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间接ELISA在过敏性哮喘模型干预性实验中检测IgE含量的应用: 2014年; 目的:探讨间接ELISA法在检测过敏性哮喘模型血清Ig E中的应用价值。方法:对SD大鼠采用卵清蛋白(OVA)雾化法建立过敏性哮喘模型,采用方阵滴定法确定Ig E标准品和血清样本的最佳稀释浓度、酶标二抗的最佳工作浓度。检测45只SD大鼠(哮喘组15只,空白对照组15只,西药治疗组15只)血清Ig E,确定阴阳临界值并评价特异性。用本研究建立的ELISA法检测各组实验动物Ig E的OD450。结果:确定Ig E标准品最佳工作浓度为1:1,样本选用原液,酶标二抗最佳稀释倍数为1:4,阳性临界值为0.752,特异性为100%。测得各组动物血清Ig E的OD450,经统计发现哮喘组血清中的Ig E的OD450值(0.944±0.083)与空白对照组(0.687±0.039)和西药治疗组(0.859±0.014)存在显著差异(P<0.05)。结论:试验建立的间接ELISA法能够检测过敏性哮喘模型的Ig E,该方法可用于临床上诊断过敏性哮喘。; 郭海涛杨光勇何光志; 关键词：过敏性哮喘间接ELISA IGE

竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)基因的克隆及序列分析被引量：2: 2012年; 为进一步研制新型的抗肿瘤药物打基础,试验以竹叶青蛇毒毒腺的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增L-氨基酸氧化酶(LAAO)基因,经克隆和测序并通过Blast分析。结果表明:LAAO基因与GenBank中公布序列编码的竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶基因的序列(AY277739)同源性达98.23%。; 何光志邓树轩田维毅王安宇王平曹锋黄高王文佳; 关键词：竹叶青克隆

单链抗体的研究进展及其应用被引量：10: 2015年; 单链抗体(single chain Fv,ScFv)是继单克隆抗体之后的基因工程抗体,为第3代抗体,其分子质量小,穿透力强,与抗原结合能力较好。ScFv可应用于靶向治疗载体、影像诊断和生物检测等方面,展示出了广阔的应用空间,被誉为一次革命性的进展。相信不久的将来,ScFv将凭借自身的优势,在医学、食品卫生和农业等领域发挥巨大作用。文章综述了Sc Fv的研究进展及其应用。; 郭海涛杨光勇何光志; 关键词：基因工程抗体单链抗体库

胰腺癌人源噬菌体单链抗体库的构建及初步筛选: 2011年; 提取胰腺癌患者的外周淋巴细胞总RNA,以RT-PCR技术分别扩增出人源抗体H链和L链的可变区基因,采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成scFv片段,然后将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,并电转化至感受态TG1菌,经辅助噬菌体M13K07拯救,获得胰腺癌人源噬菌体单链抗体库。结果表明,从外周血淋巴细胞中获取可变区基因,利用噬菌体抗体库技术制备人源抗胰腺癌单链抗体的策略是可行的。; 何光志田维毅高英王平王文佳黄高蔡琨安传伟; 关键词：胰腺癌

竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶的表达载体的构建及重组蛋白抗肿瘤的研究被引量：1: 2012年; 将经BamHⅠ和HindⅢ酶切的pMD18-T-LAAO和Pet28a(+)质粒的纯化回收产物进行连接,将产物Pet28a(+)-LAAO表达载体转化BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经Western-blot分析表明,重组蛋白能被兔抗竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶(LAAO)阳性血清所识别.将鼻咽癌CNE-2Z、人宫颈癌LYA01021和卵巢癌A2780MSC细胞悬液接种小鼠建立小鼠实体瘤模型,分别用不同浓度重组蛋白接种荷瘤小鼠,根据瘤重和小鼠存活时间计算抑瘤率和对荷瘤小鼠生命延长率.结果表明:重组蛋白对低、中和高剂量组荷瘤小鼠抑瘤率和生命延长率与阴性对照组均存在极显著差异(P<0.01).本研究为开发利用竹叶青蛇毒L-氨基酸氧化酶提供依据,为进一步研制新型的抗肿瘤药物打基础.; 何光志田维毅王安宇王平曹峰黄高王文佳; 关键词：重组蛋白抗肿瘤

皂角刺总黄酮对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭能力影响的实验研究被引量：16: 2012年; 目的:研究皂角刺总黄酮对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响,探讨其抗肿瘤作用机制.方法:通过体外培养人肝癌HepG2细胞,用不同浓度的皂角刺总黄酮处理后,采用WST-1法检测皂角刺总黄酮对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化,流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞的凋亡率,划痕实验和Transwell小室检测皂角刺总黄酮对HepG2细胞侵袭、转移的影响.结果:不同浓度的皂角刺总黄酮作用于细胞48 h后,能显著抑制HepG2细胞的增殖,随着药物浓度的增加,抑制作用增强,IC50为(190.62±0.89)mg/L;流式AnnexinV/PI双染法检测显示,不同浓度的皂角刺总黄酮均可诱导HepG2细胞凋亡;不同浓度的皂角刺总黄酮处理组发现凋亡细胞所特有的DNA ladder条带;皂角刺总黄酮可降低HepG2细胞的黏附能力,使Tr-answell小室膜上的肝癌细胞明显减少,并且呈剂量依赖性.结论:皂角刺总黄酮能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖、侵袭能力和诱导其凋亡.; 何光志邓树轩何前松李世军吴玛莉魏良纲王文佳王平曹锋黄高安传伟安传相; 关键词：HEPG2 增殖凋亡

皂角刺总黄酮对体内外人肝癌细胞株HepG2作用活性的研究被引量：1: 2012年; 目的:探索皂角刺总黄酮对肝癌细胞体内外抑制作用。方法:采用不同剂量的皂角刺总黄酮对肝癌细胞的体外敏感性;对荷瘤小鼠进行体内实验,观察该提取物对肝癌细胞生长的抑制情况。结果:体外实验2.0-0.75mg/ml浓度下皂角刺总黄酮对其增殖有明显的抑制作用,体内实验50、100和150mg/kg剂量分别对荷瘤小鼠生命延长率分别为50.2%、67.2%和74.6%,抑瘤率分别达到55.3%、55.4%和60.3%。结论:皂刺总黄酮在体内外具有明显抑制肝癌细胞的作用。该实验结果为将来皂刺总黄酮应用于临床提供了理论依据。; 何光志何前松李世军吴玛莉魏良纲王文佳王平曹锋黄高安传伟安传相; 关键词：肝癌活性

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贵州省科学技术基金(J[2010]2262)