国家自然科学基金(81101732)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：马伟峰杨飞华谭毅龙北国蔡绍晖更多>>
- 相关机构：南方医科大学温州医学院温州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CXCR7特异性拮抗剂SDF-1/54R的可溶性表达及活性评价被引量：1
- 2014年
- 目的构建SDF-1/54R的原核可溶表达载体,并考查其对CXCR7的抑制作用。方法将PCR扩增的SDF-1/54r基因插入带有GST标签的可溶表达载体pET-41a+,并转化BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达的融合蛋白GST-SDF-1/54R通过SDS-PAGE和Western blotting进行检测,并利用GST亲和层析纯化。纯化产物经肠激酶酶切和纯化后得到目的蛋白SDF-1/54R。用SDF-1/54R处理CXCR7高表达的MCF-7细胞,利用MTT和趋化实验评价其对乳腺癌细胞增殖和转移的影响。结果利用新构建的可溶表达系统成功得到了目的蛋白SDF-1/54R,MTT和趋化实验证实SDF-1/54R对乳腺癌细胞MCF-7的增殖和转移具有明显的抑制作用。结论重组载体表达的可溶蛋白SDF-1/54R是一种良好的CXCR7特异性拮抗剂,具有开发成抗肿瘤药物的潜在应用价值。
- 曹园芝杨飞华马伟峰
- 关键词：CXCR7拮抗剂SDF-1可溶性表达
- CXCR7与肿瘤的生长和转移被引量：3
- 2014年
- CXCR7[chemokine(C-X-C motif)receptor 7]是一个近年来新发现的基质细胞衍生因子1(stromal cell derived factor1,SDF-1)的受体,由RDC1基因编码,通过与CXCL11及SDF-1结合发挥其生物学效应。CXCR7在多种肿瘤细胞表面高表达,在肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要作用,促进肿瘤细胞的存活和生长、黏附与侵袭、肿瘤血管新生及癌细胞转移。与其他趋化因子受体不同,CXCR7在与SDF-1结合后,并不引起钙离子内流和趋化反应,而是通过建立合适的趋化因子的梯度,与CXCR4[chemokine(C-X-C motif)receptor 4]相互协调发挥作用。以CXCR7为靶点的肿瘤分子治疗研究不断增加,有望为肿瘤治疗提供新的方法。
- 曹园芝杨飞华马伟峰
- 关键词：肿瘤CXCR7SDF-1
- CXCR4慢病毒表达载体的构建及细胞转染被引量：3
- 2015年
- 目的:构建高表达CXCR4慢病毒并转染MCF-7细胞,获得高表达CXCR4的MCF-7细胞。方法:RT-PCR法扩增CXCR4基因,构建重组质粒CXCR4/p Sin-EF2,与ps PAX2、p MD2G质粒共转染HEK293T细胞包装慢病毒,以空载体包装的病毒为对照,将包装慢病毒感染人乳腺癌细胞MCF-7。RT-PCR和Western blot检测转染前后CXCR4基因和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞表面CXCR4受体表达。结果:双酶切和测序结果证实重组质粒CXCR4/p Sin-EF2构建成功,转染HEK293T细胞获得高滴度慢病毒,RT-q PCR和Western blot证实病毒转染MCF-7细胞中CXCR4表达量显著增高(P<0.05),流式测得CXCR4阳性细胞由26.78%升到99.29%,而MCF-7Vector细胞膜表面CXCR4表达量与未转染病毒MCF-7细胞无明显差异。结论:成功构建CXCR4慢病毒表达载体,获得CXCR4受体稳定高表达的乳腺癌细胞。
- 段司沁范遥赵雪曹园芝谭毅龙北国马伟峰
- 关键词：CXCR4慢病毒乳腺癌细胞
- CXCR4特异性拮抗剂SDF-1P2G54的构建及活性评价被引量：1
- 2012年
- 目的对SDF-1进行遗传改造,将其第2位氨基酸由脯氨酸(P)突变为甘氨酸(G),且缺失其C-端α螺旋结构,以获得一种CXCR4特异性拮抗剂SDF-1P2G54。方法将PCR扩增的SDF-1突变体SDF-1p2g54的基因插入表达载体pET-30a(+),并转化BL21(DE3)菌株。IPTG诱导表达的重组蛋白SDF-1P2G54在变性条件下采用镍柱亲和层析纯化,并通过梯度稀释和超滤方法得以复性。利用趋化实验鉴定SDF-1P2G54对Jurkat细胞的趋化活性及对SDF-1趋化活性的抑制效应,流式细胞仪检测SDF-1P2G54诱导MOLT4细胞钙内流及细胞表面CXCR4内在化的能力。结果 SDF-1P2G54完全丧失激活CXCR4、趋化Jurkat细胞跨膜迁移和诱导MOLT4细胞钙内流的能力,却保持了与CXCR4的高亲和性,能有效抑制野生型SDF-1对Jurkat的趋化效应、诱导MOLT4细胞表面CXCR4的快速内在化。结论 SDF-1P2G54是一种新型的CXCR4特异性拮抗剂,具有开发成抑制HIV-1感染和癌细胞转移等重大疾病特效药物的潜在应用价值。
- 杨飞华龙北国谭毅龚雅马伟峰
- 关键词：基质细胞衍生因子-1CXCR4
- 重组腺病毒Ad-P2G-DCN的构建及在HEK-293细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 目的制备表达基质细胞衍生因子(SDF-1)拮抗剂P2G与饰胶蛋白聚糖(decorin,DCN)嵌合基因的重组腺病毒,并检测其在HEK-293细胞中的表达情况。方法以前期构建的pET-30a+/P2G-DCN为模板,PCR扩增目的基因P2G-DCN,并克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV;然后将化学合成的SDF-1信号肽序列插入P2G-DCN的5'端,构建为重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/SP-P2G-DCN;经PmeⅠ酶切线性化,与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAd-SP-P2G-DCN。PacⅠ酶切线性化的pAd-SP-P2G-DCN通过脂质体介导转染人胚肾转化细胞系HEK-293,包装并扩增重组腺病毒Ad-P2G-DCN。荧光计数确定病毒感染滴度,并以Western blot法检测嵌合蛋白P2G-DCN在HEK-293细胞中的表达情况。结果构建了携带P2G-DCN基因的重组腺病毒,该重组腺病毒感染HEK-293细胞后可高效分泌表达重组嵌合蛋白P2G-DCN。结论成功构建了重组腺病毒Ad-P2G-DCN,为后续系统研究Ad-P2G-DCN在肿瘤基因治疗中的作用奠定了实验基础。
- 马伟峰胡厚稳杨飞华蔡绍晖
- 关键词：基质细胞衍生因子饰胶蛋白聚糖腺病毒载体
