目的检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法利用实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p相对表达;构建miR-505-3p过表达、c-MYC过表达和敲低表达细胞系,通过CCK-8法,克隆斑点形成实验、Transwell侵袭/迁移实验检测miR-505-3p和c-MYC对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响;裸鼠皮下成瘤实验验证miR-505-3p对裸鼠肿瘤生长的影响;双荧光素报告实验验证miR-505-3p和c-MYC的靶向关系,并探究其两者间的表达调控作用;Western blot检测miR-505-3p和c-MYC对Wnt/β-catenin通路关键蛋白表达的影响。结果临床胃癌组织中miR-505-3p表达水平较正常癌旁组织显著下调(0.92±0.37 vs 1.74±0.59),差异有统计学意义(t=3.723,P<0.01)。胃癌细胞系MGC803(1.12±0.35),AZ521(2.31±0.24)和HGC-27(2.28±0.43)中miR-505-3p相对表达较人正常胃黏膜细胞系GES1(4.62±0.79)明显降低,差异有统计学意义(F=26.109,P<0.001)。miR-505-3p过表达组细胞增殖(0.92±0.27)、克隆形成(51.67±21.75)、迁移(43.25±15.47)、侵袭(38.53±14.76)能力较NC组(1.85±0.34,128.36±36.42,100.08±2.12,100.12±1.94)明显降低,差异均有统计学意义(t=3.131~7.166,均P<0.05);miR-505-3p过表达抑制了裸鼠生长。c-MYC是miR-505-3p的靶基因,miR-505-3p靶向负调控c-MYC。c-MYC过表达组细胞增殖(2.72±0.68)、迁移(147.15±20.36)、侵袭(145.46±22.73)能力较NC组(1.85±0.34,100.08±2.12,100.12±1.94)明显增高,差异均有统计学意义(t=2.455~4.456,均P<0.05);c-MYC过表达可逆转miR-505-3p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-505-3p过表达组Wnt(0.46±0.07),β-catenin(0.50±0.05)蛋白相对表达水平明显低于NC组(1.01±0.02,1.02±0.02),差异均有统计学意义(t=8.139,7.342,均P<0.001);过表达c-MYC能够逆转miR-505-3p对Wnt和β-catenin蛋�
目的 检测环状核糖核酸(circular RNA,cicrRNA)hsa_circ_0006950在胰腺癌(pancreatic cancer,PC)中的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖、迁移的影响及其潜在分子作用机制。方法 利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa_circ_0006950在胰腺癌组织及细胞中的相对表达水平;转染hsa_circ_0006950干扰载体构建低表达细胞系,通过CCK-8实验、克隆斑点形成实验和Transwell实验检测hsa_circ_0006950对胰腺癌细胞增殖、克隆形成及迁移的影响;利用生物信息学网站预测hsa_circ_0006950的miRNA分子靶标及其调控网络(hsa_circ_0006950-miR-124-3p-EZH2),双荧光素酶基因报告实验验证hsa_circ_0006950和miR-124-3p,miR-124-3p和EZH2的靶向结合关系;转染过表达/干扰miR-124-3p和过表达EZH2细胞系,探究miR-124-3p和EZH2及hsa_circ_0006950调控miR-124-3p/EZH2轴对胰腺癌细胞克隆形成及迁移的影响。结果 胰腺癌组织中hsa_circ_0006950表达明显高于癌旁正常组织(3.57±0.52 vs 1.01±0.03),差异有统计学意义(t=21.980,P<0.001)。胰腺癌细胞PANC-1(7.51±0.62),AsPC-1(5.26±0.45),Capan-2(3.69±0.38),SW1990(3.25±0.32)and BXPC-3(3.86±0.35)中hsa_circ_0006950相对表达明显高于正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7(1.00±0.01)中的表达,差异有统计学意义(F=88.585,P<0.001)。与对照组相比,干扰hsa_circ_0006950表达组细胞增殖能力(0.79±0.17 vs 1.83±0.42),克隆形成率(51.42%±5.84%vs 78.76%±13.65%)和迁移数目(104.64±24.73 vs 218.21±31.57)明显降低,差异均有统计学意义(t=3.976,3.190,4.905,P=0.016,0.033,0.008)。mi R-124-3p是hsa_circ_0006950的下游靶基因,EZH2是miR-124-3p的直接靶标。hsa_circ_0006950靶向负调控miR-124-3p,miR-124-3p靶向负调控EZH2。与对照组相比,过表达miR-124-3p组PC细胞增殖(0.21±0.16 vs1.75±0.47),克隆形成率(47.85%±4.13%vs 81.54%±2.33%)和细胞迁移数目(118.74±24.65 vs 202.36±31.45)明显降低,差异均有统计学意义(t=5.378,14.317,3.390,均P<0.001);共转染过表达EZH2后,m
