陈潇
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：青岛大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肌细胞增强因子2D通过负向调控有丝分裂诱导基因6的表达促进肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721的增殖和迁移被引量：1
- 2017年
- 目的观察肌细胞增强因子2D(myocyte enhancer factor 2D,MEF2D)对肝癌细胞PLC/PRF5和SMMC7721增殖和迁移的影响,并探究其是否通过负调控有丝分裂诱导基因6(mitogen-induced gene 6,MIG6)的表达发挥作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术分别检测肝癌细胞中MEF2D和MIG6转录水平的表达,以MEF2D mRNA表达量作为横坐标,以MIG6 mRNA表达量作为纵坐标,制作线性相关图;用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在PLC/PRF5细胞中下调MEF2D和MIG6后,通过细胞增殖与毒性测定试剂盒(7Sea-Cell Counting Kit,7Sea-CCK)和细胞划痕法检测肝癌细胞增殖和迁移能力;用siRNA在PCL/PRF5细胞中下调MEF2D、用MEF2D过表达质粒在SMMC7721细胞系中上调MEF2D后,通过蛋白印迹检测法分别检测MEF2D和MIG6的蛋白质表达水平。根据实验,共分为阴性对照(negative control,NC)组、siMIG6组、siMEF2D组、si2M(同时下调MIG6和MEF2D)组、空白对照组、空载对照组、MEF2D组7组。结果肝癌细胞hcclm3、SMMC7721、PLC/PRF5、HepG2、7703、Huh7、Bel-7402中MEF2D mRNA、MIG6 mRNA表达水平呈现负相关关系(r=-0.78)。细胞增殖实验,24 h和48 h时,下调MIG6或MEF2D后,与NC组比较,siMIG6组或siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化;同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力无显著变化72 h时,各组间方差分析差异有统计学意义(F=20.68、P<0.01);下调MIG6后,与NC组比较,siMIG6组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著增强[光密度(optical density,OD)值为3.73±0.18,t=3.84、P=0.02];下调MEF2D后,与NC组比较,siMEF2D组中PLC/PRF5细胞增殖能力显著下降(OD=1.79±0.22,t=3.95、P=0.02);同时下调MIG6和MEF2D后,与siMEF2D组比较,si2M组中PLC/PRF5细胞增殖能力增强(OD=2.99±0.03,t=4.83、P<0.01)细胞划痕实验,各组间方差分析差异有统计学意义(F=42.27、P<0.01);48 h时,下调MIG6后,与NC组比较,siMIG6组中PLC/PRF5细胞迁移能力显著增强[细胞迁移率为
- 陈潇林志娟李孟鹏陈超王建勋刘佳李培峰
- 关键词：肝细胞癌细胞迁移
- 长链非编码RNA punisher对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制被引量：2
- 2016年
- 目的探究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)punisher与动脉粥样硬化的关系及其对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 12只健康纯种雄性8周龄载脂蛋白E(apolipoprotein E,Apo E)基因敲除小鼠(Apo E-/-小鼠),通过高脂饲喂制作动脉粥样硬化模型小鼠(模型组);12只健康C57BL/6J小鼠饲以基础饲料为对照组;人体血管平滑肌细胞系根据转染情况分为小干扰-punisher组和阴性对照(negative control,NC)组。通过荧光定量聚合酶链反应测定模型组与对照组小鼠主动脉弓的punisher表达。通过合成punisher的小干扰RNA作为反向对照抑制punisher在人血管平滑肌细胞中的表达,应用实时荧光定量聚合酶链反应验证punisher表达情况;分别采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、划痕实验及流式细胞术检测抑制punisher表达对人血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响;蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell leukemia-lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase3)、caspase8、p-p38、p53凋亡相关蛋白的表达。结果 1血脂4项及血管苏木精-伊红染色证明造模成功。荧光定量聚合酶链反应显示,动脉粥样硬化模型组小鼠血管punisher表达高于对照组(P<0.05);2CCK-8检测显示小干扰-punisher组的光密度值在转染36 h之后低于NC组(t36=2.683、P<0.05,t48=2.554、P<0.05);划痕实验显示小干扰-punisher组细胞迁移低于NC组(t=3.136、P<0.05);3流式细胞术显示,小干扰-punisher组中凋亡细胞数占比多于NC组(22.6%和11.7%,χ2=4.245、P<0.05);4蛋白印迹法显示小干扰-punisher组Bcl-2、caspase3-30×103、p53蛋白表达水平明显低于NC组(t分别为9.546、5.647、5.42,P<0.05),caspase3-17×103蛋白表达水平高于NC组(t=4.892、P<0.05)。结论沉默lncRNA punisher可以促进血管平滑肌细胞的凋亡并抑制其增殖。
- 李孟鹏于涛陈潇唐宁宁杨艳艳张银凤王昆王建勋李培峰
- 关键词：长链非编码RNA动脉粥样硬化细胞凋亡血管平滑肌细胞
