国家科技重大专项(2012ZX09103-101-028)
- 作品数：3 被引量：14H指数：3
- 相关作者：许建华范莹娟张连茹李鹏张志强更多>>
- 相关机构：福建医科大学厦门大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 姜黄素衍生物C1209抑制慢性粒细胞白血病细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系被引量：5
- 2018年
- 目的研究姜黄素衍生物C1209抑制慢性粒细胞白血病细胞增殖与阻断Hsp90伴侣功能的关系。方法采用荧光光谱法,研究不同浓度C1209与Hsp90、其N端片段(NHsp90)、M端片段(MHsp90)、C端片段(CHsp90)的相互作用,以及不同温度(293 K、303 K、310 K)下,C1209与Hsp90的相互作用;实验选取280 nm为激发波长,290~510 nm的波长范围内进行荧光光谱扫描。采用孔雀绿磷钼酸铵-无机磷检测法,研究C1209对Hsp90-ATPase活性的抑制。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)染色法体外检测C1209对白血病细胞K562及耐伊马替尼(IM)的白血病细胞K562/G01细胞的增殖抑制作用;应用蛋白免疫印迹法检测Hsp90客户蛋白及其下游蛋白、Hsp90分子伴侣的表达。结果C1209解离常数为(14.733±0.713)μmol·L^(-1);C1209与Hsp90之间的主要作用力为静电作用力;C1209与Hsp90的C端片段结合能力最强。当ATP为1 mmol·L^(-1)时,C1209作用于Hsp90的IC50值为11.4μmol·L^(-1)。C1209呈剂量依赖性地抑制K562和K562/G01细胞的增殖,作用24 h的IC50为1.14μmol·L^(-1)和0.56μmol·L^(-1);C1209影响Hsp90的分子伴侣功能,且下调K562和K562/G01细胞中Bcr-Abl、Akt、MEK、ERK、c-Raf及其相应磷酸化蛋白p-Akt、p-MEK、p-ERK等Hsp90客户蛋白及其下游蛋白的表达。结论姜黄素衍生物C1209是Hsp90抑制剂,对K562和耐IM的白血病细胞K562/G01具有明显的增殖抑制作用,可能与其抑制Hsp90的分子伴侣功能、下调Hsp90客户蛋白有关。
- 范莹娟周义湘张连茹张连茹
- 关键词：HSP90ATPASE活性荧光光谱法
- 瓦他拉尼对乳腺癌耐药蛋白介导的肿瘤多药耐药的逆转研究被引量：6
- 2014年
- 目的观察新型激酶抑制剂类抗癌药瓦他拉尼(vatalanib)逆转肿瘤细胞多药耐药(MDR)的效果,研究其对乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的作用,探讨其作用机制。方法应用MTS法或SRB法检测瓦他拉尼对耐药细胞与敏感细胞的细胞毒性和逆转MDR的效果;分别以罗丹明(Rh-123)、米托蒽醌(MX)、阿霉素(ADR)为P-gp、BCRP、MRP1的荧光底物,应用流式细胞术检测该药对P-gp、BCRP、MRP1外排功能的影响;应用Western blot检测该药对耐药细胞中BCRP蛋白表达水平的影响,并研究其对细胞增殖相关信号分子的影响;应用qRT-PCR检测其对耐药细胞中BCRP基因表达水平的影响;通过超速离心法制备BCRP转运蛋白的粗膜,检测瓦他拉尼对BCRP的ATPase活性的影响。结果无毒剂量的瓦他拉尼(5μmol·L-1)可有效逆转BCRP高表达的肿瘤细胞株HEK293/ABCG2对MX、ADR和托泊替康(TOPT)的耐药,而对P-gp高表达的肿瘤细胞株K562/A02和MRP1高表达的肿瘤细胞株HEK293/ABCC1的耐药无逆转作用。该药能够下调耐药肿瘤细胞的BCRP基因和蛋白的表达水平,并具有时间和剂量依赖效应,但对BCRP外排MX的功能无明显抑制作用。该药可以激活BCRP的ATPase活性,但并不改变BCRP的构象,对耐药和敏感细胞中AKT和ERK的表达及其磷酸化水平也均无明显影响。结论瓦他拉尼可有效、特异地逆转BCRP介导的肿瘤MDR,其机制可能是通过下调耐药肿瘤细胞中BCRP基因和蛋白的表达来达到逆转MDR的效果。
- 张志强魏寅祥赵青任志广彭晖李鹏夏笠许建华
- 关键词：ABC转运蛋白乳腺癌耐药蛋白逆转剂
- 姜黄素衍生物C085与Hsp90及其不同片段相互作用以及对Hsp90 ATPase活性的影响被引量：3
- 2014年
- 目的：研究姜黄素衍生物C085与Hsp90的结合作用,及其对Hsp90-ATPase 活性抑制作用。方法采用荧光光谱法,研究不同浓度C085与Hsp90、NHsp90、MHsp90、CHsp90的相互作用以及293K、303K和310K下,C085与Hsp90的相互作用；实验选取280nm为激发波长,290-510 nm的波长范围内进行荧光光谱扫描。采用孔雀绿磷钼酸铵-无机磷检测法,研究 C085对 Hsp90-ATPase 活性的抑制。结果C085解离常数为（11．163±0．316）μmol · L-1；C085与Hsp90之间的主要作用力为静电作用力；C085与Hsp90的C端片段结合能力最强。当ATP为1 mmol · L-1时, C085作用于Hsp90的IC50值为6．04μmol · L-1。结论经过荧光光谱分析,可以确定C085与Hsp90的结合机制,且C085能抑制Hsp90-ATPase活性。
- 范莹娟张连茹刘洋许建华
- 关键词：HSP90ATPASE活性荧光光谱法相互作用
