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龟鹿二仙胶对膝骨关节炎大鼠软骨细胞IHH-GLI信号通路的影响: 2024年; 目的:观察龟鹿二仙胶含药血清对白介素-1β(IL-1β)诱导大鼠肥大软骨细胞印度刺猬蛋白-胶质细胞瘤转录因子(IHH-GLI)信号通路的作用,探讨龟鹿二仙胶对膝骨关节炎(KOA)的影响。方法:制备含药血清,提取大鼠软骨细胞,分为空白组、模型组、龟鹿组、抑制剂组,构建大鼠KOA软骨细胞肥大模型,免疫荧光观察GLI入核情况。CCK-8检测含药血清干预最佳时效及量效关系。含药血清干预24 h后,Real-time PCR、Western Blot检测软骨细胞IHH、平滑蛋白(Smo)、Runt相关转录因子2(Runx2)、X型胶原(COL10A1)和基质金属蛋白酶13(MMP-13)的mRNA及蛋白表达情况。结果:荧光显微镜下,模型组GLI信号进入细胞核。与模型组比较,龟鹿组及抑制剂组IHH、Smo、Runx2、COL10A1、MMP-13 mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05),IHH、Smo、Runx2蛋白表达显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶调控肥大软骨细胞的分解合成代谢平衡,减少细胞外基质的降解和钙化,改善失稳态环境,可能与其抑制IHH-GLI信号通路有关。; 郑珍萍吴伟欣李晔王和鸣耿秋东李楠; 关键词：膝骨关节炎龟鹿二仙胶

IRE1α regulates the PTHrP-IHH feedback loop to orchestrate chondrocyte hypertrophy and cartilage mineralization: 2024年; Cartilage development is controlled by the highly synergistic proliferation and differentiation of growth plate chondrocytes,in which the Indian hedgehog(IHH)and parathyroid hormone-related protein-parathyroid hormone-1 receptor(PTHrP-PTH1R)feedback loop is crucial.The inositol-requiring enzyme 1a/X-box-binding protein-1 spliced(IRE1α/XBP1s)branch of the unfolded protein response(UPR)is essential for normal cartilage development.However,the precise role of ER stress effector IRE1α,encoded by endoplasmic reticulum to nucleus signaling 1(ERN1),in skeletal development remains unknown.Herein,we reported that loss of IRE1α accelerates chondrocyte hypertrophy and promotes endochondral bone growth.ERN1 acts as a negative regulator of chondrocyte proliferation and differentiation in postnatal growth plates.Its deficiency interrupted PTHrP/PTH1R and IHH homeostasis leading to impaired chondrocyte hypertrophy and differentiation.XBP1s,produced by p-IRE1α-mediated splicing,binds and up-regulates PTH1R and IHH,which coordinate cartilage development.Meanwhile,ER stress cannot be activated normally in ERN1-deficient chondrocytes.In conclusion,ERN1 deficiency accelerates chondrocyte hypertrophy and cartilage mineralization by impairing the homeostasis of the IHH and PTHrP/PTH1R feedback loop and ER stress.ERN1 may have a potential role as a new target for cartilage growth and maturation.; Mengtian FanNana GengXingyue LiDanyang YinYuyou YangRong JiangCheng ChenNaibo FengLi LiangXiaoli LiFengtao LuoHuabing QiQiaoyan TanYangli XieFengjin Guo; 关键词：IHH

左归丸含药血清对成骨细胞中Ihh、Ptch、Smo、GLi1蛋白表达及破骨细胞数量的影响: 2024年; 目的探讨左归丸含药血清对成骨细胞中Hedgehog-GLi通路关键蛋白表达及破骨细胞数量的影响。方法选用50只雌性SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组、造模组。造模组大鼠切除双侧卵巢,12周后随机分为卵巢切除组(ovariectomy,OVX)、阳性对照组和左归丸组。阳性对照组大鼠灌服戊酸雌二醇混悬液,左归丸组大鼠灌服左归丸水煎液,连续干预7 d。末次给药1.5 h后,腹主动脉取血制备各组相应含药血清。建立成骨细胞、破骨细胞、骨磨片共培养体系,分为空白对照血清组、假手术血清组、OVX血清组、阳性对照血清组、左归丸含药血清组、激动剂组和激动剂+左归丸含药血清组,分别添加各组对应血清。免疫荧光法检测成骨细胞印度刺猬蛋白(Indian hedgehog,Ihh)、碎片蛋白(patched,Ptch)、润滑蛋白(smoothened,Smo)及GLi1蛋白表达;免疫组化法检测成骨细胞骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)、核因子受体激活因子-κB配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)蛋白表达;对破骨细胞进行TRAP染色,计算TRAP+细胞数;ELISA检测共培养体系上清液中TRAP的含量。结果与假手术血清组比较,OVX血清组Ihh、Ptch、Smo、GLi1蛋白表达水平显著上调(P<0.01),RANKL/OPG比值增高;TRAP+细胞数和细胞上清液中TRAP含量亦明显增加(P<0.05)。与OVX血清组比较,左归丸含药血清组Ihh、Ptch、Smo、GLi1的蛋白表达明显下调,RANKL/OPG比值下降;TRAP+细胞数和细胞上清液中TRAP含量明显降低(P<0.05)。与激动剂组比较,加入左归丸含药血清后,Ihh、Ptch、Smo、GLi1的蛋白表达及RANKL/OPG比值均明显下降,TRAP+细胞个数及TRAP含量亦明显降低(P<0.05)。结论左归丸含药血清可通过抑制异常活跃的Hedgehog-GLi信号通路,使Ihh、Ptch、Smo、GLi1的蛋白表达水平下调,降低RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞的数量和活性,起到减少骨丢失作用。; 史婧儒廖泽绮王雨荷赵宏艳张元月刘梅洁; 关键词：成骨细胞

生理性拉应力通过Nell-1/Ihh信号通路对ATDC5软骨细胞分化的调控作用: 2024年; 目的:探讨生理性拉应力对软骨细胞分化的调控作用,并阐明其相关信号通路机制。方法:体外培养软骨ATDC5细胞,应用四点弯曲细胞力学加载仪对其施加生理性拉应力,首先分为对照组和拉应力组(2 000μstrain/2 h组),另分为不同力值(1 000、2 000和3 000μstrain)加力时间为2 h和力值为2 000μstrain不同加力时间(1、2和4 h)组,同时设未加力的细胞为对照组,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、Ⅹ型胶原(Col-Ⅹ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、性别决定区Y框蛋白9 (SOX9)、血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Nel样1型分子(Nell-1)、Runt相关转录因子2 (Runx2)、印度刺猬因子(Ihh)、补缀同源物1 (Ptch-1)、GLI家族锌指蛋白1 (Gli-1)和刺猬因子相互作用蛋白1 (Hhip-1) mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中Nell-1、Runx2和Ihh蛋白表达水平。ATDC5细胞分为对照组、环巴胺组、拉应力组和环巴胺+拉应力组,采用RT-qPCR法检测各组细胞中Nell-1、Ihh、Ptch-1、Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中Nell-1和Ihh蛋白表达水平。结果:与对照组比较,2 000μstrain/2 h组细胞中Col-Ⅱ、 Col-Ⅹ、 Aggrecan、 SOX9、VEGF和PCNA mRNA表达水平均明显升高(P<0.01)。在对细胞施加2 000μstrain不同加力时间(1、2和4 h)或不同力值(1 000、2 000和3 000μstrain) 2 h的拉应力后,与对照组比较,随时间的延长或力值的增加其他各组细胞中Runx2 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01),Nell-1、Ihh、 Ptch-1、 Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01),且在2 000μstrain/2 h时达到最高,随后出现回落但仍明显高于对照组(P<0.01)。Western blotting检测,各组细胞中Nell-1、Runx2和Ihh蛋白表达水平与mRNA表达水平变化趋势一致。环巴胺预处理后,与对照组比较,环巴胺组细胞中Ihh、Ptch-1、Gli-1和Hhip-1 mRNA表达水平均明显降低(P<0.01),�; 董紫薇齐慧川马俊薛晴聂瑾涵于航胡敏; 关键词：软骨细胞

基于Hedgehog信号通路探讨Shh和Ihh蛋白在原发性骨质疏松症患者血清中的表达: 2024年; 骨质疏松症(OP)是一种由于骨量降低、骨脆性增加而导致易发生骨折的疾病,可分为原发性和继发性两大类。原发性骨质疏松症是指没有明确的疾病或者药物影响,由于患者自身的代谢因素引起的骨质疏松症,被归属为“骨痿”“骨枯”“骨痹”的范围,根据发病的病因病机,可将其主要分为肝肾阴虚、脾肾阳虚和气滞血瘀三种证型。Hedgehog信号通路可直接调控成骨细胞和破骨细胞来维持两者功能的动态平衡,同时Hedgehog信号通路能抑制间充质干细胞成脂化,从而预防原发性骨质疏松症。本文总结了近几年来Hedgehog信号通路对骨质疏松影响的研究成果,并探讨了Shh和Ihh蛋白在原发性骨质疏松症患者血清中的表达,以期能够进一步完善Hedgehog信号通道与骨质疏松关系的研究,同时为临床上治疗骨质疏松提供更多依据。; 杨仁慧王怡璇甘胜露金尚文王怡曹跃朋(指导); 关键词：骨质疏松症 HEDGEHOG信号通路 SHH IHH

IHH 过表达对鸡原代软骨细胞增殖和分化的影响: 2023年; 为探究印度刺猬因子(IHH)基因对鸡原代软骨细胞增殖和分化的调控作用,本研究根据IHH基因序列信息,构建真核过表达载体(OV-IHH);采用双酶切和测序进行鉴定,并将其转染鸡原代软骨细胞;采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,对软骨细胞进行成骨诱导分化至21 d,采用ALP试剂盒检测细胞ALP活性。结果表明,IHH真核过表达载体构建成功,与对照组和空载体组(OV-NC)相比,过表达组IHH基因的mRNA表达显著增加(P<0.01),过表达效率扩大2700倍左右。过表达IHH促进细胞周期从G1期到S期的转换,从而促进增殖,抑制细胞凋亡,且ALP活性升高,促进细胞分化。综上,IHH基因显著影响鸡软骨细胞的生长发育,研究结果为进一步解析IHH基因调控鸡匍匐性状的作用机制提供理论依据。; 金四华贾富民何培莉贾羽晴税斐刘旭玲刘星王新徐嫚耿照玉; 关键词：IHH 过表达增殖分化

鸡IHH基因生物信息学及组织特异性表达分析被引量：1: 2023年; 为分析鸡印度刺猬因子(Indian hedgehog,IHH)基因生物信息学及IHH基因在不同组织中特异性表达规律,选取体重相近、健康强健的6只鸡,借助生物信息学手段,对IHH基因结构、启动子和CpG岛进行分析,并通过实时荧光定量PCR检测IHH基因在鸡心、肝、脾、肺、肾、软骨、下丘脑、胸肌、十二指肠和胸腺组织中的特异性表达规律,同时对IHH蛋白进行相似性比较,并利用生物信息学分析IHH蛋白的理化和结构特性。结果表明,1)鸡IHH基因开放阅读框长度为1227 bp,可编码408个氨基酸,具有3个外显子、4个核心启动子区和1个CpG岛。2)成功扩增IHH基因,IHH基因在鸡各组织中均有不同水平的mRNA表达,在软骨组织中相对表达量最高,在心、脾和胸腺组织中的表达量相对较低。3)鸡IHH蛋白在禽类中保守性较高,IHH蛋白大小为44.82936 ku,属于偏碱性蛋白,具有1个跨膜端和1个信号肽;IHH蛋白二级结构中无规则卷曲的比例最高(44.12%),只含有1个HH-Signal功能域,内含大部分丝氨酸磷酸化位点,该蛋白还有14个苏氨酸磷酸化位点和5个酪氨酸磷酸化位点,鸡IHH蛋白存在1处N型糖基化位点和6处O型糖基化位点。综上,鸡IHH基因有3个外显子,有多个启动子区,在软骨组织中极显著高表达,鸡IHH蛋白是具有偏碱性、强热稳性和低亲水性的分泌型蛋白,IHH氨基酸序列在物种进化过程中比较保守,本研究为深入研究鸡IHH基因对软骨发育的调控作用提供依据。; 金四华税斐徐媛贾羽晴夏晶晶王鑫贾富民耿照玉; 关键词：IHH 生物信息学特异性表达

Ihh通过调控软骨细胞的肥大化及次级骨化中心的形成影响四肢生长板的发育: 目的:　　在生长板的发育过程中，敲除肥大化软骨细胞中的Ihh,观察生长板的发育变化及相关因子的表达变化。并进一步在全软骨中敲除Ihh,通过对比肥大化软骨细胞中Ihh的表型及相关因子的表达情况，观察明确Ihh在生长板肥大化...; 董政权; 关键词：次级骨化中心

Ihh慢病毒介导的ADSCs复合兔自体富血小板血浆促进兔膝关节软骨缺损修复的实验研究: 目的:(1)研究印度刺猬蛋白(Indian hedgehog,Ihh)能否促进脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)向软骨分化;(2)观察Ihh通过慢病毒载体介导转染后的ADSCs...; 田杰; 关键词：软骨损伤富血小板血浆

不同方式运动对生长期大鼠Ihh/PTHrP信号通路及骨纵向生长的影响: 2023年; 目的:探索不同方式运动对生长期大鼠Ihh/PTHrP信号通路相关分子表达及软骨内成骨导致骨纵向生长的影响。方法:将生长期大鼠随机分为对照组(C),游泳组(S),跑台组(R)和下跳组(D),进行6周不同方式的运动,利用MicroCT对骨组织形态学,以及各组生长板软骨细胞的Ihh、PTHrP免疫组化的阳性区域进行比较,利用RT-PCR、west-bloting检测细胞因子mRNA和蛋白表达。结果:1.只有下跳组大鼠股骨皮质骨骨密度有显著性增加(P<0.05)。2.R组和D组PTHrP mRNA的表达水平都有显著性上调(P<0.05);Ptc mRNA的表达水平,与C组相比,R组D组有显著性上调(P<0.05);Smo mRNA的表达水平组间无显著性差异(P>0.05)。3.Ihh蛋白表达水平与C组相比,R组和D组都有非常显著性增加(P<0.01),且D组与R组相比也有非常显著性增加(P<0.01);PTHrP蛋白表达水平与C组相比R组和D组都有非常显著性增加(P<0.01),与S组相比,R组有显著性增加(P<0.05),D组的有非常显著性增加(P<0.01)。4.生长板免疫组化结果比较,R组和D组肥大层软骨细胞的Ihh的阳性区域明显大于C组和S组,D组尤为明显,而且肥大软骨细胞排列有序,肥大效果明显。PTHrP免疫组化结果看,C组和S组软骨细胞的阳性区域没有Ihh免疫组化结果明显,R组和D组,尤其是D组,可以明显看出非肥大层的宽度也大于C组和S组,而且增殖软骨细胞排列有序,增殖阳性区域效果明显。Ihh mRNA的表达水平与C组比较,R组和D组都有非常显著性上调(P<0.01)。结论:下跳运动可显著激活Ihh/PTHrP信号通路,促进生长期大鼠生长板软骨内成骨,更有利于促进骨的纵向生长。; 赵常红李世昌孙朋徐帅方幸; 关键词：信号通路软骨内成骨

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