承德医学院基础医学院基础医学研究所
- 作品数：7 被引量：23H指数：3
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- TRIM28shRNA联合依托泊甙抑制非小细胞肺癌裸鼠肿瘤生长的研究被引量：1
- 2018年
- 目的构建TRIM28短发夹RNA(shRNA)稳定干扰非小细胞肺癌(NSCLC)PAa细胞株,并探讨TRIM28shRNA联合依托泊甙对裸鼠移植瘤生长的影响和可能的机制。方法通过特异性shRNA慢病毒载体在PAa细胞中稳定干扰TRIM28表达;PAa细胞皮下注射建立裸鼠移植瘤模型,并应用TRIM28shRNA单独或联合依托泊甙进行治疗;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)测定法检测裸鼠移植瘤细胞凋亡情况和免疫组织化学技术检测移植肿瘤中E2F转录因子1(E2F1)的表达。结果成功构建了TRIM28shRNA稳定干扰的PAa细胞株;证实TRIM28shRNA联合依托泊甙能够显著抑制裸鼠肿瘤的生长;TRIM28shRNA联合依托泊甙明显诱导肿瘤细胞凋亡并诱导肿瘤组织表达E2F1蛋白。结论TRIM28shRNA联合化疗药物依托泊甙对抑制NSCLC肿瘤生长有明显效果。
- 刘镭赵长祺王建平赵学荣高亚贤程露阳许倩李庆宝赵丽岑
- 关键词：SHRNA依托泊甙裸鼠
- 半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对脑缺血再灌注大鼠脑皮质中热休克蛋白70、微管相关蛋白轻链3蛋白表达和神经元超微结构的影响被引量：4
- 2019年
- 目的应用不同浓度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)干预脑缺血再灌注大鼠,检测热休克蛋白70(HSP70)和微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白的表达,观察其对神经元超微结构的影响。方法成年雄性SD大鼠60只,随机分成5组:假手术组(sham)、缺血再灌注组(IR),Cys C低浓度组(Cys C1)、Cys C中浓度组(Cys C2)、Cys C高浓度组(Cys C3),每组12只。采用线栓法制备脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h再灌注24 h后进行改良神经功能损伤严重程度评分(m NSS)。Western blotting半定量检测损伤中心脑皮质组织中HSP70、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达;免疫组织化学法检测HSP70、LC3的阳性细胞个数;免疫荧光双标记法检测皮质神经元自噬相关蛋白LC3和神经元核抗原(Neu N)共染的阳性细胞平均吸光度值;透射电子显微镜下观察神经元超微结构的变化。结果与IR组相比,Cys C1、Cys C2组m NSS评分明显减少(P<0. 05),HSP70的表达较IR组明显升高(P<0. 01);而Cys C3组m NSS评分升高,与IR组差别无显著性(P>0. 05); Cys C3组HSP70的表达明显降低(P<0. 01); Cys C各浓度组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达有不同程度的升高(P<0. 01); LC3和Neu N共染阳性细胞平均吸光度逐渐增强(P<0. 05);透射电子显微镜结果显示,Cys C1、Cys C2组神经细胞的超微结构有所改善,而Cys C3组脑皮质神经细胞损伤较重。结论 Cys C可能在一定浓度范围内对缺血再灌注损伤神经细胞有保护作用。浓度过高则导致神经细胞自噬性死亡。
- 陈萌杜超田焕娜王爱乐夏晓晓
- Urantide对动脉粥样硬化大鼠胸主动脉组织中c-Jun氨基末端激酶表达的影响及其意义被引量：1
- 2019年
- 目的:探讨Urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠胸主动脉组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK)mRNA和蛋白表达的影响,阐明其防治AS的分子机制。方法:采用腹腔注射维生素D 3(VitD 3)联合高脂特制饲料饲养方法建立大鼠AS模型,同时设对照组。建模成功的150只AS模型大鼠随机分为模型组、辛伐他汀组、Urantide 3 d组、Urantide 7 d组和Urantide 14 d组,每组30只。辛伐他汀组大鼠灌胃给予辛伐他汀,连续14 d;Urantide 3、7和14 d组大鼠经尾静脉注射Urantide,分别连续3、7和14 d。采用全自动生化分析仪检测大鼠血清学指标,HE染色观察大鼠胸主动脉组织病理形态表现,免疫组织化学染色、qRT-PCR和Western blotting法检测大鼠胸主动脉组织中JNK mRNA和蛋白表达水平。结果:与对照组比较,AS模型组大鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL)水平均升高(P<0.05),高密度脂蛋白(HDL)水平降低(P<0.05)。HE染色,模型组大鼠胸主动脉组织中泡沫细胞形成,中膜弹性纤维断裂以及钙化形成;与模型组比较,辛伐他汀组和Urantide 组大鼠胸主动脉病理改变明显改善。免疫组织化学染色,对照组大鼠胸主动脉组织中JNK阳性颗粒微量表达;与对照组比较,模型组大鼠胸主动脉组织中JNK阳性表达强度明显增加(P<0.05);与模型组比较,辛伐他汀组和不同时间Urantide 组大鼠胸主动脉组织中JNK阳性表达强度明显降低(P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting法检测,与对照组比较,模型组大鼠胸主动脉组织中JNK mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,辛伐他汀组和不同时间Urantide组大鼠胸主动脉组织中JNK mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与辛伐他汀组比较,不同时间Urantide组大鼠胸主动脉组织中JNK mRNA和蛋白表达水平进一步降低(P<0.05)。结论: Urantide可改善AS大鼠胸主动脉的病理损伤,其机制可能与抑制JNK信号通路的表达有关。
- 王途孙晓旭陈龙崔海鹏刘凯谢亚芹李颖赵娟
- 关键词：动脉粥样硬化URANTIDEC-JUN氨基末端激酶
- TRIM28siRNA抑制非小细胞肺癌A549裸鼠移植瘤生长以及促进凋亡的研究被引量：1
- 2021年
- 目的建立非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞裸鼠移植瘤模型,探讨TRIM28小干扰RNA(siRNA)对NSCLC裸鼠移植瘤生长和细胞凋亡的影响。方法将NSCLC细胞A549皮下注射Balb/c裸鼠建立移植瘤模型。比较皮下注射A549/TRIM28siRNA细胞和A549/ControlsiRNA细胞的两组裸鼠移植瘤大小和生长情况。苏木精-伊红(HE)染色和免疫组织化学技术检测比较两组移植瘤的增殖,末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记(TUNEL)测定法检测移植瘤的凋亡水平。实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法和western-blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase3的mRNA和蛋白表达水平。结果成功建立了NSCLC A549细胞裸鼠移植瘤模型。沉默A549细胞中TRIM28的表达,可显著抑制A549细胞皮下裸鼠移植瘤的生长,并促进癌细胞的凋亡。此外,TRIM28基因敲除在基因和蛋白水平上降低了Bcl-2的表达,增加了Bax和Caspase3的表达。结论TRIM28siRNA能够明显抑制NSCLC A549裸鼠移植瘤的生长并促进癌细胞的凋亡。
- 张子平闫皓翔李霄雨宋芳戎子炎高淑超褚升瑞魏泽浩许倩刘镭
- 关键词：非小细胞肺癌SIRNA裸鼠凋亡
- TRIM28siRNA通过活化E2F转录因子1增加非小细胞肺癌PAa细胞对依托泊苷的敏感性被引量：4
- 2018年
- 目的探讨siRNA沉默TRIM28(tripartite motif containing 28)增强非小细胞肺癌(NSCLC)PAa细胞对依托泊苷的敏感性和可能的机制。方法应用RNA干扰技术沉默TRIM28基因在PAa细胞中的表达;TRIM28siRNA单独或联合依托泊苷处理PAa细胞后,应用MTT法和集落形成实验检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting方法检测各组细胞中E2F转录因子1(E2F1)的表达水平。结果在PAa中沉默了TRIM28的表达;TRIM28siRNA联合依托泊苷显著抑制PAa细胞的增殖和集落形成,明显诱导细胞凋亡;联合处理的PAa细胞中E2F1mRNA和蛋白水平的表达明显增加,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少。结论 TRIM28siRNA联合化疗药物依托泊苷对抑制NSCLC细胞生长有明显效果。
- 刘镭高亚贤王建平赵学荣许倩胡旺刘美奇
- 关键词：非小细胞肺癌RNA干扰依托泊苷免疫印迹法
- 半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对脑缺血再灌注大鼠Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达及细胞凋亡的影响被引量：12
- 2017年
- 目的:应用不同浓度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,Cys C)干预脑缺血再灌注大鼠,检测Bcl-2、Bax、Beclin-1阳性细胞的表达,探讨自噬蛋白Beclin-1与凋亡之间的关系。方法:成年雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组),缺血再灌注组(I/R组),Cys C低、中、高浓度组。用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h再灌注24 h。采用免疫印迹半定量检测损伤中心脑皮质组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达;免疫组织化学检测Bcl-2、Bax和Beclin-1阳性细胞数;TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡。结果:与I/R组相比,Cys C低、中浓度组Bcl-2的表达有不同程度的升高,Bax的表达降低,细胞凋亡减少;而Cys C高浓度组Bcl-2的表达明显降低,Bax的表达显著上升,细胞凋亡增加;Cys C各浓度组Beclin-1的表达都有不同程度的升高。凋亡细胞与Beclin-1表达的相关性分析显示,Cys低、中浓度组细胞的自噬和凋亡呈负相关;Cys C高浓度组细胞的自噬和凋亡呈正相关。结论:Cys C在一定浓度范围内,随自噬蛋白Beclin-1表达的升高可抑制细胞的凋亡,对缺血再灌注损伤脑组织具有保护作用。其作用机制和Bcl-2的表达上调,Bax的表达下调有关;而Cys C较高浓度则无上述作用。
- 陈萌田焕娜吴晓光王爱乐陈元操
- 关键词：脑缺血再灌注BECLIN-1BCL-2BAX
- 半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质caspase-9、脑红蛋白表达和过氧化损伤的影响
- 2021年
- 目的:探讨不同浓度半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)对大鼠损伤大脑皮质组织caspase-9和脑红蛋白(NGB)的表达、氧化损伤和脑组织形态学的影响。方法:大鼠按照随机数字表分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、CysC低、中、高浓度组。线栓法制备右侧局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,缺血2h再灌注24 h后行H-E染色,观察脑组织形态学变化;免疫组织化学法检测caspase-9的阳性细胞数;免疫组织荧光法检测皮质神经元NGB阳性细胞数;免疫印迹检测脑皮质组织中caspase-9蛋白的表达。羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力,化学比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量。结果:与I/R组相比,CysC低、CysC中浓度组caspase-9表达较I/R组明显减少;而CysC高浓度组caspase-9的表达明显升高,与I/R无明显差别。CysC低、CysC中浓度组caspase-9阳性细胞数较I/R组明显减少,NGB阳性细胞数较I/R组显著增多,SOD和GSH-PX活力升高,MDA含量下降;而CysC高浓度组caspase-9阳性细胞数增多,NGB阳性细胞数减少,SOD和GSH-PX活力降低,MDA含量升高;CysC高浓度组与I/R组相比,差异无统计学意义。结论:CysC低、中浓度可能通过上调NGB的表达,下调caspase-9的表达,减轻脑缺血再灌注后的自由基损伤。而浓度过高则作用相反。
- 陈萌陈萌吴晓光马凯旋吴晓光
- 关键词：大脑皮质脑红蛋白
