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副鸡禽杆菌LAMP检测方法的建立被引量：2: 2018年; 应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了快速特异的检测副鸡禽杆菌的方法。利用在线引物设计软件Primer Explorer Version 4.0,针对副鸡禽杆菌16SRNA基因序列设计两组LAMP引物,并对副鸡禽杆菌特异性DNA的扩增条件进行优化,评价所建立LAMP的特异性和灵敏性。结果显示,优化后的反应条件为65℃恒温反应60min,内引物1.60pmol/μL、外引物0.20pmol/μL。该LAMP对13株副鸡禽杆菌均发生了扩增反应,而对大肠埃希菌、禽多杀性巴氏杆菌、空肠弯曲杆菌等14株其他病原微生物没有扩增反应;该LAMP最低检出量为0.17pg/反应,敏感性远高于常规PCR的56pg/反应。结果表明,所建立的副鸡禽杆菌LAMP具有快速、高效、方便操作等特点,适用于基层兽医部门进行副鸡禽杆菌的快速检测。; 梅晨李淑芳徐玉智张培君龚玉梅王宏俊; 关键词：副鸡禽杆菌 RRNA 环介导等温扩增

中药复方对H9N2亚型禽流感病毒在MDCK细胞增殖的作用被引量：5: 2021年; 为了筛选对H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)有独特防治效果的中药复方,本试验基于禽流感发病临床症状、结合中药复方用药基本原则,组方芩根提取液(Qingen extract,QG),以奥司他韦(达菲,DF)为阳性对照药,通过研究药液对神经氨酸酶(neuraminidase,NA)的抑制作用,采用CCK-8法测定药液对犬肾上皮细胞(MDCK)毒性作用,并从病毒吸附、增殖和灭活3个方面做了药效评价。结果表明,QG对NA的抑制作用在一定浓度范围内呈浓度依赖性增高,半数抑制浓度(IC 50)约为1130μg/mL;QG和DF的最大安全浓度分别为2500和500μg/mL,H9N2 AIV的TCID 50为10-4.36/100μL;QG浓度为156.25~2500μg/mL范围内,对H9N2 AIV的病毒毒力有一定抑制作用,并在MDCK细胞上呈现出一定的抗吸附、抑制病毒复制作用。表明QG在对抗H9N2 AIV的NA活性、抑制H9N2 AIV吸附靶细胞和在细胞内复制有一定的作用。; 程邓芳梅晨刘娟王宏俊先宏; 关键词：禽流感病毒 H9N2亚型中药复方 MDCK细胞

表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌的构建及其免疫原性研究被引量：1: 2018年; 为构建表达副鸡禽杆菌外膜蛋白的重组乳酸乳球菌,本试验按照乳酸乳球菌表达的偏好性,优化合成副鸡禽杆菌外膜蛋白p9的编码碱基序列,将其接入表达载体pNZ8149的多克隆位点并导入食品级乳酸乳球菌NZ3900。将重组乳酸乳球菌灭活后经肌肉注射免疫SPF鸡,免疫后攻毒测定乳酸乳球菌的保护效果,检测血清中IgG抗体和鼻黏膜sIgA抗体水平并检验免疫效果。PCR结果显示,成功构建了含p9片段的重组乳酸乳球菌,Western-blot检测显示,p9片段可在重组乳酸乳球菌内表达。重组菌最佳诱导表达条件：Nisin浓度为20 ng/mL、诱导时间为4 h。鸡肌肉注射免疫后可产生p9蛋白特异性的血清Ig G和鼻黏膜sIgA抗体。乳酸乳球菌重组疫苗免疫鸡对副鸡禽杆菌攻毒的保护率为60%-80%。结果表明,本研究成功构建了重组乳酸乳球菌pNZ8149-p9/NZ3900,该重组菌作为免疫原免疫鸡,对副鸡禽杆菌攻毒具有较好的免疫保护作用。; 梅晨李淑芳孙爱华龚玉梅王宏俊; 关键词：副鸡禽杆菌 IGG SIGA

副鸡禽杆菌外膜囊泡的生物学活性分析被引量：1: 2020年; 为研究副鸡禽杆菌(Apg)外膜囊泡(OMVs)的生物活性,提取了A型副鸡禽杆菌的外膜囊泡。纯化后的OMVs用透射电镜观察其形态结构;将OMVs加入到鸡巨噬细胞(HD-11)培养液中,检测一氧化氮(NO)产生量的变化;用荧光定量PCR(qPCR)检测HD-11各炎症相关因子的表达量变化情况;将OMVs经肌肉注射接种SPF鸡,检测鸡血清IgG抗体产生情况,并用3种血清型的副鸡禽杆菌强毒菌株攻击免疫鸡,测定其免疫保护率。结果显示,电镜下的副鸡禽杆菌OMVs呈球形,直径在20~300 nm;OMVs可极显著提高HD-11中NO产量;qPCR结果显示,OMVs作用可显著上调鸡巨噬细胞IL-2、IL-6、 IL-1β、IL-10、iNOs等炎症相关因子的表达。免疫鸡可以产生特异性的IgG抗体。用A型副鸡禽杆菌攻毒,免疫保护率为70%,对异种血清型交叉保护性较弱,仅有10%~30%。本研究为深入研究副鸡禽杆菌外膜囊泡的功能奠定了基础。; 梅晨孙爱华李淑芳龚玉梅王宏俊; 关键词：副鸡禽杆菌活性分析

基于重组外膜蛋白研制检测副鸡禽杆菌抗体金标试纸被引量：2: 2021年; 为研制一种采用胶体金间接法检测副鸡禽杆菌抗体的试纸条,本试验设计试纸条胶体金标记的蛋白为兔抗鸡IgG蛋白,检测线(T)为副鸡禽杆菌外膜蛋白P9,质控线(C)为羊抗兔IgG蛋白。检测试纸条的特异性、灵敏度及稳定性,并与间接ELISA法检测结果比较2种方法符合率。结果显示,当副鸡禽杆菌标准阳性血清稀释1000倍时,用该试纸条仍可检测出阳性结果,表明该检测试纸条敏感性良好;试纸条检测鸡新城疫病毒阳性血清、禽流感病毒阳性血清、鸡支原体阳性血清、鸡大肠埃希菌阳性血清等均为阴性,无交叉反应,说明试纸条具有很好的特异性;试纸条在4℃冰箱存放28 d,仍可成功检测出副鸡禽杆菌阳性血清,灵敏度下降不明显,说明该试纸条具有很好的稳定性。用此试纸条检测200份鸡传染性鼻炎疫苗免疫后的血清样品,阳性符合率为98%。此外,针对已知阴性、阳性血清样品,采用该试纸条与采用ELISA法检测,2种试验方法的检测总符合率高达99.5%。综上所述,此试纸条特异性、灵敏性及稳定性均很好,是一种理想的检测副鸡禽杆菌抗体的方法。; 梅晨胡伟张雪王宏俊; 关键词：副鸡禽杆菌外膜蛋白特异性灵敏度稳定性

副鸡禽杆菌lpxM蛋白的原核表达及免疫原性研究: 2024年; [目的]探究副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum)外膜蛋白lpxM的免疫原性,为预防鸡传染性鼻炎提供理论参考。[方法]构建pET-28a-lpxM原核表达载体,经PCR扩增和双酶切鉴定后将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,并对诱导时间和诱导浓度进行优化,用尿素缓冲液纯化重组蛋白lpxM并进行SDS-PAGE分析。利用Western blotting鉴定重组蛋白的特异性。将重组蛋白与MONTANIDEISA 71 VG佐剂制备成疫苗v-lpxM,通过动物试验观察重组蛋白的免疫效果。[结果]重组质粒pET-28a-lpxM转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后成功表达,在37 ku处有目的蛋白特异性条带,在37℃、700 mmol/L IPTG、诱导4 h时蛋白表达量最高;重组蛋白lpxM在上清和沉淀中均有表达,且在沉淀中表达量相对较高;Western blotting结果显示,C型副鸡禽杆菌Modesto株的阳性鸡血清与纯化后的重组蛋白可发生免疫反应。免疫保护试验结果显示,v-lpxM疫苗对A、B和C型副鸡禽杆菌的保护率分别为0、20%和60%。[结论]本研究成功构建了原核表达载体pET-28a-lpxM,实现了lpxM重组蛋白的高效表达,且表现出良好的免疫原性。研究结果为探究副鸡禽杆菌外膜蛋白lpxM的免疫学特性以及为鸡传染性鼻炎的预防和疫苗的研发奠定了基础。; 梁之瑄梅晨张雪徐浩钧支岩李焕荣李焕荣; 关键词：副鸡禽杆菌原核表达免疫原性

1例副鸡禽杆菌和鼻气管鸟杆菌混合感染的诊断被引量：4: 2020年; 2019年3月,北京某鸡场产蛋鸡群中出现大量面部、眼睑严重肿胀等急性病例,为探明其发病原因,本试验进行了病原菌分离鉴定、分离株16S rRNA测序、药敏试验、动物回归试验。结果显示,从病鸡体内分离到副鸡禽杆菌和鼻气管鸟杆菌2种致病菌。血凝和血凝抑制试验结果表明,分离到的副鸡禽杆菌为A型;免疫琼扩试验结果显示,鼻气管鸟杆菌为A型。药敏试验显示,2株分离菌对氨苄西林、强力霉素等敏感,对链霉素及卡那霉素均不敏感。动物回归试验中,试验鸡单独感染副鸡禽杆菌分离株就会出现眼睑肿、浆液性鼻液、结膜炎等典型症状,单独感染鼻气管鸟杆菌的鸡也会发生流鼻液、呼吸紊乱等症状;混合感染的鸡发病症状比单独感染的鸡更为严重,病程加长。从人工感染发病鸡分泌物中可以成功分离出上述2种病原菌。本研究在国内首次发现副鸡禽杆菌和鼻气管鸟杆菌共感染的病例,为预防、控制和诊断鸡肿头综合征提供新思路。; 梅晨王琪琎先宏张雪胡伟王宏俊; 关键词：副鸡禽杆菌鼻气管鸟杆菌

副鸡禽杆菌外膜蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：2: 2019年; 副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)是鸡传染性鼻炎的致病菌,可以引起急性呼吸道病,可导致蛋鸡产蛋率下降、从而造成严重的经济损失。副鸡禽杆菌引起的症状与鸡毒支原体等病原引起的其他上呼吸道传染病非常相似,本试验利用副鸡禽杆菌外膜蛋白,建立间接 ELISA 抗体检测方法,用于血清抗体的检测。通过分析副鸡禽杆菌外膜蛋白HMTp210中较为保守的P9片段,将其进行原核表达并纯化,纯化的P9蛋白免疫鸡制备了抗血清。结果显示,P9蛋白分子量62Ku,纯度80%以上。以纯化的蛋白P9作为包被抗原,采用棋盘滴定法确定了抗原最佳包被浓度为1μg/Ml、血清样品最佳稀释度为1∶100,作用时间为 60min;酶标二抗的最佳稀释浓度为1∶10000,最佳作用时间为 30min;底物显色时间为15 min;阴、阳性的判定值为0.3。按上述条件建立的间接ELISA方法可以检测出P9蛋白免疫后的鸡血清及三种血清型副鸡禽杆菌的阳性鸡血清,与其他禽病病原体抗血清无交叉反应,本研究为检测副鸡禽杆菌血清抗体提供了一种新的方法。; 梅晨李淑芳黄明明孙爱华龚玉梅王宏俊; 关键词：副鸡禽杆菌抗原蛋白 ELISA

2012-2017年我国鸡传染性鼻炎流行态势分析被引量：17: 2018年; 2012-2017年,北京、山东、安徽、贵州、河北和广西等省市区送检鸡传染性鼻炎疑似病料125份,共分离到副鸡禽杆菌45株,其中A型15株,B型30株。表明近六年来我国的鸡传染性鼻炎以B型为主。; 龚玉梅张淑琼李淑芳梅晨侯婷王宏俊张培君; 关键词：鸡传染性鼻炎

1例犬乳腺癌的病理组织学诊断: 2021年; 为了鉴定1例犬乳腺肿物性质及病理变化,本试验利用苏木素-伊红(H.E.)染色及免疫组化等方法对1例犬乳腺肿瘤进行病理组织学检查,分析肿瘤组织细胞的病理变化。通过细胞分离培养,确定肿瘤细胞的生长特性;并用免疫荧光法检测肿瘤细胞标记物,判断该病例的预后情况。H.E.染色结果显示,该病例乳腺细胞和乳腺导管发生癌变。免疫组化结果显示,肿瘤相关蛋白P63、CK5/6及α-SMA表达阳性,雌激素(ER)、孕激素(PR)、人表皮生长因子-2(HER-2)的蛋白表达均为阴性,表明该病例为三阴性犬乳腺癌。纯化的癌细胞呈上皮细胞特征,细胞倍增时间为26.35 h。该细胞的免疫荧光检测结果显示,SOX-2及Ki-67高表达,进一步佐证其为乳腺癌,并且预后不良。免疫组化试验结果与组织病理学判定结果一致,表明此犬乳腺肿物为三阴性乳腺癌。; 梅晨金华辛良张雪胡伟先宏先宏; 关键词：免疫组化

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