李莉
- 作品数：7 被引量：15H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金江苏省临床医学科技专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 中波紫外线对体外培养HaCaT细胞MAPK信号通路的影响被引量：3
- 2015年
- 目的 探讨中波紫外线照射后不同时间点体外培养的HaCaT细胞MAPK信号通路受调控效应.方法 1.5、4.5、7.5、10、20、30、50 mJ/cm2中波紫外线照射HaCaT细胞后8h,对照组细胞除不进行UVB照射外,其他处理同各剂量UVB组,蛋白免疫印迹法测定ERK1/2、JNK和p38蛋白表达及磷酸化水平;50 mJ/cm2中波紫外线照射HaCaT细胞,蛋白免疫印迹法测定照射后2、4、8、12h4个时间点,细胞ERK1/2、JNK和p38蛋白表达及磷酸化水平.使用Quantity One软件计算目的条带吸光度,以相应蛋白条带的吸光度值与GAPDH蛋白内参条带吸光度值的比值表示相对蛋白含量.结果 7.5、10、20、30、50 mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞后8h,ERK1/2、JNK磷酸化水平明显上调（P＜0.05）,20、30、50 mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞后p38磷酸化水平上调显著（P＜0.05）,且都在50 mJ/cm2照射后效应最为显著（P＜0.05）.50 mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞后8h,ERK1/2磷酸化产物水平出现上调,在处理后的12h,与对照组（10.277±0.320）比较,差异有统计学意义（44.844±2.023,P＜ 0.05）,而p38和JNK磷酸化产物水平在照射后2h即开始上调（P＜0.05）,4、8、12h,p38和JNK与对照相比,UVB照射后虽存在着显著地磷酸化水平差异（P＜0.05）,但随时间推移JNK磷酸化产物水平这种上调的趋势逐渐弱化（P＜0.05）.结论 在50 mJ/cm2中波紫外线照射后的HaCaT细胞中,ERK1/2、p38、JNK这3种MAPK信号通路产生了活化效应,具有一定的时间效应差异.
- 徐倩倩陈旭李莉徐松丁兰张云鞠梅李新宇施辛
- 关键词：紫外线角蛋白细胞信号传导
- 紫外线诱导角质形成细胞炎症反应信号传导机制研究进展被引量：3
- 2016年
- 紫外线（UV）是一种可以导致皮炎、光老化和癌变的重要的环境因子，UV诱导表皮角质形成细胞炎症因子的生成是上述疾病发生的重要分子事件。UV诱导角质形成细胞炎症涉及多种受体、细胞内信号传导相关调控分子和核转录因子的参与，主要包括表皮生长因子受体、芳香烃受体、过氧化物酶体增生物激活受体、蛋白激酶C家族、蛋白激酶B、丝裂原活化蛋白激酶家族、核转录因子κB和转录因子激活蛋白等，构成了复杂的炎症信号传导网络。
- 李莉陈旭顾恒
- 关键词：紫外线角蛋白细胞炎症信号传导蛋白激酶类
- 依维莫司与顺铂协同损伤人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞机制的初步研究
- 2017年
- 目的探讨依维莫司与顺铂联合损伤人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞的分子机制。方法 依维莫司处理细胞后的信号通路实验分为对照组、50、100、200 nmol/L依维莫司处理组4组。依维莫司与顺铂联合处理的机制实验分为对照组、50 nmol/L依维莫司、25 μmol/L顺铂、50 nmol/L依维莫司 ＋ 25 μmol/L顺铂处理细胞组4组。通过Western印迹进行mTOR、Akt、DNA损伤相关信号以及Chk通路分析。结果 50、100、200 nmol/L依维莫司处理COLO-16细胞12、24 h后，mTOR 2448位点和2481位点的磷酸化水平降低，Rictor 1135位点磷酸化水平也降低。然而，下游信号ULK1蛋白的ser757位点的磷酸化水平、P70 S6激酶的thr389位点的磷酸化水平以及PKCα的thr638/641位点磷酸化水平的变化并不显著。依维莫司处理对Akt的总蛋白水平和磷酸化水平无明显影响。顺铂处理COLO-16细胞12、24 h后，Rictor的thr1135位点磷酸化水平和Chk1的ser345位点磷酸化水平明显升高，但依维莫司单独处理无类似效应。当依维莫司与顺铂联合处理后12和24 h，相对于顺铂单独处理的细胞，上调的Chk1和Rictor磷酸化水平受到明显抑制。结论 COLO-16细胞mTOR信号对依维莫司处理敏感，但其下游信号并非同步产生级联反应。依维莫司可能通过抑制检测点激酶1的激活增强顺铂诱导COLO-16细胞死亡，但无加重顺铂所导致的DNA损伤。
- 丁敏徐松李莉毕素云周之海李岷陈旭顾恒
- 关键词：依维莫司
- 依维莫司对顺铂产生抗人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞效应的增效作用研究被引量：1
- 2017年
- 目的探讨依维莫司是否增加顺铂对人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞的杀伤效应。方法分别用50、100、200nmol／L的依维莫司和25μmol／L顺铂处理人皮肤鳞状细胞癌系COLO-16细胞12、24h，用AO标记自噬体囊泡并结合溶酶体酶抑制剂分析自噬和自噬流水平。Western印迹分析自噬标记性分子LC3．Ⅰ→LC3-Ⅱ转化、Caspase3和PARP剪切；LDH释放实验分析细胞死亡；AnnexinV．EGFP染色分析细胞凋亡。结果50、100、200nmol／L的依维莫司处理COLO．16细胞后，12hLC3．Ⅰ→Lc3-Ⅱ转换值分别为3．52±0．21、4．03±0．39、5．05±0．22，两两之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05），与未用药物处理的对照组（2．07±0．05）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。24hLC3-Ⅰ→LC3-Ⅱ转换值分别为3．38±0．26、3．29±0．06、6．57±0．16，两两之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05），与对照组（2．61％±0．16％）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。50、100、200nmol／L的依维莫司联合E64d、pepstatin处理COLO-16细胞12h后，LC3-Ⅱ与B肌动蛋白的比值分别为1．26±0．40、1．16±0．34、1．21±0．39，与E64d、pepstatin单独处理细胞组（1．19±0．27）比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。100nmol／L依维莫司联合E64d、pepstatin自噬体囊泡表达阳性率2．06-4-0．61，与E64d、pepstatin单独处理细胞组（1．68±0．62）比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。依维莫司与顺铂联合处理24h细胞死亡率42．58％±0．93％，高于顺铂单独处理的细胞（死亡率18．20％±1．46％），差异有统计学意义。依维莫司联合顺铂处理与顺铂单独处理细胞相比，Caspase3和PARP剪切、AnnexinV标记细胞数以及LC3-Ⅱ形成均无统计学差异（P〉0．05）。结论依维莫司增强顺铂诱导COLO-1细胞死亡，这种效应不依赖于凋亡和自噬调控。
- 丁敏徐松李莉毕素云周之海李岷杨海平陈旭顾恒
- 关键词：顺铂依维莫司
- 不同剂量长波紫外线照射对HaCaT细胞增殖活力和自噬体表达瞬时影响的研究被引量：2
- 2016年
- 目的:观察人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞接受不同剂量长波紫外线(UVA)照射后细胞增殖活力和自噬体表达水平的变化,并初步评估增殖活力损伤程度和自噬体表达水平之间的相关性。方法:将HaCaT细胞分为6组,分别为10 J/cm^2UVA对照组、10 J/cm^2 UVA照射组、25 J/cm^2 UVA对照组、25 J/cm^2 UVA照射组、50 J/cm^2 UVA对照组及50 J/cm^2 UVA照射组。照射结束后即刻进行噻唑蓝(MTT)实验或单丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色,全波长酶标仪下读取各孔A值,倒置荧光显微镜下随机选取视野,计数每视野下自噬体表达阴性细胞和阳性细胞数目。结果:经不同剂量UVA照射后,HaCaT细胞的增殖活力(A值)下降,呈剂量相关性。其中10、25及50 J/cm^2 UVA照射组(A值分别为1.179±0.007、0.791±0.015、0.522±0.046)两两之间以及与各自对照组(1.370±0.007、1.254±0.012、1.177±0.009)间差异均有统计学意义(P均<0.01);10、25及50 J/cm^2 UVA照射后,HaCa T细胞MDC染色结果示自噬体表达阳性的细胞比率增加,且呈剂量相关性。50 J/cm^2 UVA照射组自噬体表达阳性率较其对照组显著上升(χ~2=11,P<0.01)。结论:10~50 J/cm^2 UVA照射后,HaCaT细胞瞬时增殖活力降低及自噬体表达增加,且呈剂量依赖性。
- 苑春雨李莉陈崑陈旭鞠梅黄丹顾恒
- 关键词：角质形成细胞自噬体长波紫外线
- 番茄红素对人皮肤鳞状细胞癌COLO16细胞关键信号受体调控研究被引量：3
- 2018年
- 目的探讨番茄红素对人皮肤鳞状细胞癌细胞系COL016细胞关键信号受体调控的影响。方法COL016细胞分为0（对照组）、5、10、15、20、25μmol／L番茄红素6个处理组，处理24h后进行LDH实验确定对细胞活力的影响。根据LDH分泌量确定细胞死亡水平，选取番茄红素对细胞作用的安全浓度信号受体表达量实验，蛋白免疫印迹检测关键信号受体蛋白表达水平。使用SPSS软件进行单因素方差分析，采用Tukey Multiple Comparison和Brown-Forsythe（B）检验方法。结果5、10、15、20、25μmol／L番茄红素处理COL016细胞24h后，25μmol／L组细胞死亡率和对照组比差异有统计学意义（F=13．116，P〈0．05），选取5、10、20μmol／L三个浓度番茄红素处理COL016细胞24h后，表皮生长因子受体蛋白磷酸化水平降低（P〈0．05），糖皮质激素受体蛋白表达水平升高（P〈0．05），而维A酸受体、雄激素受体、孕激素受体蛋白表达水平变化不显著。5、10、20μmol／L番茄红素处理HaCaT、HEK细胞24h后，HaCaT细胞和人原代角质形成细胞中表皮生长因子受体蛋白磷酸化水平和糖皮质激素受体蛋白表达量差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论番茄红素可降低COL016细胞活力，抑制表皮生长因子受体蛋白活化，上调糖皮质激素受体表达，这种效应可能有肿瘤细胞特异性。
- 毕素云李莉徐松张孟丽顾恒周之海陈旭
- 关键词：细胞系肿瘤番茄红素
- 慢病毒介导shRNA沉默Nicastrin基因的人永生化角质形成细胞模型构建被引量：3
- 2017年
- 目的 构建Nicastrin（NCT）基因的RNA干扰慢病毒表达载体，并在人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）上鉴定其沉默效率，构建NCT基因稳定下调的人永生化角质形成细胞模型，为后续研究NCT基因下调对角质形成细胞的生物学行为影响奠定实验基础。方法 设计3个靶向NCT基因特异性短发卡RNA（shRNA）表达序列并连接到慢病毒表达质粒pGLV3/H1/GFP ＋ Puro中，成功构建慢病毒重组表达质粒，并通过测序鉴定。将构建的重组表达质粒与包装质粒共转染293T细胞，产生慢病毒颗粒，并测其滴度。将HaCaT细胞分为空白组（未感染病毒）、阴性对照组（NC组，感染空载病毒LV3-shNC）和干扰组（感染NCT-shRNA1、2、3慢病毒）。流式细胞仪检测慢病毒转染效率，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western印迹检测靶基因的沉默效率，筛选出沉默效果最佳的干扰序列。结果 测序表明，NCT-shRNA慢病毒重组表达质粒构建成功。重组表达质粒与包装质粒共转染293T细胞后产生的慢病毒颗粒滴度为109 TU/ml。慢病毒感染HaCaT细胞后，流式细胞仪检测，慢病毒转染效率大于95%。qRT-PCR结果，与NC组相比，干扰组NCT mRNA表达量明显下降，其中NCT-shRNA1组NCT基因沉默效果最佳，干扰效率达到75%。Western印迹结果，与NC组相比，shRNA1组NCT蛋白表达抑制率为71.7%。结论 成功筛选出高效NCT-shRNA干扰序列，构建NCT-shRNA慢病毒重组表达载体，并构建NCT基因稳定下调的人永生化角质形成细胞模型。
- 毛秋霞张婉璐何艳艳贾苇雪Yang Brooks李莉李黎明张晓峰徐浩翔陈旭王宝玺李诚让
- 关键词：化脓性汗腺炎慢病毒属角蛋白细胞
