朱宁
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 脆性X智力低下蛋白的克隆表达与纯化
- 2008年
- 目的探讨脆性X智力低下蛋白(FMRP)的克隆表达与纯化条件。方法用分子克隆的方法构建重组质粒pET22b(+)-FMR1,并将其转入原核表达菌株E.coliBL21(DE3)中诱导表达;用固化Ni2+吸收色谱纯化重组FMRP,Western-blot鉴定并将纯化得到的蛋白与已知的RNA片段进行结合反应。结果成功构建了重组表达质粒pET22b(+)-FMR1,在E.coliBL21(DE)中表达出相对分子质量约79 000的蛋白;该蛋白为FMRP,且可与特定RNA相互作用。结论在原核系统中表达得到了纯度和活性都较为理想的FMRP蛋白,为相关功能性研究奠定了基础。
- 刘剑邹柯朱宁沈岩
- 关键词：BL21(DE3)
- 利用人转录因子siRNA文库筛选凋亡相关siRNA被引量：1
- 2008年
- 目的利用人转录因子siRNA文库筛选凋亡相关siRNA,为发现新的凋亡相关基因奠定基础。方法人转录因子siRNA文库稳定转染Jurkat细胞后用rhTRAIL诱导,使用高通量siRNA文库筛选法筛选出具有抗凋亡特性的细胞群。检出细胞群中的siRNA表达片段,逐个验证其抗凋亡功能。结果筛选出了具有抗凋亡特性的细胞群。克隆并鉴定了部分具有抗凋亡作用的siRNA表达片段。结论利用人转录因子siRNA文库进行了有效地高通量筛选,筛选出了具有抗凋亡能力的siRNA表达片段。
- 李立华霍晓芳熊霞辉朱宁李乔妹沈岩陈梅红
- 关键词：凋亡
- 脆性X智力低下蛋白与NDK/Nm23-H2的相互作用被引量：4
- 2001年
- 目的筛选与脆性X智力低下蛋白(FMRP)相互作用的蛋白,为FMRP生理功能的阐释提供新线索。方法以5月龄人胚海马mRNA为模板制备cDNA,重组于DNA激活结构域载体pGAD10,构建酵母双杂交文库,从中筛选与FMRP相互作用的蛋白。应用酵母双杂交体系对FMRP的相互作用区域进行定位。结果(1)所构建的5月龄人胚海马cDNA酵母双杂交文库含1×106克隆,插入片段平均长度约1.5kb,有效克隆90%;(2)在该文库中筛选到一个与FMRP相互作用的阳性克隆。序列分析表明:该克隆为人的核苷酸二磷酸激酶亚基B(NDK/Nm23-H2)cDNA;(3)NDK/Nm23-H2与缺少外显子12、14-17的FMRP异构体,以及含FMRP外显子1-12的克隆相互作用,而与FMRP外显子1-6、外显子2-7不能直接结合。结论人Nm23-H2在酵母细胞内能与FMRP结合,其相互作用区域定位于FMRP的前1-11个外显子。Nm23-H2具反式调控因子特性,FMRP与Nm23-H2的相互作用提示FMRP参与基因表达调控。这一发现有助于进一步研究FMRP在细胞核内的生物学功能。
- 楼蓉梅品超贡金英朱宁寇朝辉吴冠芸沈岩
- 关键词：酵母双杂交体系脆性X智力低下蛋白脆性X综合征遗传性疾病
