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烟草PsaA/PsaB基因家族鉴定及其对逆境胁迫的响应被引量：1: 2024年; PsaA和PsaB是光系统Ⅰ的中心蛋白,在植物光合作用及逆境调控中发挥重要功能。烟草(Nicotiana tabacum L.)是植物功能基因组学研究的模式作物,目前关于其PsaA和PsaB基因功能的研究较少。为解析烟草PsaA/PsaB基因对逆境胁迫的响应规律,在烟草基因组中鉴定PsaA/PsaB基因家族,并对其理化性质、亚细胞定位、系统进化、Motif基序、启动子调控元件进行分析。结果表明:烟草中共有27个PsaA/PsaB基因,与拟南芥相比,烟草PsaA/PsaB基因家族大量扩增,根据系统发育和结构特征可分为3类亚家族。烟草PsaA/PsaB基因启动子中含有大量响应光、低温、干旱及植物激素等的顺式作用元件。RT-qPCR分析发现,多数烟草PsaA/PsaB基因在低温胁迫下表达量上调,上调数目为8个;而在聚乙二醇、茉莉酸甲酯胁迫下表达量下调,下调数目分别为8个和7个;马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)和烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)感染后大多数烟草PsaA/PsaB基因表达量下调,PVY感染后下叶肉和叶脉组织中基因下调数目分别为19个和17个,其中叶脉中下调更明显,TMV感染后基因下调数目为9个。可见,烟草PsaA/PsaB基因参与烟草对多种非生物胁迫的应答过程,研究结果为进一步探索PsaA/PsaB基因在调控植物对逆境胁迫响应中的作用提供了参考。; 常永春尹国英燕一波郭玉双羽王洁彭一洪吴玉香; 关键词：烟草

牛肺炎链球菌重组PsaA蛋白对牛胚气管上皮细胞黏附抑制作用的研究被引量：3: 2024年; 为研究牛肺炎链球菌的黏附蛋白—肺炎链球菌表面黏附素A (PsaA)对牛肺炎链球菌黏附牛胚气管上皮细胞的影响,本研究利用PCR扩增牛肺炎链球菌psaA基因,构建重组质粒pET32a-PsaA,经双酶切和测序鉴定正确后,将阳性重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞后进行IPTG诱导表达,采用SDS-PAGE和western blot鉴定重组PsaA蛋白(rPsaA)的表达情况及反应原性,结果显示,rPsaA在上清和沉淀中均获得了表达,且具有较好的反应原性。将牛胚气管上皮细胞与1.3×10^(8)cfu/mL的牛肺炎链球菌稀释液于37℃共孵育后,利用间接免疫荧光试验(IFA)检测牛肺炎链球菌对牛胚气管上皮细胞的黏附性,结果显示,可观察到黏附在牛胚气管上皮细胞的牛肺炎链球菌的绿色荧光,即牛肺炎链球菌可以黏附牛胚气管上皮细胞。利用牛肺炎链球菌稀释液孵育经不同浓度rPsaA预处理的牛胚气管上皮细胞后,对黏附的细菌计数,结果显示,rPsaA可以极显著减少牛肺炎链球菌对牛胚气管上皮细胞的黏附菌数(P<0.01)。利用本研究制备的rPsaA多克隆抗体和肺炎链球菌阳性血清分别与牛肺炎链球菌作用后,与牛胚气管上皮细胞孵育,对黏附的细菌计数,结果显示,rPsaA多克隆抗体与肺炎链球菌阳性血清均能有效减少牛肺炎链球菌对牛胚气管上皮细胞的黏附数。本研究经原核系统表达了牛肺炎链球菌rPsaA,并首次证明rPsaA具有影响牛肺炎链球菌黏附牛胚气管上皮细胞的作用,该结果为探究抑制肺炎链球菌黏附呼吸道上皮细胞的机理以及肺炎链球菌亚单位疫苗的研究奠定了基础。; 孙雅婕郭婷周雅坪赵红梅赵逢淼高源李梦思郝永清; 关键词：肺炎链球菌原核表达

牛肺炎链球菌的分离鉴定及PsaA蛋白亚单位疫苗的研究: 牛肺炎链球菌病是由肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)感染引起的主要以急性败血症为特征的传染性疾病,在自然界中分布广泛,是一种人畜共患病,肺炎链球菌常在人和动物的呼吸道上定植,形成带菌状态。在定...; 孙雅婕; 关键词：肺炎链球菌原核表达免疫保护

基于PDB卷曲库研究酰胺酶PsaA特异性降解除草剂敌稗的催化机制: 敌稗（Propanil）是一种广泛使用的酰胺类除草剂,对农产品产量和质量的提升发挥重要作用,但其在土壤中的残留对环境和人类健康造成了严重威胁。土壤微生物在酰胺类除草剂的降解过程中发挥关键作用,且其具有低成本和环境友好等优...; 姚贵; 关键词：酰胺酶敌稗

一种肺炎链球菌重组蛋白PsaA-PspA23原核表达载体的构建及表达: 2018年; 目的优化肺炎疫苗重组蛋白基因Psa A-Psp A23的同源区序列,阻止该基因的组氨酸标签(His-tag)融合表达,对突变后的目的基因进行表达及鉴定。方法以肺炎疫苗重组蛋白基因Psa A-Psp A23为模板,设计2对具有重叠区的特异性引物,并分别对该重组基因进行扩增,得到Psa A-Psp A2和Psp A3的CDR区(亚类决定区)基因片段。利用重叠延伸PCR(Overlap PCR)技术,将Psa A-Psp A2基因片段和Psp A3的CDR区基因片段连接,得到同源区优化后的基因片段。利用PCR技术扩增同源区优化后的基因片段,使该基因3′末端引入终止密码子,阻止Psa APsp A23基因表达载体上His-tag的融合表达。将得到的片段同源区优化且无His-tag融合表达的目的基因连接至p ET20b载体后,转入大肠埃希菌(E.coli)中进行表达,表达产物进行Western blot分析。结果重组表达质粒p ET20b-Psa A-Psp A23经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;转化E.coli中,37℃,IPTG终浓度1 mmol/L诱导5 h,获得可溶性表达的重组蛋白,且无His-tag。结论 Psa A-Psp A23蛋白基因同源区优化及His-tag成功去除,并在原核表达系统E.coli中可溶性表达,可为Psa A-Psp A23蛋白疫苗的进一步研究奠定基础。; 甘忠桥孟祥玉李博陈晓瑞张悦袁剑文梁丹虹吴永革谷铁军; 关键词：组氨酸标签重叠延伸PCR

肺炎链球菌表面抗原PsaA-PspA融合蛋白双抗夹心ELISA定量检测方法的建立及验证被引量：3: 2018年; 目的建立快速测定肺炎链球菌表面抗原PsaA-PspA融合蛋白含量的双抗夹心ELISA方法,并进行验证。方法制备PsaA-PspA抗原,确定PsaA单抗和PsaA-PspA兔多抗的最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA方法。对方法的抗原特异性、精密性和准确性进行验证,并分析变性抗原对测定的影响。结果单抗和兔多抗最佳稀释倍数为1∶500和1∶10 000。建立的双抗夹心ELISA法检测PsaA-PspA抗原的浓度范围为70~560 ng/m L,R^2为0.993 8;该方法不适用于其他抗原的测定,但可用于鉴定抗原是否变性;该方法检测不同批次PsaA-PspA抗原的批内平均变异系数(CV)为4.9%,批间平均CV为19%,平均回收率为88.98%。结论建立的双抗夹心ELISA方法特异性、精密性和准确性良好,可用于PsaA-PspA融合蛋白浓度的检测,且可检测抗原是否变性。; 孙青赵兴红吴永革谷铁军; 关键词：肺炎链球菌表面抗原酶联免疫吸附测定

CTB增强PsaA疫苗对肺炎链球菌急性中耳炎的保护作用被引量：4: 2017年; 目的研究以霍乱毒素B(CTB)作为PsaA蛋白疫苗黏膜佐剂经鼻腔黏膜途径免疫在BALB/c小鼠体内诱导的特异性免疫应答能力以及对肺炎链球菌急性中耳炎的保护作用。方法 6~8周龄的BALB/c小鼠随机分为3组,分别接受PsaA蛋白免疫(PsaA组,15μg PsaA蛋白),PsaA蛋白及CTB免疫(PsaA/CTB组,15μg PsaA/4μg CTB),CTB免疫(CTB组,4μg CTB),经鼻腔途径免疫,相同剂量和方法每周免疫两次,连续三周,末次免疫后两周收集鼻腔灌洗液、中耳灌洗液及支气管肺泡灌洗液检测特异性IgA抗体反应;收集血清,检测特异性IgG、IgG1及IgG2a抗体反应;末次免疫后2周,小鼠经鼓膜注射14型肺炎链球菌,攻毒后5天组织病理学评估中耳炎症程度。结果PsaA/CTB组鼻腔黏膜免疫获得了较高水平的全面免疫应答:鼻腔、中耳和支气管肺泡灌洗液中特异性IgA抗体水平明显高于PsaA组和CTB组(P<0.05);血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a抗体水平明显高于PsaA组和CTB组(P<0.05);攻毒后5天PsaA/CTB组中耳炎症细胞数少于PsaA和CTB组(P<0.05)。结论 CTB是肺炎链球菌蛋白疫苗PsaA有效的黏膜免疫佐剂,黏膜免疫也是PsaA有效的免疫途径,该免疫策略研究为新一代肺炎链球菌疫苗的设计提供了实验基础。; 戴文佳梁琼刘向李雯徐江红; 关键词：肺炎链球菌黏膜免疫 PSAA 急性中耳炎

蕨类植物psaA基因的分子进化研究被引量：4: 2017年; 采用"放松分子钟"模型、氨基酸位点正选择模型和分子内共进化网络估算方法,对蕨类植物光合系统Ⅰ核心蛋白PSAA编码基因psaA的进化趋势进行了研究。结果显示,叶绿体基因psaA编码区全序列具备成为蕨类植物系统发育关系重建位点的潜力,与rbcL基因联合后能构建高后验概率的系统发育树;蕨类植物的PSAA蛋白中存在一些曾经历正选择的氨基酸位点,其中29个位点聚合成为16个共进化组,通过共进化网络的方式协同影响光合系统Ⅰ的内部调整,提升其在被子植物兴起后光合环境下的适应能力。本文对蕨类植物进化潜能与分子机理的研究结果为揭示蕨类植物适应新生境提供了科学依据,也为植物系统分类学研究提供了分子依据。; 吴筱娉森林陈楠张潇马朝霞张钦宇; 关键词：蕨类植物适应性进化

Immunogenicity and protective immunity against otitis media caused by pneumococcus in mice of Hib conjugate vaccine with PsaA protein carrier被引量：1: 2016年; This study evaluated the immunogenicity and protective immunity of a Hemophilus influenzae b （Hib） polysaccharide conjugate vaccine with the pneumococcal surface adhesin A （PsaA） protein carrier in young mice. The Hib polysaccharide was conjugated with the rPsaA protein carrier, which was produced using recombinant DNA technology. A total of 15 young mice aged 3 weeks to 5 weeks were immunized with the conjugate vaccine, and another 15 young mice of the same age were immunized with the licensed Hib-tetanus toxoid （TT） vaccine. Furthermore, the third group of 15 young mice was inoculated with phosphate buffer saline as control. The immunized mice were inoculated with pneumococcus in the middle ear. Results showed that IgG antibody responses against both the PsaA protein and Hib polysaccharide were observed in the Hib-PsaA group. However, no statistical difference was observed in the titer of ｜gG against the Hib polysaccharide between Hib-PsaA and Hib-TT groups. The elimination rate of pneumococcus and the inflammation of the middle ear showed the effectiveness of protective immunity against otitis media caused by pneumococcus. Our results suggest that the Hib polysaccharide can be successfully conjugated with rPsaA via amide condensation. This new Hib-PsaA conjugate vaccine can induce both anti-PsaA and anti-Hib immune responses in young mice and elicit effective protection against acute otitis media caused by pneumococcus.; Zeyu ChenRong GuoJianghong XuChuangjun Qiu; 关键词：IMMUNOGENICITY

肺炎链球菌融合蛋白PsaA-PcpA疫苗的应用研究: 在全世界范围内特别是发展中国家,肺炎是引起儿童和老人高发病率和死亡率的疾病。根据WHO报道,每年约有160万人感染肺炎致死,其中70万至100万病例是儿童。肺炎链球菌是导致肺炎的主要病原体,同时它还能引发鼻窦炎、中耳炎、...; 赵博; 关键词：融合蛋白; 文献传递

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