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湛江地区对虾养殖模式调查与分析(上)被引量：2: 2017年; 湛江地处我国大陆最南端，得天独厚的环境造就了湛江水产行业的地理优势。从20世纪80年代开始至今，湛江近30年的养殖历史更是奠定了其作为对虾产业的龙头地位，以高位池为代表的南美白对虾养殖模式数年来产量领跑全国，使其一度成为行业标杆.; 牛金中武沛文宋大伟常云胜蔡佳朱晓闻; 关键词：对虾养殖养殖模式水产行业养殖历史虾产业

罗非鱼唾液酸黏附素基因克隆及组织表达被引量：2: 2020年; 【目的】研究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)唾液酸黏附素(sialoahesin)在健康鱼及感染无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)后的组织表达,探讨其在免疫反应中的作用。【方法】根据NCBI上公布的罗非鱼唾液酸黏附素基因(Gen Bank登录号LOC102078335,记为On-sialoahesin)克隆On-sialoahesin开放阅读框序列,采用实时荧光定量PCR技术检测On-sialoahesin在健康罗非鱼脾脏、头肾、肠道、皮肤、鳃、脑、肌肉、肝、胸腺、脾、外周血中的分布,以及无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)刺激后的表达。【结果与结论】On-sialoahesin基因编码区1617bp,编码538个氨基酸,理论分子质量59.44ku,等电点6.57。On-sialoahesin含有3个IG结构域和1个IGC2,是IG结构域蛋白质超级家族成员。多序列比对发现,On-sialoahesin与其他物种sialoahesin氨基酸序列同源性介于36.81%~92.94%,且与奈里朴丽鱼(Haplochromis nyererei)同源性最高。系统进化分析发现,On-sialoahesin与慈鲷科鱼的sialoahesin聚为一支。On-sialoahesin在健康罗非鱼各组织中均有表达,在头肾和外周血中表达量最高,其余组织表达量相对较低。经无乳链球菌刺激后,On-sialoahesin表达量在10个组织中均呈现显著的时序性。; 牛继敏牛金中黄瑜黄瑜王蓓简纪常; 关键词：尼罗罗非鱼基因克隆无乳链球菌

尼罗罗非鱼的Galectin-8基因的原核表达及条件优化被引量：2: 2020年; Galectin-8属于S型凝集素,是一种内源性凝集素,具有高亲力,含β-半乳糖苷,可识别重要的病原分子[1]。该蛋白质有2个功能结构域,均提供该家族中其他蛋白质类似的保守序列[2]。该研究基于尼罗罗非鱼Galectin-8 NCBI上发表的基因序列,利用primer5.0设计1对引物,构建尼罗罗非鱼Galectin-8基因的原核表达载体,将重组后的质粒pGEX-4T-1-Galectin-8导入大肠杆菌中,通过PCR、连接、转化等,进行原核表达。对影响因素进行条件优化,使用优化后的浓度、时间、温度条件表达Galectin-8重组蛋白能得到最优表达量。Western blot检测纯化后的重组蛋白,结果显示,重组蛋白可以很好地结合GST-Tag标签的单克隆抗体,实验进一步证明罗非鱼Galectin-8的重组蛋白被成功表达,为罗非鱼Galectin-8后续相关功能的研究奠定了基础。; 牛继敏牛金中黄瑜黄瑜简纪常鲁义善; 关键词：尼罗罗非鱼原核表达 WESTERN BLOTTING

尼罗罗非鱼补体3基因片段的原核表达及条件优化: [目的]补体3 (Complement3, C3)作为补体系统的中心效应分子,在罗非鱼的抗病感染中发挥着重要作用.[方法]根据NCBI中已公布罗非鱼补体C3的基因序列,选取C3基因片段,设计一对带有酶切位点的特异性引物,...; 牛金中黄瑜汤菊芬鲁义善汪志文郑琦蔡佳简纪常; 关键词：尼罗罗非鱼补体3 原核表达

尼罗罗非鱼Galectin-related protein B基因的原核表达与条件优化: 2020年; Galectin-related protein B是一种缺乏半乳糖苷结合活性的半乳糖凝集素相关蛋白B。基于NCBI公布的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)Galectin-related protein B基因序列设计带酶切位点引物,构建原核表达载体pET-28a-GRPB,将重组质粒导入大肠杆菌,诱导重组质粒的蛋白表达,并对蛋白表达条件进行优化。结果表明:在28℃条件下,IPTG浓度为0.20mmol/L,诱导6h时,诱导重组蛋白的效果最佳;经Western-blot免疫印迹显示,纯化后的重组蛋白能与带HIS标签的单抗特异结合,条带单一,进一步证明该重组蛋白为Galec⁃tin-related protein B蛋白。; 黄永雄牛金中杨世平杨世平; 关键词：尼罗罗非鱼原核表达

尼罗罗非鱼Galectin-3基因的原核表达与条件优化被引量：6: 2019年; 【目的】对Galectin-3蛋白进行纯化,优化诱导相关表达条件,为大量获取罗非鱼Galectin-3蛋白提供方案。【方法】根据NCBI上已公布的罗非鱼(Oreochromis mossambicus)Galectin-3基因序列,设计多对带EcoRI和Xhol酶切位点的引物,筛选出良性扩增引物,对罗非鱼cDNA经进行聚合酶链式反应(PCR)扩增、限制性快切酶双酶切、T4连接酶连接等步骤,构建罗非鱼Galectin-3基因的原核表达质粒pGEX-4T-Galectin-3,将重组质粒导入大肠杆菌BL21中,进行Galectin-3重组蛋白的表达。并比较不同的诱导温度、诱导时间、IPTG浓度条件下的表达效果,对Galectin-3蛋白表达最优条件进行筛选。【结果】构建了罗非鱼Galectin-3原核表达质粒,进行Galectin-3重组蛋白后发现37℃下,0.4mmol/L浓度的IPTG诱导5h即可诱导Galectin-3重组蛋白高效表达。免疫印迹结果显示,经蛋白纯化柱纯化后的pGEX-4T-Galectin-3重组蛋白可与GST-Tag单克隆抗体发生特异性反应,进而表明表达的重组蛋白是罗非鱼的Galectin-3蛋白。【结论】本研究成功构建了罗非鱼Galectin-3基因的原核表达载体,并确定了Galectin-3融合蛋白最适的表达条件:37℃下,0.4mmol/L浓度的IPTG诱导5h。; 罗国玲牛金中黄瑜汤菊芬蔡双虎简纪常; 关键词：尼罗罗非鱼半乳糖凝集素-3 原核表达

湛江地区对虾养殖模式调查与分析(下)被引量：1: 2017年; 三、湛江对虾养殖策略分析目前湛江地区对虾的生产、销售、运输、加工、出口、质检等诸多方面都出现不规范、不合格的情况,严重限制着湛江对虾产业的发展,而解决这些问题绝非一日之功,更非单方面的个人、公司或是政府就可以解决的,行业的升级转型迫在眉睫,而这一过程需要的是养殖户、企业、行业以及政府一起行动起来,经过长时间努力才能实现,因此,做出如下建议。; 牛金中武沛文宋大伟常云胜蔡佳朱晓闻; 关键词：对虾养殖养殖模式虾产业养殖户单方

尼罗罗非鱼NCCRP-1基因的原核表达及条件优化被引量：8: 2018年; 非特异性细胞毒性细胞受体蛋白（non-specific cytotoxic cell receptor protein 1,NCCRP-1）是一种在鱼类非特异性细胞毒性细胞（non-specific cytotoxic cell,NCC）活化过程起到关键作用的受体蛋白,也是NCC表面的一种分子标记。本研究根据NCBI上已公布的罗非鱼NCCRP-1基因序列,设计一对带酶切位点的引物,经PCR扩增、酶切、连接等步骤,构建罗非鱼NCCRP-1基因的原核表达质粒p GEX-NCCRP-1,将重组质粒导入至大肠杆菌BL21中,成功表达了NCCRP-1重组蛋白。对影响NCCRP-1表达的IPTG浓度、诱导时间、诱导温度等因素进行了优化,发现在20℃下,采用0.2 mmo I/L IPTG诱导5 h,可以诱导NCCRP-1可溶性重组蛋白的高效表达。而免疫印迹结果显示,经纯化后的重组蛋白可与GST-Tag单克隆抗体发生特异性反应,进而表明表达的重组蛋白是罗非鱼NCCRP-1蛋白。该结果为后续罗非鱼NCCRP-1的单克隆抗体制备以及NCCRP-1相关的功能研究奠定了重要基础。; 黄瑜牛金中汤菊芬鲁义善汪志文郑琦蔡佳简纪常; 关键词：尼罗罗非鱼原核表达 WESTERN BLOTTING

普通高等院校硕士研究生就业质量调查与分析——以广东海洋大学为例被引量：1: 2017年; 通过分析广东海洋大学近7年来硕士研究生的就业情况,发现当前研究生就业总体呈现良好态势,但仍存在诸多问题,例如,研究生培养模式不够健全、就业指导不够完善、研究生就业心态与实际脱轨、就业质量不尽人意、用人单位对人才引进设置各种门槛等问题。要改善研究生就业困局需要用人单位、培养单位以及就业主体等多方面的共同努力,如:夯实政策引导、打破就业限制、创新培养模式、加强就业指导、提升自我素质等。; 朱晓闻牛金中崔雪凡; 关键词：就业现状

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牛金中

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