张玉萍
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：山西省儿童医院更多>>
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- HJURP基因缺陷表达的人胚胎绒毛细胞模型的构建与鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的构建HJURP基因的RNA干扰慢病毒表达载体并在人胚胎绒毛细胞上鉴定其沉默效率,进而提供HJURP基因缺陷表达的原代胚胎绒毛细胞模型。方法针对目的基因HJURP的序列,按照RNA干扰序列的设计原则,设计合成3个HJURP基因特异性的小分子干扰RNAi靶点,将其合成短发夹RNA(sh RNA)并退火形成双链RNA,克隆至慢病毒载体中形成sh RNA表达载体,通过PCR和测序鉴定获取正确重组载体。将筛选出的重组载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞并测定病毒滴度。随后将其干扰人胚胎绒毛细胞,采用Western blotting和real-Time PCR检测靶基因的沉默效率。结果对重组载体p HBLVU6-Zs Green-Puro进行测序鉴定,证实插入的sh RNA序列无碱基变异。重组慢病毒载体经293T细胞包装后,病毒滴度为108PFU/ml。RNA干扰人胚胎绒毛细胞HJURP基因后,可见感染后内源HJURP的蛋白表达水平显著下降,HJURP m RNA水平明显下降,其中sh RNA1干扰效率大于70%。结论成功构建了HJURP基因的sh RNA慢病毒表达载体,该重组载体可以在细胞水平有效沉默靶基因,为后续研究HJURP基因表达抑制对人胚胎绒毛细胞的增殖凋亡和染色体分离的影响,探索HJURP基因在自然流产发生中的作用机制提供细胞模型。
- 薛慧琴高庭朱镭孙夏瑜卢洪涌张玉萍周岩燕美琴祁春茹
- 关键词：RNA干扰慢病毒
- HJURP基因表达下调对人胚胎绒毛细胞增殖凋亡作用的研究
- 2016年
- 目的研究HJURP基因的表达下调对人胚胎绒毛细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法用CCK8法、Annexin V-EGFP/PI双染法、TUNEL法、Trans Well迁移侵袭实验等方法研究HJURP表达下调对人胚胎绒毛细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 HUJRP基因表达下调后,与对照组比较,明显抑制胚胎绒毛细胞的增殖及迁移侵袭能力。胚胎绒毛细胞的凋亡率为9.87±1.92%增加至,明显高于NS组3.92±1.12%(P<0.01)。对细胞周期的影响表现为G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞从42.9±3.12%增加至62.4±1.92%。Trans Well侵袭实验结果显示,实验组穿过Trans Well膜的数目明显少于对照组。结论 HJURP基因的表达下调可以导致人胚胎绒毛细胞增殖抑制,诱导人胚胎绒毛细胞凋亡,使人胚胎绒毛细胞周期阻滞于G0/G1期,推测HJURP基因表达下调与人胚胎自然流产有相关性。
- 薛慧琴高庭朱镭孙夏瑜卢洪涌张玉萍周岩燕美琴祁春茹
- 关键词：凋亡
