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王硕

作品数：17 被引量：37H指数：4
供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金传染病预防控制国家重点实验室基金更多>>
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合作作者

文献类型

  • 17篇中文期刊文章

领域

  • 17篇医药卫生

主题

  • 8篇细胞
  • 7篇HIV-1
  • 7篇病毒
  • 5篇单克隆
  • 5篇克隆
  • 4篇中和活性
  • 4篇免疫
  • 4篇抗体
  • 4篇感染者
  • 4篇T细胞
  • 4篇HIV-1感...
  • 4篇HIV-1感...
  • 3篇人类免疫
  • 3篇人类免疫缺陷
  • 3篇人类免疫缺陷...
  • 3篇特异
  • 3篇特异性
  • 3篇缺陷病
  • 3篇淋巴
  • 3篇淋巴细胞

机构

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  • 1篇北京市疾病预...
  • 1篇广西壮族自治...
  • 1篇首都医科大学...
  • 1篇浙江大学医学...
  • 1篇泰安市妇幼保...
  • 1篇天津国际生物...

作者

  • 17篇王硕
  • 13篇李丹
  • 7篇梁华
  • 6篇任莉
  • 6篇郝彦玲
  • 5篇鞠斌
  • 4篇刘颖
  • 3篇魏民
  • 3篇洪坤学
  • 3篇王书晖
  • 3篇李亚锋
  • 3篇王铮
  • 2篇吴尊友
  • 1篇朱彪
  • 1篇唐振柱
  • 1篇沈智勇
  • 1篇福燕
  • 1篇张洪波
  • 1篇吕艳娜
  • 1篇李剑军

传媒

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  • 2篇中国艾滋病性...
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  • 1篇中华实验和临...
  • 1篇中华流行病学...
  • 1篇医学研究杂志

年份

  • 1篇2024
  • 1篇2023
  • 2篇2022
  • 1篇2021
  • 1篇2020
  • 3篇2018
  • 2篇2017
  • 3篇2016
  • 1篇2015
  • 2篇2010
共 17 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
一组靶向HIV膜蛋白的单克隆抗体的分离和功能鉴定
2021年
目的从中国人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type I, HIV-1)慢性感染者体内筛选针对膜蛋白的单克隆抗体并对其进行功能鉴定。方法采用单细胞特异性分选的方法从HIV-1感染者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中筛选抗原特异性单个B细胞,通过逆转录和巢式PCR获得抗体重链和轻链的可变区基因。利用免疫遗传学数据库(immunogenetics database, IMGT)分析抗体基因家系及突变率。抗体表达纯化后,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)鉴定其结合活性和识别表位,通过假病毒中和实验检测抗体中和能力。结果从1例慢性HIV-1感染者样本中筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性抗体。抗体重链可变区基因来自IGHV1-69*09、IGHV1-08*01、IGHV1-46*01、IGHV4-34*01、IGHV4-61*01和IGHV3-43*02家系,突变率为10.76%~21.05%。轻链可变区基因来自IGKV3-20*01、IGKV1-39*01、IGKV1-NL1*01、IGKV3-15*01和IGKV1-9*01家系,突变率为6.03%~18.64%。7个抗体均可以结合gp140,其中抗体508-B1、508-C1、508-C5、508-D4和508-E5主要识别gp41区;508-D6和508-F1结合gp120区。508-D4和508-F1分别可以中和Global Panel假病毒盘中的CNE8(Tier 2)和X2278(Tier 2),IC50值分别为38.1 μg/ml和41.7 μg/ml。结论本研究成功筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性的单克隆抗体,其中5个为识别gp41区的单克隆抗体,2个为gp120结合抗体。2个抗体具备有限的中和能力。该组抗体可为HIV-1检测试剂和抗体药物研发以及艾滋病疫苗免疫原设计提供技术储备。
胡园园亢佳星郝彦玲任莉王硕洪坤学邵一鸣王铮李丹
关键词：HIV-1中和活性表位单克隆抗体
中国HIV-1感染者中分离单克隆中和抗体的初步研究
2017年
目的从中国人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染者中分离单克隆中和抗体,并对其生物活性进行初步鉴定。方法采用抗原特异性单个B细胞分选和单克隆抗体表达技术从感染者中分离单克隆抗体,采用免疫遗传学数据库(immunogenetics database,IMGT)分析抗体的可变区基因,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体的结合能力,采用TZM-bl/假病毒中和实验检测抗体的中和能力。结果从一个HIV-1CRF07_BC病毒感染者中分离到了两个单克隆抗体(A1和A6);两个抗体的重链来源于不同家系(IGHV5-51*01和IGHV4-59*01),轻链分别利用lambda链和kappa链,可变区基因的突变率较低;两个抗体与CRF01_AE、B亚型和CRF07_BC病毒的结合能力较强,可以中和Tier 1的SF162病毒(B亚型)和MW965病毒(C亚型),不能中和12个Tier 2的病毒(Global Panel)。结论本研究成功分离到了两个具有交叉反应性的单克隆中和抗体,丰富了HIV-1中和抗体的研究,也为艾滋病的抗原检测和治疗等应用领域提供备选的免疫制剂。
鞠斌李丹任莉郝彦玲张蕾王硕魏民邵一鸣
关键词：中和活性
利用单个B细胞分选方法获得HIV-1单克隆抗体基因及功能鉴定被引量：2
2018年
目的从人类免疫缺陷病毒1型（human immunodeficiency virus-1，HIV-1）感染者中获得单克隆抗体基因及功能鉴定。方法单细胞流式分选得到抗原特异性单个B细胞，基因扩增和测序得到抗体可变区序列，BioEdit软件包中Sequence Identity Matrix程序分析基因序列一致性，免疫遗传学数据库分析抗体基因家系和突变率，酶联免疫吸附试验测定抗体结合能力，TZM-bl/假病毒试验检测抗体中和能力。结果从3个HIV-1感染者中分别获得了4个、7个和11个不同抗体的重链和轻链基因序列，其基因家系、CDR3长度和突变率广泛多样；验证了一个感染者的4个抗体基因序列，抗体A1和B3是HIV-1单克隆结合抗体，能同时与B亚型、CRF01_AE和CRF07_BC抗原蛋白结合；A1和B3也是HIV-1单克隆中和抗体，能够中和C亚型的MW965病毒，50%抑制浓度分别为0.04 μg/ml和37.34 μg/ml。结论本研究成功获得了大量的单克隆抗体基因，并对其中的部分序列进行了功能验证，为单克隆抗体的分离和鉴定等研究工作提供了基础。
鞠斌鞠斌郝彦玲李丹任莉梁华王硕侯佳利魏民
关键词：抗体基因中和活性
滤泡辅助性T细胞及其相关因子在HIV疾病进展中的变化研究被引量：5
2018年
目的通过对不同疾病进展阶段的HIV感染者外周血滤泡辅助性T细胞（follicular helper T cell, Tfh）进行分析，探讨Tfh及其相关因子对HIV感染疾病进程的影响，为进一步研究Tfh在HIV抗病毒治疗和疫苗研究提供科学依据。方法本研究招募HIV-1感染者33例，根据疾病进展情况分为HIV-1长期不进展者（long-term nonprogressors, LTNP）11例、快速进展者（rapid progressors, RP）10例、HIV典型进展者（typical progressors, TP）12例，同时招募11名健康人（normal control, NC）作为对照。分离受试者外周血单个核细胞，用多色流式的方法检测CD4＋CD45RA－CXCR5＋Tfh和CD4＋CD45RA－CXCR3－CXCR5＋PD-1＋Tfh及其表达ICOS、IFN-γ、IL-21因子的水平。此外，对血浆IL-10和CD19＋B细胞频数也进行分析，探讨Tfh与CD4、B细胞的关系。结果两个Tfh亚群比例在HIV-1感染人群均比正常对照高，CD4＋CD45RA－CXCR5＋Tfh在LTNP人群最高，与正常对照比较差异有统计学意义（P〈0.05）。Tfh相关因子ICOS、IFN-γ、IL-21在T细胞刺激剂作用下均有明显升高，ICOS＋Tfh与HIV-1疾病进展呈负相关，与CD19＋B细胞呈正相关（r＝－0.49，P〈0.01；r＝0.60，P〈0.05）。血浆IL-10的浓度在HIV-1感染者中有明显升高，TP组最高，其次为RP组（TP组vs NC组，P〈0.01；RP组vs NC组，P〈0.05）。结论外周血Tfh及其相关因子的表达在HIV-1感染者与健康对照者间差异有统计学意义，特定亚群Tfh与HIV-1疾病进展和B细胞功能密切相关。
李丹李剑军李亚锋王硕梁华唐振柱沈智勇邓月琴邵一鸣
关键词：HIV-1滤泡辅助性T细胞B细胞
CD137分子在 HIV 特异性 T 淋巴细胞单克隆分选和扩增中的应用
2015年
目的：建立通过CD137分子对HIV特异性T淋巴细胞进行单克隆分选和体外扩增的方案，对扩增后T细胞的数量和表型进行鉴定。方法分离HIV感染者外周血单个核细胞，采用多色流式细胞染色技术，分离HIV Gag特异性CD3＋CD8＋CD137＋T细胞，单个细胞分选入96孔板，在体外加入饲养细胞和细胞因子进行培养，克隆扩增后14 d对扩增的细胞进行表型鉴定，14 d和28 d分别计算扩增倍数。结果 CD137分子在未接受抗原刺激的状态下表达量很低， Gag肽库刺激后， CD137表达升高，并且表达CD137的CD8细胞均分泌IFN-γ。体外扩增14 d可以获得106的CD8 T细胞，28 d可获得107～108的 CD8 T细胞。在 Gag 肽库刺激后可达到接近100％的活化。结论CD137可替代IFN-γ等传统的细胞因子对HIV抗原特异性T细胞进行筛选和体外扩增，扩增后的T细胞仍保持非常好的活性状态。
李丹梁华鞠斌范瑾李亚锋王硕邵一鸣
关键词：CD137HIV体外扩增
中国恒河猴外周血淋巴细胞免疫表型及功能研究被引量：1
2023年
目的通过研究中国恒河猴外周血淋巴细胞免疫表型及其功能,为以恒河猴为模型的研究提供数据参考。方法通过优选抗体克隆和荧光配色,确定了主要淋巴细胞亚群检测和T细胞功能检测Panel,并用此方法分析15只健康中国恒河猴外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中T、B、NK等多种细胞亚群的比例,以及在非特异性刺激条件下T细胞分泌细胞因子的能力。结果成功建立了两套多色流式Panel,Panel 1可同时检测细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T-lymphocyte,CTL)、滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell,Tfh)、调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)、B细胞和NK细胞等多种淋巴细胞亚群,Panel 2可检测多种T细胞亚群功能和免疫检查点分子的表达。中国恒河猴PBMCs中主要淋巴细胞亚群比例的平均值分别为T细胞(75.32±7.73)%、B细胞(13.22±7.50)%、NK细胞(0.88±0.48)%、Tfh细胞(0.73±0.27)%、Treg细胞(0.75±0.43)%、CD16+NK细胞(47.87±22.35)%、CD56+NK细胞(10.69±12.41)%。非特异性刺激后,分泌IL-2和TNF-α的CD4+T细胞比例高于CD8+T细胞,分泌CD107a和IFN-γ的CD8+T细胞比例高于CD4+T细胞,而这两种细胞分泌IL-17A的比例均较低。结论本研究建立了可在单细胞水平同时检测多个细胞表面分子和分泌因子的多色流式检测方案,能够准确、全面地分析恒河猴PBMCs中免疫细胞亚群、免疫功能以及免疫检查点分子的表达,为利用恒河猴模型进行传染病疫苗及药物研发提供新的实验方法和基础数据。
李静王书晖王硕李丹刘颖
关键词：中国恒河猴淋巴细胞亚群T细胞功能
具有广谱中和活性的新型冠状病毒受体结合结构域抗体的筛选和鉴定
2024年
目的从2名新型冠状病毒感染康复者体内分离针对新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coro‐navirus 2,SARS-CoV-2)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的特异性单克隆B细胞,并筛选出具有广谱中和活性的SARS-CoV-2 RBD中和抗体。方法以生物素化的RBD为分子探针,利用流式细胞仪对康复者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)进行单克隆B细胞分选,将获得的B细胞经裂解并完成逆转录后,采用随机引物对抗体的重链及轻链进行巢式PCR扩增,扩增产物分别克隆至对应的表达载体,随后相应配对的重轻链质粒共转染293F细胞中进行表达,利用Protein A柱纯化获得单克隆抗体。采用原始株(WT)假病毒开展中和实验挑选出半数抑制浓度(IC_(50))<0.1µg/mL的抗体,进一步在原始株(WT)、Beta株(B.1.351)和Delta株(B.1.617.2)活病毒以及目前的流行株XBB、BA.5、BF.7假病毒中进行中和能力及宽度测试。结果从2名康复者体内共获得21个RBD特异性单克隆B细胞,从中分离出13对抗体轻/重链,成功表达出9个抗体,P1-A1、P1-B6、P1-B9对原始株(WT)假病毒IC_(50)值均低于0.1µg/mL,其中P1-B6可以有效中和原始株(WT)、Beta株(B.1.351)和Delta株(B.1.617.2)活病毒,IC_(50)值均达到了0.01µg/mL。P1-B9可以有效中和原始株(WT)、Beta株(B.1.351)、Delta株(B.1.617.2)及Gamma株(P.1)活病毒,IC_(50)值分别为0.42、0.63、0.28、2.50µg/mL。此外,P1-B6对BA.5、BF.7假病毒具有较好的中和效果,IC_(50)值分别为0.06µg/mL和0.09µg/mL。结论SARS-CoV-2原始株感染可以诱导出具有广谱中和活性的抗体,且这些广谱中和抗体的产生不需要过高的体细胞高频突变率,获得的抗体可以作为诊断和预防新冠病毒感染的候选。
倪婉琦任莉靳昌忠杨馥榕申玉敏王硕胡彩琴郝彦玲刘颖朱彪邵一鸣李丹王铮
关键词：新型冠状病毒中和抗体
MSM中HIV阳性者性行为特征及其影响因素的研究进展被引量：16
2010年
男男性行为人群(Men who have sex with men,MSM)艾滋病病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)阳性者的性行为和心理特征,与一般的MSM有显著差异,他们的不安全性行为仍然广泛存在,但更倾向于寻找阳性性伴,并选择被动肛交方式来"自我降低传播风险"。针对这一群体的特点,艾滋病防控重点,应该重在阻止二代传播,提高感染者生活质量。
王硕吴尊友
关键词：男男性行为人群不安全性行为HIV阳性者
新型冠状病毒疫苗免疫BALB/c小鼠后的T细胞表位鉴定被引量：1
2022年
目的鉴定携带新型冠状病毒S、N和M基因的疫苗在BALB/c小鼠上的T细胞表位。方法用携带新型冠状病毒S、N和M基因的DNA疫苗和痘病毒载体疫苗免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,末次免疫1个月内取小鼠脾细胞,用ELISPOT法检测其对新型冠状病毒特异性多肽的T细胞免疫反应,筛选出具有阳性反应的多肽片段,并对其表位进行预测分析。结果S、N、M基因分别鉴定出12、2、17条阳性多肽。S基因中多肽S49、S50、S100、S101、S102、S103阳性反应率为100%,且免疫刺激指数最高;覆盖M蛋白全长的41条多肽中有7条能刺激50%以上的小鼠产生阳性反应。预测分析结果显示,S、N、M基因分别有10、1、16个MHC-1 H-2限制性表位,主要位于S基因的RBD区、N基因RBD区以及M基因的跨膜区。这些表位在SARS-CoV-2及其变异株、SARS-CoV中高度保守。结论新型冠状病毒DNA疫苗和痘病毒载体疫苗诱导了针对多个基因、多个表位的特异性T细胞应答,未来通用型疫苗设计应包含能诱导细胞免疫的多个抗原,特别是包含保守表位的结构抗原。
李宾郝彦玲李丹王硕王书晖刘颖
关键词：T细胞表位
通过流式分选技术筛选HIV-1特异性单个B细胞被引量：3
2016年
目的探讨流式细胞分选技术在筛选HIV-1抗原特异性单个B细胞中的应用。方法通过HIV-1特异性探针结合多色流式细胞技术,标记HIV-1抗原特异性B细胞;并结合单细胞流式分选,从两例HIV-1慢性感染者体内分离抗原特异性单个B细胞。结果两个样本均有较强的中和活性,可以用作筛选中和抗体。两例感染者经流式分选后分别获得探针特异性目的细胞CD3-、CD8-、INDO-1 VIOLET-、CD14-、CD19+、CD20+、Ig M-、Ig G+、JRFLgp140+、JRFLgp140-D368R-各33和20个。结论通过流式分选技术结合HIV-1特异性探针可以获得单个HIV-1抗原特异性B细胞,为后续获得有广谱中和HIV-1能力的抗体,设计抗HIV-1药物和HIV-1疫苗免疫原提供技术支持。
李丹鞠斌王硕李亚锋梁华邵一鸣
关键词：HIV-1探针
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