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魏刚
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- 所属机构:广州中医药大学中药学院
- 所在地区:广东省 广州市
- 研究方向:医药卫生
- 发文基金:广东省科技计划工业攻关项目
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- 铁皮石斛种质资源DNA身份证的构建及遗传相似性分析被引量:17
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- 余文霞雷胄熙袁媛吴玉林顺庆生魏刚胡柳萍胡菊婷黄璐琦
- 关键词:铁皮石斛简单重复序列遗传相似系数
- 霍山石斛与美花石斛多糖柱前衍生HPLC特征图谱比较被引量:9
- 2014年
- 目的研究比较霍山石斛与美花石斛多糖柱前衍生高效液相色谱(HPLC)特征图谱的差异。方法以盐酸水解石斛多糖,水解产物加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行衍生化,采用HPLC法分析单糖的衍生物。色谱柱为Kromasil 100-5 C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.02 mol·L^-1的乙酸铵溶液(冰乙酸调p H=6.7),梯度洗脱;检测波长为250 nm;柱温为30℃;流速为1 m L·min^-1。采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)生成对照图谱。结果 10批霍山石斛多糖柱前衍生特征图谱标示出6个特征峰,主要由D-甘露糖(71.8%)与D-葡萄糖(27.2%)组成,D-甘露糖与D-葡萄糖峰面积比值为2.05-3.71,此外含微量的D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖。10批美花石斛多糖柱前衍生特征图谱亦标示出6个特征峰,主要为D-甘露糖(42.9%)与D-葡萄糖(54.0%)组成,D-甘露糖与D-葡萄糖峰面积比值为0.67-0.98,此外含微量的D-半乳糖醛酸、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖。与对照图谱比较,10批霍山石斛、美花石斛的相似度分别为0.994-1.000,0.934-1.000,霍山石斛与美花石斛共有模式之间的相似度为0.871。结论该方法准确可靠,重复性好;两种石斛多糖构成差异较大,不宜混用。
- 黄月纯叶家宏戴亚峰任晋顺庆生魏刚
- 关键词:霍山石斛多糖柱前衍生化高效液相色谱法
- 阳春砂仁GC-MS特征指纹图谱“数字化”信息的构建与应用被引量:9
- 2008年
- 目的:建立阳春砂仁挥发油特征指纹图谱"数字化"信息模式,为阳春砂仁的内在质量评价和鉴定提供一种数字化标准。方法:采用GC-MS分析20批次阳春砂仁的主要成分,同时对1985年以来国内主要研究单位对16批次阳春砂仁的文献报道进行数据挖掘。结果:20批次阳春砂仁均含有α-蒎烯、茨烯、β-蒎烯、β-月桂烯、柠檬烯、芳樟醇、樟脑、异龙脑、龙脑、乙酸龙脑酯等10个主要特征成分,合计相对含量达(86.35±5.69)%,具有一定代表性;近20年来国内10余个主要研究单位报道的阳春砂仁大都含有以上10个特征成分,且相对含量也近似。以此10个特征指标成分计,本试验分析样品的均值与文献报道样品的均值相似度为0.990(夹角余弦法),由此合并数据处理以建立具有广泛代表性的阳春砂仁GC-MS特征指纹图谱"数字化"信息。"数字化"信息在药材质量评价中的应用表明,约85%以上阳春产砂仁的质量比较均匀稳定,与16个文献报道阳春砂仁相似度比对的结果显示与原文作者的结论基本一致;在药材品种鉴定中的应用表明,文献报道的10个非阳春砂仁中仅绿壳砂与阳春砂仁非常相似,而缩砂、长太砂、华山姜、山姜、长序砂仁等与阳春砂仁通过数字化模式可以明显区分开来。结论:阳春砂仁GC-MS特征指纹图谱数字化信息模式使在不同时间段(1985-2007)、不同仪器、色谱柱、色谱条件下的分析结果可以相互比对,适用于药材的质量评价与鉴定。
- 魏刚尹雪何建雄
- 关键词:阳春砂仁特征指纹图谱数字化相似度GC-MS
- 铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱优化及不同种源特征性分析被引量:15
- 2019年
- 目的:优化铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱分析方法,明确不同种源的共性成分与特异性成分。方法:色谱条件采用Kromasil 100-5 C18色谱柱;流动相四氢呋喃-乙腈-甲醇(10∶22∶5)-0.05%磷酸水溶液梯度洗脱;检测波长340nm;柱温30℃;流速1.0mL·min^-1。结果:27批铁皮石斛共标示出13个黄酮类特征峰,鉴别了6个黄酮碳苷(新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,夏佛塔苷,异夏佛塔苷,佛莱心苷,异佛莱心苷)与1个黄酮氧苷(芦丁)共7个特征峰。不同批次样品检出7~11个特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ为不同来源样品相对稳定的共有峰,芦丁、佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰差异较大。根据特征峰的相对丰度,可将样品分为3大类,其中第Ⅰ类10批样品主要来源于广东、江西、福建、浙江(武义)等丹霞地貌(即"丹霞种"),以检出明显的芦丁强峰为特征;第Ⅱ类11批样品主要来源于云南、广西等地(包括了"云南广南种""广西铁皮兰种"),以能检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰为特征;而第Ⅲ类6批样品主要来源于浙江(即"浙江本地种"),以难以检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰,检出不同程度的芦丁峰为特征。比较"丹霞种"与"广西铁皮兰种"的仿野生和大棚栽培铁皮石斛HPLC特征图谱,结果仿野生铁皮石斛中的特征峰在大棚栽培石斛中也能稳定检出,验证了铁皮石斛种源的可靠性。结论:所建立的分析方法能对铁皮石斛黄酮类特征峰达到较好的分离效果,重复性好,基本明确了不同种源铁皮石斛的共性及特异性黄酮苷类成分。提示新西兰牡荆苷Ⅱ适合作为特征图谱的参照物峰;可根据芦丁相对丰度或佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰的检出及相对丰度作为铁皮石斛"丹霞种""云南广南与广西铁皮兰种"与"浙江本地种"的判断依据。
- 梁芷韵谢镇山黄月纯袁媛周楚娟王雅文魏刚
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- 【目的】评价不同贮藏年份霍山石斛枫斗的质量情况。【方法】根据2020年版《中国药典》霍山石斛项进行高效液相色谱(HPLC)特征图谱分析,同时测定2个主要黄酮成分的含量;根据课题组前期建立的D-甘露糖与D-葡萄糖的HPLC柱前衍生方法测定霍山石斛枫斗的D-甘露糖与D-葡萄糖含量。【结果】12批不同贮藏年份(0、2、4、6年)霍山石斛枫斗样品标示出12个特征峰,相似度为0.971~0.997,相似度较高;12批不同贮藏年份霍山石斛枫斗中夏佛塔苷、异夏佛塔苷含量及两者之和分别为0.0158~0.0317 mg/g,0.0354~0.0665 mg/g,0.0513~0.0915 mg/g;D-甘露糖、D-葡萄糖含量以及两者的含量之和分别为11.82%~22.11%,10.89%~16.40%,23.87%~37.19%;D-甘露糖、D-葡萄糖峰面积之比为0.89~2.07。【结论】霍山石斛枫斗在6年贮藏期内,主要黄酮和多糖成分均较一致,质量较好。
- 戴亚峰胡莉王诗文张林纵瑞叶黄月纯魏刚
- 关键词:高效液相色谱柱前衍生
- 丹霞种、云南广南种铁皮石斛中主要黄酮苷的分离鉴定被引量:10
- 2019年
- 目的:对2个道地种源(丹霞种、云南广南种)铁皮石斛中的黄酮苷成分进行提取分离、纯化及结构鉴定,为确认铁皮石斛的共性黄酮苷成分提供实验依据。方法:(1)采用70%乙醇提取两个产地铁皮石斛叶的总黄酮成分,依次采用有机溶剂石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取粗提物,运用大孔吸附树脂AB-8,LH-20型羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)以及ODS柱色谱对水饱和正丁醇萃取部位进行分离纯化,通过化合物的理化性质结合HPLC,ESI-MSn,1H-NMR,13C-NMR等现代波谱学方法鉴定黄酮苷结构。(2)利用HPLC分析比较不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛的黄酮苷共有成分。结果:从2个产地铁皮石斛叶中共分离得到了5个黄酮苷化合物,经鉴定为芦丁,新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,佛莱心苷,异佛莱心苷。4个不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛茎中均能检出新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ丰度相对较大,而佛莱心苷、异佛莱心苷在云南广南种、广西铁皮兰种中出峰明显,芦丁则在丹霞种中尤为突出。结论:新西兰牡荆苷Ⅱ为铁皮石斛不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)的共性黄酮苷成分,可作为铁皮石斛特征图谱的参照物。
- 张小凤周春花张龙开蒋梅谢镇山袁媛黄月纯罗颖懿魏刚
- 关键词:铁皮石斛黄酮苷芦丁
- 铁皮石斛与霍山石斛中甘露糖、葡萄糖及柚皮素的含量比较被引量:12
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- 目的:优化铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖的柱前衍生HPLC含量测定方法以及柚皮素HPLC含量测定方法,比较铁皮石斛与霍山石斛中这3种成分的含量差异。方法:在2015年版《中国药典》铁皮石斛甘露糖柱前衍生HPLC含量测定项下色谱条件基础上,选择乙腈-0.02mol·L^-1乙酸铵溶液为流动相系统梯度洗脱,同时测定甘露糖与葡萄糖的含量,并分析甘露糖与葡萄糖的峰面积比值;采用Kromasil100-5C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);检测波长250nm;流速1.0mL·min^-1;柱温30℃。柚皮素HPLC含量测定采用Kromasil 100-5 C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相乙腈-甲醇-0.4%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长290nm;流速0.8mL·min^-1;柱温40℃。结果:甘露糖与葡萄糖在0.15~3.0,0.075~2.25μg线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率分别为99.01%(RSD2.1%),101.69%(RSD2.0%),重复性、耐用性等其他方法学研究符合要求。43批不同产区铁皮石斛中甘露糖、葡萄糖以及两者的含量之和分别在12.75%~36.40%,2.93%~18.39%,19.23%~54.58%,除极少数样品外,基本符合2015年版《中国药典》甘露糖含量限度要求,甘露糖与葡萄糖含量之和也接近总多糖含量限度要求;含量与产区相关性不显著。12批霍山石斛的总糖则分别在14.33%~29.47%,6.64%~15.20%,25.73%~44.37%,其含量以及峰面积比值基本落在铁皮石斛范围期间,多批次的平均含量也基本与铁皮石斛一致(约33%左右)。柚皮素在0.0208~0.8320μg线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为101.96%(RSD1.8%)。11批铁皮石斛与7批霍山石斛的柚皮素含量分别为0.0532~0.1224mg·g^-1(均值为0.0810mg·g^-1),0.0403~0.0900mg·g^-1(均值为0.0683mg·g^-1),铁皮石斛含量稍高于霍山石斛,但含量均亦未达到0.02%的质量标准下限的常规要求。结论:铁皮石斛中甘露糖与葡萄糖HPLC含量测定方法重复性较好,用两者含量之和替代具有较大误差的总多糖含量作为测定指标具有可行性;�
- 王雅文梁芷韵谢镇山叶家宏欧斯建周楚娟袁媛黄月纯魏刚
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- 铁皮石斛共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ的体外抗氧化与诱导HepG2细胞凋亡的作用被引量:17
- 2019年
- 目的:对不同道地种源铁皮石斛的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ(芹菜素-6,8-二-C-葡萄糖苷,vicenin Ⅱ)进行体外抗氧化及诱导肝癌HepG2细胞凋亡的活性研究。方法:采用2,2-联苯基^(-1)-苦基肼法(DPPH),2-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸法(ABTS)和铜离子还原法对vicenin Ⅱ(0.005~1g·L^-1)进行体外的抗氧化活性研究;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测viceninⅡ(12.5~100μmol·L^-1)对人6种不同的肿瘤细胞体外的增殖抑制作用;后续凋亡实验viceninⅡ浓度为75μmol·L^-1,采用Hoechst33258染色,荧光显微镜进行HepG2细胞形态学观察;应用流式细胞术,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)检测HepG2细胞凋亡率;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time PCR)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路及相关凋亡基因的mRNA表达。结果:Vicenin Ⅱ质量浓度为1g·L^-1时,对DPPH的清除率和Cu2+还原率为48.82%和22.01%(P<0.01);当viceninⅡ质量浓度为0.5g·L^-1时,对ABTS清除率为86.88%(P<0.01);viceninⅡ显著抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,75μmol·L^-1的vicenin Ⅱ作用48h后,细胞存活率为45.69%(P<0.01),细胞凋亡率为14.57%(P<0.01),升高B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/Bcl-2,半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-8,p38,细胞外信号调节激(ERK),c-Jun氨基末端酶(JNK),核转录因子-κB(NF-κB)mRNA表达(P<0.01)。结论:铁皮石斛不同道地种源的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ在体外具有一定的抗氧化作用,能有效抑制HepG2细胞增殖,并可能通过调控MAPK通路及Bax/Bcl-2途径诱导HepG2细胞凋亡。
- 罗颖懿李运容雷胄熙袁媛黄月纯魏刚
- 关键词:铁皮石斛黄酮苷抗氧化HEPG2细胞凋亡
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- 魏刚
- 关键词:软组织损伤急腹症双柏散药理学中医药疗法