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周杨: 作品数：15 被引量：36H指数：4; 供职机构：广东环凯微生物科技有限公司更多>>; 发文基金：广东省自然科学基金广东省重大科技专项广州市科技计划项目更多>>; 相关领域：轻工技术与工程医药卫生生物学理学更多>>

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检测大肠杆菌(Escherichia coli)O157:H7免疫磁珠的制备、保存与应用被引量：3: 2019年; 【背景】大肠杆菌(Escherichia coli) O157:H7是导致肠出血性大肠杆菌食源性疾病暴发的主要血清型,免疫磁珠(Immunomagnetic beads,IMBS)在E. coli O157的检测中发挥着重要作用,而免疫磁珠的稳定性、特异性、广谱性等性能指标关系着在实际应用中的使用效果。【目的】制备高效、稳定且具有广谱性的免疫磁珠,联合分子检测技术如环介导恒温扩增(Loop-mediatedisothermal amplification,LAMP)技术、PCR等,提高目标菌的检出率。【方法】采用新型的磁珠活化剂MIX&GO制备E. coli O157免疫磁珠,并进行广谱性以及特异性检测;针对6种试剂牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)、酪蛋白(Casein)、海藻糖(Trehalose)、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinyl pyrrolidone,PVP)、抗坏血酸(VitaminC)和防腐剂ProClin300,利用正交试验L18(3~7)优化免疫磁珠保存液组分;采用IMBS-LAMP、IMBS-PCR、IMBS-生化、菌液-LAMP、菌液-PCR、显色平板-生化鉴定6种方式对20份生猪肉样品进行检测。【结果】利用MIX&GO活化剂制备的免疫磁珠捕获率最高达到81.5%±1.3%;免疫磁珠保存液最优配方为:牛血清白蛋白15.0 g/L,酪蛋白10.0 g/L,海藻糖10.0 g/L,PVP 2.0 g/L,抗坏血酸5.0 g/L,Pro Clin 300 2.5 g/L,保存6个月后免疫磁珠捕获率为75.5%;在20份生猪肉样品的检测中,自制磁珠和商品化磁珠与LAMP联用均检出9例阳性样品;IMBS-LAMP在6种检测方式中具有最高的检测灵敏度,但检出的样品会因磁珠抗体的差异而有所不同。【结论】与商品化磁珠相比,实验制备的免疫磁珠具有良好的特异性和广谱性,免疫磁珠-LAMP联用提高了目标菌的检出率,是一种高灵敏度、具有应用前景的检测方法。; 曲晓莹吴清平熊争蔡芷荷卢勉飞卢勉飞周杨; 关键词：大肠杆菌O157:H7 免疫磁珠

基于LAMP技术的大肠杆菌O157∶H7快速检测试剂盒的评价: 目的：评价基于环介导的恒温扩增技术(LAMP)的大肠杆菌O157∶H7(Escherichia coli O157∶H7)快速检测试剂盒的实效性. 方法：测定该快速检测试剂盒的特异性,灵敏度,重复性,保质期以及...; 周杨万强蔡芷荷卢勉飞吴清平李健顺; 关键词：食品检测大肠杆菌环介导等温扩增快速检测试剂盒

溶藻弧菌干粉化LAMP快速检测试剂盒: 本发明公开了溶藻弧菌干粉化LAMP快速检测试剂盒，该试剂盒由干粉化检测试剂、复溶液、阳性对照干粉、阴性对照干粉、封闭液、显色液和裂解液组成，以上7种试剂分别置于容器中。应用于本试剂盒中的引物对应溶藻弧菌特异性基因序列的8...; 蔡芷荷周杨万强卢勉飞曲晓莹吴清平何天文; 文献传递

可视化和实时荧光环介导恒温扩增技术快速检测原料乳中的沙门氏菌被引量：3: 2020年; 【背景】原料乳质量控制是乳制品生产流程中的关键环节,沙门氏菌是污染原料乳的主要致病菌之一。随着生物检测技术的不断发展,建立用于快速检测原料乳中沙门氏菌的实用型方法具有重要意义。【目的】评价可视化环介导恒温扩增技术(visual loop-mediated isothermal amplification,V-LAMP)和实时荧光环介导恒温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)方法快速检测原料乳中沙门氏菌的实效性。【方法】建立沙门氏菌LAMP反应体系和反应条件,对比V-LAMP和RF-LAMP两种方法的特异性、灵敏度、稳定性及其应用于实际样品检测的效用。【结果】采用V-LAMP和RF-LAMP方法检测沙门氏菌标准菌株,其结果均为阳性,检测非沙门氏菌标准菌株其结果均为阴性;该两种方法的检出限为13 CFU/mL,检测重复率均为100%;经检测10份人工污染样品,该两种方法的检测结果与实际结果高度一致;经检测73份实际样品,相对于标准方法,该两种方法其相对特异性分别为94.12%和92.65%,相对敏感度分别为100%和100%,相对准确率分别为94.52%和93.15%,一致性χ^2值分别为2.25和3.20,与标准方法无明显差异(P>0.05)。【结论】V-LAMP和RF-LAMP方法检测特异性好、灵敏度高、稳定性好,适用于原料乳中沙门氏菌的快速检测。; 周杨万强蔡芷荷卢勉飞杨绪伟吴清平曲晓莹; 关键词：可视化实时荧光原料乳沙门氏菌

食品中克罗诺杆菌属双重PCR检测试剂盒的评价被引量：5: 2019年; 【背景】在食品安全领域,克罗诺杆菌属于需要重点监测的致病菌,当前随着分子检测相关技术的不断发展,研制有关食品中克罗诺杆菌简便、高效的检测产品至关重要。【目的】研制克罗诺杆菌检测的双重PCR检测试剂盒并评价其用于食品中克罗诺杆菌检测的实效性。【方法】优化双重PCR反应体系,反应试剂采用冻干工艺,确立了试剂盒组成,并评价其特异性、灵敏度、重复性、保质期等性能指标。【结果】克罗诺杆菌标准菌株和分离菌株均在目标位置出现两条明显条带,非克罗诺杆菌标准菌株和分离菌株均检测为阴性,纯基因组DNA检测灵敏度为2.3×10-1 ng/μL,纯培养菌检验限为3.2×104CFU/mL;对65份食品样品进行克罗诺杆菌检测,该试剂盒检测结果与标准方法检测结果一致性较高;批内、批间检测重复率均为100%,可在42°C环境放置120 h且其检测效力不受影响,4°C保质期可长达12个月。【结论】该试剂盒性能好,检测结果稳定、可靠,适用于食品中克罗诺杆菌的快速检测。; 周杨万强蔡芷荷卢勉飞吴清平李健顺; 关键词：性能评价

基于环介导恒温扩增技术的大肠杆菌O157:H7快速检测试剂盒的评价被引量：10: 2017年; 【目的】评价基于环介导恒温扩增技术(LAMP)的大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)快速检测试剂盒的实效性。【方法】测定快速检测试剂盒的特异性、灵敏度、重复性、保质期以及运输稳定性,并与传统方法对比检测实际样品。【结果】大肠杆菌O157:H7标准菌株样品均检测为阳性,非大肠杆菌O157:H7标准菌株样品均检测为阴性,未发现有交叉反应;试剂盒最低检验限为29 CFU;该试剂盒的特异性、灵敏度及准确度与传统方法相比具有较高的一致性;试剂盒对高菌量目标菌和阴性菌样品的检测重复率均为100%,对低菌量目标菌样品的批间检测重复率为94%。试剂盒可在4°C保存9个月以上,并且可进行变温储存72 h以上。【结论】该试剂盒特异性好,灵敏度高,重复性好,储存方便,检测结果稳定、可靠,适用于对食品中大肠杆菌O157:H7的检测需求。; 周杨万强蔡芷荷卢勉飞吴清平李健顺; 关键词：大肠杆菌O157 H7 环介导等温扩增技术快速检测试剂盒

粪链球菌干粉化LAMP快速检测试剂盒及其使用方法: 本发明公开了粪链球菌干粉化LAMP快速检测试剂盒及基于其的快速检测方法。试剂盒包括冻干等温扩增剂，复溶液、阳性对照干粉、阴性对照、显色液、裂解液和封闭液，冻干等温扩增剂中含有dNTPs、<I>Bst</I> DNA聚合酶...; 万强周杨吴清平卢勉飞曲晓莹杨宁蔡芷荷; 文献传递

3种致泻大肠埃希氏菌多重PCR检测试剂盒的研制与效用评价被引量：4: 2020年; 本研究为了研制一种多重PCR检测试剂盒,用于对肠道致病性大肠埃希氏菌(Enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)、产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shigatoxin-producing E. coli,STEC)和肠道出血性大肠埃希氏菌(Enterohemorrhagic E. coli,EHEC)3种DEC(Diarrheagenic E. coli,DEC)的快速检测。优化所涉及的多重PCR检测体系和构建相应的检测试剂盒,其中的主要检测试剂采用冻干工艺,评价该试剂盒的检测特异性、灵敏度、重复性以及保质期。结果表明,本研究成功建立了针对于3种DEC的检测体系EP和检测体系ST;3种DEC标准菌株和分离菌株均出现明显的目标基因条带,而其他种类DEC标准菌株和分离菌株均未出现目标基因条带;该试剂盒检测管EP和检测管ST的检出限分别可达到1.5×10^3 cfu/mL和2.1×10^3cfu/mL,且二者检测重复率均为100%;该试剂盒可在4℃条件下保存12个月,也可在42℃环境运输120h,期间其检测效力不受影响。本研究研制的试剂盒性能好,检测结果稳定、可靠,适用于食品中3种DEC的快速检测。; 周杨万强蔡芷荷卢勉飞杨绪伟吴清平李健顺; 关键词：实效性评价

环介导等温扩增技术在食品中痢疾志贺氏菌快速检测被引量：8: 2017年; 【目的】探讨、优化基于环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测常规食品中感染性痢疾志贺氏菌的方法。【方法】在NCBI数据库中搜索获取志贺氏菌的特异性基因高度保守区,设计3对LAMP反应引物,建立、优化该LAMP可视化检测方法,并评价其特异性、灵敏度,同时与PCR检测方法和传统检测方法对比,进行结果统计分析。【结果】5株志贺氏菌标准菌株样品均检测为阳性,11株非志贺氏菌标准菌株样品均检测为阴性,无交叉反应。最低检验限为1.6×101 CFU/反应(或1.6×101 CFU/m L),且经比较,LAMP检测灵敏度比PCR检测高出1个数量级。通过对161份实际样品和人工污染样品进行检测,LAMP检测与传统方法检测结果具有较高的一致性。【结论】LAMP具有检测过程快速简便、检测结果稳定、可靠的特点,适用于对常规食品中感染性痢疾志贺氏菌的高效、快速检测需求。; 周杨万强蔡芷荷卢勉飞吴清平李健顺; 关键词：环介导等温扩增技术志贺氏菌

包装饮用水中铜绿假单胞菌快速检测试剂盒的研制与评价被引量：5: 2020年; 【背景】在包装饮用水企业生产活动中,铜绿假单胞菌是被重点监测的致病菌之一。随着分子检测相关技术的不断发展,研制用于包装饮用水中铜绿假单胞菌简便、高效的快速检测产品至关重要。【目的】评价基于环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术的铜绿假单胞菌快速检测试剂盒在包装饮用水铜绿假单胞菌检测中的实效性。【方法】优化该LAMP反应体系,反应试剂采用冻干工艺,确定试剂盒组成,并评价其特异性、灵敏度、重复性、保质期等性能指标。【结果】铜绿假单胞菌标准菌株和分离菌株均检测为阳性,非铜绿假单胞菌标准菌株和分离菌株均检测为阴性,未发现有交叉反应;试剂盒最低检验限为18 CFU/mL;该试剂盒的特异性、灵敏度及准确度与传统方法相比具有较高的一致性;批内、批间检测重复率均为100%,可在4℃保存12个月以上,并且可在42℃环境中储存72 h以上。【结论】该试剂盒性能好,检测结果稳定、可靠,适用于包装饮用水中铜绿假单胞菌的快速检测。; 周杨万强蔡芷荷卢勉飞曲晓莹吴清平李健顺; 关键词：铜绿假单胞菌快速检测试剂盒性能评价

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