张伟
- 作品数：92 被引量：136H指数：8
- 供职机构：中国农业科学院生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学化学工程更多>>
- 热稳定6-磷酸-β-葡萄糖苷酶TteBglB异源表达、分离纯化及酶学性质分析被引量：3
- 2014年
- 6-磷酸-β-葡萄糖苷酶（EC 3.2.1.86）催化6-磷酸-葡萄糖苷类化合物（如6-磷酸-纤维二糖、6-磷酸-纤维素寡糖）产生6-磷酸-葡萄糖而使纤维素完全分解,在微生物碳源利用过程中起重要作用。腾冲嗜热厌氧杆菌是一株嗜热厌氧微生物,提供了丰富的热稳定性蛋白基因资源。从该菌株中克隆编码6-磷酸-β-葡萄糖苷酶的基因Ttebgl B,并在E.coli BL21（DE3）进行了异源表达。结果表明,TteBglB催化反应的最适p H为6.0、最适温度为70℃,在pH 4-10或70℃时有着良好的稳定性;同时证实,TteBglB属于糖基水解酶家族1（GH1）成员,可不依赖Mn^2＋、Ni^2＋、Co^2＋或Fe^2＋等二价金属离子而发挥催化作用。以pNPβG6P为底物时,催化反应的Km为0.054 mmol/L,Kcat为81.47/min,Vmax为0.003992 mmol/min,酶比活为18.093 U/mg。
- 刘晴张宇微张宇宏徐欣欣张伟刘波顾青
- 关键词：糖苷水解酶
- 乳糖酶突变体库的构建及高活性突变体的快速筛选
- 2014年
- 构建了亮白曲霉来源的β-半乳糖苷酶活性中心的第219位丝氨酸的毕赤酵母饱和突变体库以筛选水解活性提高的乳糖酶。另外，通过以毕赤酵母发酵基础盐诱导培养基代替传统的BMMY培养基来诱导表达β-半乳糖苷酶和其突变体。结果表明，诱导时间在48～60h且粗酶液中总蛋白量在0．2～0．8mg／mL时，各乳糖酶的活力均高于其在BMMY培养基中的活力；各乳糖酶的比活力在此阶段保持相对稳定，且与纯化后的酶比活力呈正相关，即各乳糖酶的比活力高低可以粗酶液中乳糖酶的比活力来相对定量。在此基础上，利用高通量的48孔培养板创建了一种简便、高通量从B一半乳糖苷酶突变体库中筛选高水解活力乳糖酶的方法，并应用该方法快速地从突变体库中筛选到3个水解活力显著提高的突变体S-38、S-35和S-1，比活力分别提高了10．3％，9．2％和6％，高通量的筛选方法是定向进化技术中的重要环节，为其顺利开展奠定了基础。
- 秦星孙宁张丰华张宇宏吴坤张伟刘波
- 关键词：Β-半乳糖苷酶高通量筛选比活力
- 根瘤农杆菌介导的特异腐质霉的遗传转化方法及其表达载体
- 本发明公开了根瘤农杆菌介导的特异腐质霉遗传转化方法及其表达载体，属于特异腐质霉的遗传转化领域。本发明特异腐质霉遗传转化方法，包括：(1)构建目的基因的表达质粒；(2)将表达质粒转化根瘤农杆菌感受态细胞，得到转入目的质粒的...
- 徐欣欣张伟刘波张宇宏李金阳
- 文献传递
- 乳糖酶的创制与产业化
- 乳糖酶具有水解和转糖苷的双重作用.通常利用其水解作用将乳制品中的乳糖水解为半乳糖和葡萄糖,从而生产出营养成分更易消化、吸收的低乳糖乳制品,治疗广大消费者因体内缺乏乳糖酶而引起的乳糖不耐受症.近几年利用其转糖苷作用生产功能...
- 张伟
- 聚半乳糖醛酸酶优化基因及其表达载体和应用
- 本发明公开了聚半乳糖醛酸酶优化基因及其表达载体和应用。本发明首先在不改变聚半乳糖醛酸酶氨基酸序列的前提下，综合考虑密码子偏好性，GC含量的变化，密码子适应指数(CAI)，不稳定序列的删除，mRNA二级结构等因素，对聚半乳...
- 张宇宏王姣姣张伟刘波徐欣欣
- 文献传递
- 来源于贝莱斯芽孢杆菌质粒的复制元件及其应用
- 本发明公开了来源于贝莱斯芽孢杆菌质粒的复制元件及其应用。本发明首先提供了从贝莱斯菌株内生性质粒中分离鉴定质粒的复制元件，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示。本发明进一步将从贝莱斯菌株内生性质粒中分离鉴定质粒的复制元...
- 刘波卢志军张伟徐欣欣张宇宏田辉
- 文献传递
- 一种具有高转糖苷活性的β-半乳糖苷酶组合突变体及其制备方法和应用
- 本发明属于基因工程和遗传工程领域，公开了一种具有高转糖苷活性的β-半乳糖苷酶组合突变体，其是在去除了自身信号肽的亮白曲霉和米曲霉的β-半乳糖苷酶的氨基酸序列的基础上，通过双位点的定点饱和突变所获得的，在低聚糖生成量保持不...
- 张伟张宇宏刘波孙宁张佳琳
- 文献传递
- 牛凝乳酶原基因在食品级乳酸乳球菌中的重组表达被引量：2
- 2014年
- 将牛凝乳酶原基因连接pNZ8149载体,并转化乳酸乳球菌NZ3900,经乳酸链球菌素Nisin诱导,测得重组菌株胞内凝乳酶活力达到0.7 SU/mL,培养基中检测不到凝乳酶活力,实现了牛凝乳酶原基因在乳酸链球菌Nisin诱导基因表达系统(nisin controlled gene expression system,NICE)中活性表达。在此基础上,将分泌信号肽SPusp45连接于pNZ8149,构建了分泌型表达载体pNZ8149s,并实现牛凝乳酶原基因在NICE系统中分泌表达。当使用1 ng/mL Nisin诱导5 h后,重组菌株胞内检测不到凝乳酶活力,培养基中凝乳酶活力为1.2 SU/mL,说明pNZ8149s能够促使凝乳酶原从乳酸乳球菌中分泌。该方法为重组牛凝乳酶在食品级菌株中重组表达提供了一种可行的方案。
- 张艳丽聂春明周利伟张伟张宇宏杨晓红
- 关键词：凝乳酶乳酸乳球菌食品级
- 调控真菌木质纤维素降解酶系表达的元件及其应用
- 本发明公开了调控真菌木质纤维素降解酶系表达的元件及其应用。本发明首次发现转录因子HIKLF12在特异腐质霉木质纤维素降解酶系表达过程中具有重要的全局调控作用，<I>Hiklf12</I>基因的高表达能够明显提高特异腐质霉...
- 徐欣欣张伟刘波张宇宏范超
- 文献传递
- 果胶裂解酶优化基因及其表达载体和应用
- 本发明公开了果胶裂解酶优化基因及其表达载体和应用。本发明首先在不改变果胶裂解酶氨基酸序列的前提下，通过包括密码子使用频率和分布,密码子适应指数CAI，改变特定基因区域的GC含量等多种序列优化方式，得到3个果胶裂解酶优化基...
- 张宇宏张伟刘波徐欣欣秦星
- 文献传递
