCANTAB-Throm-bin-His载体,转化E.coli HB2151,IPTG诱导可溶性EGFRvⅢ-scFv表达。间接免疫荧光及裸鼠活体成像技术鉴定EGFRvⅢ-scFv与EGFRvⅢ的特异性结合。结果:成功构建了EGFRvⅢ-scFv噬菌体库,ELISA筛选得到16个EGFRvⅢ-scFv克隆,取一克隆命名为EGFRvⅢ-scFv-2A1。EGFRvⅢ-scFv-2A1质粒重新克隆入pCANTAB-Thrombin-His载体,成功表达可溶性EGFRvⅢ-scFv-2A1。EGFRvⅢ-scFv-2A1在体外可特异性结合HuH7-EGFRvⅢ肝癌细胞,但不结合HuH7-EGFR和HuH7肝癌细胞;荧光标记的EGFRvⅢ-scFv-2A1裸鼠体内可特异性结合U87MG-EGFRvⅢ胶质瘤细胞移植瘤,而不结合U87MG细胞移植瘤。结论:成功制备的EGFRvⅢ-scFv-2A1可特异性靶向结合EGFRvⅢ,在肿瘤的诊断和靶向治疗中具有潜在应用价值。
- 张庆丽石必枝蒋华周敏王海孔娟谢海龙
- 关键词：SCFV脑胶质瘤移植瘤靶向治疗活体成像
- 人源DKK1真核悬浮分泌表达系统的建立及其特异性抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:利用哺乳动物细胞悬浮培养表达系统分泌表达人源Dickkopf-1(DKK1)蛋白,纯化蛋白并制备特异性抗体。方法:构建DKK1真核表达载体pCMVcStrep-DKK1,并借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养),ELISA和蛋白印迹法检测DKK1蛋白表达量。利用亲和层析法纯化DKK1蛋白,Wnt信号通路荧光素酶报告系统检测其生理活性。以纯化的DKK1蛋白免疫BALB/c小鼠获得相应抗体,并初步鉴定其抗原特异性。结果:DKK1蛋白分泌表达在Free-Style293-F细胞培养液中,蛋白浓度在转染后第5天达最高(20mg/L)。所纯化的DKK1蛋白能够抑制Wnt3a蛋白诱导的报告基因的表达。抗DKK1小鼠抗体能特异性识别细胞内源性DKK1蛋白。结论:建立了在哺乳动物细胞悬浮培养系统中高效分泌表达人源DKK1重组蛋白的表达系统,并获得相应的特异性抗体,为其下一步结构与功能研究及在肿瘤中的应用奠定了实验基础。
- 沈秋瑾孔娟邓云蒋华胡素文孔洁倪涛游海燕李宗海屠红张志刚覃文新
- 关键词：细胞培养技术哺乳动物细胞
- 重组DKK1及pCMV-HA2/DKK1重组质粒对宫颈癌细胞体外增殖作用的影响被引量：7
- 2012年
- 目的观察人重组DKK1和pCMV-HA2/DKK1重组质粒对体外培养宫颈癌细胞株Hela细胞增殖的影响。方法体外培养Hela细胞,非放射性细胞增殖(MTS)法检测重组DKK1、抗DKK1抗体和人源DKK1真核表达质粒pCMV-HA2/DKK1对Hela细胞增殖作用的影响,western blot及ELISA法检测转染pCMV-HA2/DKK1重组质粒后Hela细胞中DKK1蛋白的表达情况。结果与对照组相比,10,50 ng/mL的DKK1对Hela细胞有明显抑制作用(F分别为162.31,184.65,P均<0.01);抗DKK1抗体对Hela细胞的增殖影响无统计学意义(P均>0.05);pCMV-HA2/DKK1重组质粒转染Hela细胞后对细胞增殖有明显抑制作用,加入抗DKK1抗体不能完全拮抗pCMV-HA2/DKK1对Hela细胞的抑制作用;pCMV-HA2/DKK1重组质粒转染Hela细胞后可检测到DKK1蛋白表达,经western blot证实为DKK1蛋白(Mr约为38 000),ELISA法结果表明,DKK1蛋白的分泌量随培养时间的延长而增加,第5天时达峰值(19.82 mg/L)。结论重组DKK1和人源DKK1真核表达质粒pCMV-HA2/DKK1可抑制Hela细胞的增殖,抗DKK1抗体可部分抵抗DKK1的抑制作用,提示DKK1在宫颈癌肿瘤发生中对肿瘤细胞具有抑制作用。
- 陆奎英崔素芬徐亮张玲玲丁永玲覃文新包广宇
- 关键词：真核表达质粒HELA细胞
- 抗EGFRvⅢ噬菌体抗体库的构建和筛选被引量：2
- 2010年
- 目的:应用噬菌体展示技术筛选针对表皮生长因子受体突变体Ш(epidermal growth factorreceptor variant typeⅢ,EGFRvIII)的单链抗体(single chain Fv,scFv)。方法:利用原核表达纯化的人EGFRvIIIex蛋白和高表达EGFRvIIIex的小鼠成纤维细胞系NIH3T3免疫小鼠,扩增VH和VL片段并拼装成scFv基因,连接至噬菌粒pCANTAB5E,电击转化Hpd3cells,构建噬菌体单链抗体库,并进行3轮富集筛选。在第4轮筛选时,采用了降低抗原浓度的方法。然后将筛选得到的阳性克隆测序分析,转化E.coliHB2151,IPTG诱导可溶性scFv的表达。结果:构建了库容为7.9×107的噬菌体单链抗体库。经过第4轮低浓度抗原筛选,得到了较高亲和力的克隆。取单个阳性克隆测序分析结果表明,该抗EGFRvIII scFv基因序列长807bp,编码268个氨基酸。IPTG诱导后表达的可溶性scFv可分别与纯化的EGFRvⅢex抗原以及细胞表面的EGFRvⅢex结合。结论:利用噬菌体抗体库筛选得到了高亲和力的抗EGFRvⅢ scFv,为开发针对EGFRvⅢ的抗体药物提供了靶向载体分子。
- 周敏石必枝顾健人李宗海
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体
- CDC20在细胞分裂周期中的作用被引量：5
- 2006年
- CDC20是细胞周期相关蛋白之一。在细胞分裂周期中,CDC20是纺锤体组装检查点的靶向物和有丝分裂后期促进复合体的正调控因子,在引导细胞周期中某些蛋白质的泛素化降解和确保染色体正常分离的过程中起着重要的作用。
- 张萍覃文新
- 关键词：APC/CCDH1
- 肝癌患者β-catenin基因第三外显子的体细胞突变被引量：3
- 2005年
- 目的探讨中国地区人肝癌发生发展过程中有无β-catenin基因突变。方法采用PCR-SSCP方法,设汁扩增β-catenin 基因第三外显子的引物,检测20例肝癌患者及7株人肝癌细胞中有无β-catenin基因突变,并通过DNA测序及限制性内切酶对突变加以验证。结果20例肝癌患者中有2例发生β-catenin基因突变,均为41位密码子由编码苏氨酸变成编码丙氨酸。7株人肝癌细胞均无β-catenin基因突变。结论10%(2,20)的肝癌组织样品有β-catenin基因突变。提示β-catenin基因突变可能参与了部分肝癌癌变过程,但不是中国地区肝癌发生发展过程中的主要和关键原因。
- 游海燕姚根富于彬张海涛余艳军谢丽覃文新
- 关键词：肝肿瘤Β-CATENIN单链构象多态性突变
