张贤宇
- 作品数：5 被引量：33H指数：5
- 供职机构：西南民族大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家级星火计划四川省科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 绵羊肺炎支原体p128基因序列分析及原核表达被引量：6
- 2015年
- 为进一步探究绵羊肺炎支原体P128蛋白的相关功能,在进行生物信息学分析的基础上,对编码p128的部分基因片段进行了PCR扩增、克隆和原核表达,并采用Western-blot方法对其免疫原性进行了分析。结果显示,p128基因与猪肺炎支原体黏附素基因p146高度同源;克隆基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功获得表达,重组蛋白以包涵体的形式存在;经纯化的重组蛋白与抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生结合反应,表明P128蛋白是良好的免疫原。研究结果为进一步分析其功能及绵羊肺炎支原体血清学诊断技术的建立提供了有用的信息。
- 冯旭飞刀筱芳张贤宇李定霏杨发龙
- 关键词：绵羊肺炎支原体原核表达
- 绵羊肺炎支原体P113蛋白C端重复区的表达及其免疫原性被引量：11
- 2013年
- 为进一步研究绵羊肺炎支原体P113蛋白的结构与功能,在进行生物信息学分析的基础上,对编码其C端重复区的基因片段进行了PCR扩增、克隆和原核表达,并采用Western-blotting方法对P113蛋白的免疫原性进行了分析。结果显示,P113蛋白与猪肺炎支原体黏附素P97蛋白高度同源,并具有相似的C端重复区;该区域在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功获得表达,重组蛋白以可溶性的形式存在;经纯化的重组蛋白与抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生结合反应,表明P113蛋白是良好的免疫原。
- 杨发龙张贤宇汤承岳华
- 关键词：绵羊肺炎支原体原核表达免疫原性
- 绵羊肺炎支原体P113蛋白N端原核表达及其抗原性分析被引量：10
- 2013年
- 绵羊肺炎支原体可感染绵羊及山羊,并导致非典型肺炎的发生。P113蛋白是绵羊肺炎支原体推测的粘附素,为进一步研究P113蛋白的功能,本试验对其N端1～231位氨基酸的片段进行了原核表达,并采用Western blot方法对P113蛋白免疫原性进行了分析。结果显示,重组蛋白以包涵体的形式在Rosetta(DE3)工程菌中成功获得表达;经纯化的重组蛋白与抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生特异性结合反应,表明P113蛋白是良好的免疫原。
- 张贤宇杨发龙冯旭飞王成龙
- 关键词：绵羊肺炎支原体原核表达抗原性
- 绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用被引量：11
- 2013年
- 根据绵羊肺炎支原体hsp70基因和多杀性巴氏杆菌sp6基因分别设计引物,建立了绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌的双重PCR检测方法,优化条件后进行特异性和敏感性评价,并对160份临床样本进行了检测。结果显示,绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌引物的最佳终浓度分别为30pmol/L和10pmol/L。该方法的特异性较好,对其他无关病原不检出。对绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌的检测下限分别为4.4pg和22pg,与独立PCR的敏感性相同。临床样本的检测结果显示,该方法对绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌的检出率分别为50.6%和47.5%。结果表明,本研究建立的双重PCR方法具有特异性好、敏感性高等特点,为临床上绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌混合感染的快速检测、鉴定以及流行病学调查提供了有用的工具。
- 冯旭飞刘霜张贤宇王成龙匡学谦杨发龙汤承王永
- 关键词：绵羊肺炎支原体多杀性巴氏杆菌双重PCR
- 基于p113基因的绵羊肺炎支原体PCR检测方法的建立及应用被引量：7
- 2013年
- 为建立一种特异、敏感的绵羊肺炎支原体PCR检测技术,根据绵羊肺炎支原体p113基因设计引物,并对其特异性进行了评价,同时,对所建立的PCR方法的敏感性和临床样本中绵羊肺炎支原体的检出率进行了分析,并与现有的基于16SrRNA的PCR方法进行了比较。结果显示,该方法能特异性扩增绵羊肺炎支原体参考菌株Y-98及临床分离株,对其他羊的致病性支原体和无关病原不检出;检测灵敏性为44fg,为现有的基于16SrRNA基因的PCR技术的1 000倍;对临床采集的肺组织样本和鼻腔拭子中绵羊肺炎支原体的检出率明显高于基于16SrRNA的PCR方法。研究结果表明,所建立的基于p113基因的PCR技术具有特异、敏感等特点,为绵羊肺炎支原体的检测、鉴定以及流行病学调查提供了有用的工具。
- 冯旭飞张贤宇王成龙杨发龙
- 关键词：绵羊肺炎支原体聚合酶链反应
