国家科技重大专项(2012ZX09103-301-016)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：马伟峰谭毅龙北国杨飞华更多>>
- 相关机构：南方医科大学温州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CXCR4慢病毒表达载体的构建及细胞转染被引量：3
- 2015年
- 目的:构建高表达CXCR4慢病毒并转染MCF-7细胞,获得高表达CXCR4的MCF-7细胞。方法:RT-PCR法扩增CXCR4基因,构建重组质粒CXCR4/p Sin-EF2,与ps PAX2、p MD2G质粒共转染HEK293T细胞包装慢病毒,以空载体包装的病毒为对照,将包装慢病毒感染人乳腺癌细胞MCF-7。RT-PCR和Western blot检测转染前后CXCR4基因和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞表面CXCR4受体表达。结果:双酶切和测序结果证实重组质粒CXCR4/p Sin-EF2构建成功,转染HEK293T细胞获得高滴度慢病毒,RT-q PCR和Western blot证实病毒转染MCF-7细胞中CXCR4表达量显著增高(P<0.05),流式测得CXCR4阳性细胞由26.78%升到99.29%,而MCF-7Vector细胞膜表面CXCR4表达量与未转染病毒MCF-7细胞无明显差异。结论:成功构建CXCR4慢病毒表达载体,获得CXCR4受体稳定高表达的乳腺癌细胞。
- 段司沁范遥赵雪曹园芝谭毅龙北国马伟峰
- 关键词：CXCR4慢病毒乳腺癌细胞
- CXCR7特异性拮抗剂SDF-1/54R的可溶性表达及活性评价被引量：1
- 2014年
- 目的构建SDF-1/54R的原核可溶表达载体,并考查其对CXCR7的抑制作用。方法将PCR扩增的SDF-1/54r基因插入带有GST标签的可溶表达载体pET-41a+,并转化BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达的融合蛋白GST-SDF-1/54R通过SDS-PAGE和Western blotting进行检测,并利用GST亲和层析纯化。纯化产物经肠激酶酶切和纯化后得到目的蛋白SDF-1/54R。用SDF-1/54R处理CXCR7高表达的MCF-7细胞,利用MTT和趋化实验评价其对乳腺癌细胞增殖和转移的影响。结果利用新构建的可溶表达系统成功得到了目的蛋白SDF-1/54R,MTT和趋化实验证实SDF-1/54R对乳腺癌细胞MCF-7的增殖和转移具有明显的抑制作用。结论重组载体表达的可溶蛋白SDF-1/54R是一种良好的CXCR7特异性拮抗剂,具有开发成抗肿瘤药物的潜在应用价值。
- 曹园芝杨飞华马伟峰
- 关键词：CXCR7拮抗剂SDF-1可溶性表达
