国家重点基础研究发展计划(2004CB117403)
- 作品数：10 被引量：70H指数：6
- 相关作者：陈松林徐田军桂建芳张义兵田永胜更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所中国科学院上海海洋大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 大菱鲆热休克蛋白90基因cDNA的克隆及其表达特征被引量：6
- 2010年
- 从大菱鲆脾脏cDNA文库中筛选到HSP90,采用基因克隆方法获得含有1个97bp的5’UTR、2190bp的开放阅读框和501bp的3’UTR的全长cDNA序列。整个开放阅读框编码729个氨基酸,包含HSP90家族5个保守信号区。与其他物种已知序列同源比对的结果显示,此编码氨基酸更接近于热休克蛋白90β亚型(HSP90β),与牙鲆HSP90β的同源性高达96.6%。RT-PCR分析表明,在胚胎发育初期就能检测到HSP90,其表达量伴随着胚胎发育,先增加后减少,在尾芽期达到最高。HSP90在健康大菱鲆各供试组织中均有表达。经鳗弧菌感染处理后,在胚胎细胞中也有HSP90的强烈表达。结果显示,大菱鲆HSP90cDNA序列为HSP90β,是一种组成型表达的基因,其在维持正常生理机能、胚胎发育和应激中发挥重要的作用。
- 王婷婷陈松林孟亮刘洋
- 关键词：HSP90大菱鲆CDNA
- 日本牙鲆主要组织相容性复合体DAB等位基因的多态性被引量：8
- 2008年
- 根据牙鲆(Paralichthys olivaceus)主要组织相容性复合体(MHC)DAB基因序列设计特异性引物,在日本牙鲆基因组中扩增了包括DAB基因完整外显子2和内含子1在内的长度为408bp的DNA片段。对该片段克隆测序后,发现了37个MHC-DAB等位基因,各等位基因的频次以及各主型中亚型数目分布都不平衡。在第二外显子273bp核苷酸序列中有50个位点发生变异,核苷酸多样性PI值为0.0618,在编码的氨基酸序列中存在多态变异位点30个,其中简约信息位点29个,单变异位点1个。非同义替代与同义替代的比率在抗原结合区(PBR)和非PBR编码区分别为10.0和1.62,分析表明正向选择机制可能是产生牙鲆MHC-DAB多态性的主要因素。估计的核苷酸的转换和颠换数随着遗传距离的增加而增加。各等位基因间的系统发生关系表明,19个主型分为两个群。对氨基酸组分和密码子的偏倚性以及分布频率的分析表明各同义密码子的使用频率不均衡。本研究为牙鲆MHC-DAB基因的遗传进化和分子标记辅助育种的研究提供了理论基础。
- 徐田军陈松林田永胜
- 关键词：牙鲆主要组织相容性复合体等位基因多态性
- 牙鲆HRI多克隆抗体的制备及病毒诱导的组织表达分析被引量：3
- 2007年
- 血红素调节的eIF2α激酶HRI是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在血红素缺乏和热休克等胁迫存在时,通过磷酸化底物eIF2α调控真核细胞的蛋白合成。牙鲆PoHRI是在鱼类鉴定的第一个HRI基因。PCR克隆编码PoHRI蛋白1-200氨基酸的cDNA片段,定向插入pET32a构建表达载体。IPTG诱导,随后利用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,成功获得预期大小的融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫小鼠获得抗PoHRI多克隆抗体,抗体中和实验进一步证实了抗PoHRI多克隆抗体对PoHRI蛋白的特异性识别。在健康的牙鲆组织中能检测到PoHRI mRNA和蛋白的组成型表达。人工感染大鳞鲆弹状病毒SMRV诱导相应组织PoHRI的表达明显上调。结果表明,PoHRI是一种在牙鲆组织中广泛表达的蛋白,可能在抗病毒免疫反应中发挥某种功能。
- 朱蓉张义兵张奇亚桂建芳
- 关键词：原核表达多克隆抗体病毒感染
- 病毒感染草鱼胸腺的EST分析和免疫相关基因的鉴定被引量：2
- 2009年
- 以感染草鱼(Ctenopharyngodon idellus)出血病病毒(GCHV)的草鱼胸腺为材料,构建了草鱼胸腺的SMARTcDNA文库。筛选文库获得到1933条有效EST序列。BLASTX分析显示,583条序列在公共数据库中能找到同源基因(E-value≤1.00E10-3,Identities≥30%),另外1350条序列则找不到显著同源性。已知基因按具体功能可划分为6类,大部分与细胞内的各种生理过程、细胞结构以及免疫防御相关。研究结果从分子水平上表明鱼类的胸腺在机体感染病毒的免疫反应中发挥重要作用,同时也表明胸腺组织在病毒感染后可能表达很多目前还不清楚功能的新基因。
- 李洋洋张义兵桂建芳
- 关键词：草鱼胸腺CDNA文库EST免疫相关基因
- 牙鲆抗菌肽hepcidin基因在成鱼组织和不同发育时期胚胎中的表达分析被引量：6
- 2006年
- 抗菌肽hepcidin是由hepcidin基因编码产生的小分子多肽,是机体天然免疫的重要因子。本文利用RT-PCR的方法分析表明,抗菌肽hepcidin基因在牙鲆成鱼不同组织和不同发育时期胚胎中普遍表达,但是表达水平存在着明显的差异。
- 杨绒陈松林李伟王志坚
- 关键词：牙鲆RT-PCR
- 鱼类MHC及其基因研究进展被引量：19
- 2008年
- MHC广泛存在于脊椎动物中,在鱼类中由于其高度的多态性,使其在遗传进化、免疫相关、抗病育种等方面倍受关注。本文综述了国内外关于鱼类MHC基因的遗传结构、功能特性及系统学方面的研究进展,并展望了将此类基因应用于遗传育种中的前景,以及制约研究所存在的问题。
- 徐田军陈松林
- 关键词：鱼类MHC基因
- 水产生物技术研究的回顾、最新进展及前景展望被引量：10
- 2007年
- 1简要回顾
水产生物技术是20世纪80年代开始发展起来的、以水产生物为主要研究对象，以水产业应用为目的，以基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程等现代生物技术为主体的综合性技术体系。水产生物技术是生物技术的重要组成部分，也是当今世界发展最快的高技术领域之一。由于生物技术在水产养殖、良种培育、性别控制、生殖调控与苗种生产、病害防治、种质资源保存与濒危物种保护以及水环境监测与污染治理等方面具有重要的理论及应用价值，水产生物技术自诞生之日起，就受到各国政府和科学家的高度重视。
- 陈松林
- 关键词：水产生物技术
- 鲫鱼低氧相关基因差减cDNA文库的构建与分析被引量：6
- 2009年
- 鲫鱼对低氧具有极强的耐受性。在低氧状态下鲫鱼鳃瓣表面积增加,无氧代谢增强,能量消耗降低。但是人们对鲫鱼产生这些低氧反应的分子机理还缺乏了解。本研究以1%低氧处理24h的鲫鱼囊胚细胞(CAB)作为检测子(Tester),常氧条件下培养的CAB细胞作为驱赶子(Driver),分别提取总RNA,利用SMART cDNA技术合成双链cDNA,经差减杂交和抑制性PCR扩增获得差减PCR产物。然后将差减PCR产物连接到pGEM-T载体上,构建差减cDNA文库。以管家基因β-actin作为指标检测差减效率,发现该文库差减效率达28倍。随机挑选阳性克隆进行PCR检测,显示差减片段在0.1—2kb之间。挑取含有插入片段的1300个克隆进行测序,通过生物信息学分析获得267个基因序列(e≤0.001;Identity>40%)。该差减cDNA文库的成功构建对克隆鱼类耐低氧相关基因和深入认识鱼类耐受低氧的分子机制有非常重要的意义。
- 钟雪萍王丹张义兵桂建芳
- 关键词：抑制性差减杂交
- 牙鲆MHC-DAA结构及其等位基因多态性被引量：15
- 2009年
- 为了探讨牙鲆MHC-DAA等位基因的多态性,根据牙鲆(Paralichthys olivaceus)MHC-DAA的cDNA序列设计特异引物,扩增内含子序列。牙鲆DAA基因由4个外显子和3个内含子组成,与大西洋鲑(Salmo salar)DAA基因结构相同,在内含子2中存在一个高度多态的微卫星位点(GT)n。根据获得的MHC-DAA基因组序列设计特异性引物,在45尾牙鲆中扩增了包括完整外显子2和内含子2的长度约670bp的DNA片段,克隆测序后共发现30个MHC-DAA等位基因,各等位基因的频次及其各主型中亚型的数目都不均衡。在249bp的外显子2序列中共有55个位点发生变异,核苷酸多样性指数为0.0887,编码的氨基酸序列中多态变异位点31个,其中简约信息位点30个,单变异位点1个。非同义替代与同义替代的比率在PBR(Peptide binding region)和非PBR结合区分别为3.30和2.43,分析证明平衡选择是牙鲆存在众多DAA等位基因的发生机制。
- 徐田军陈松林
- 关键词：牙鲆等位基因多态性
- 海水养殖鱼类免疫相关功能基因的克隆及其在鱼类抗病育种中的应用潜力
- 病害是限制水产养殖业可持续发展的关键因子。目前我国缺乏优良抗病养殖鱼类品种。基因转移、分子标记和基因标记等分子育种技术是培育抗病优良鱼类新品种的很有潜力的技术手段,已成为国际上的发展趋势。鱼类功能基因组技术的发展为筛选鱼...
- 陈松林徐美瑜张玉喜李伟刘洋孟亮
- 文献传递
