赵静
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
- 供职机构：陕西师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的双表达hIL-12和hIFN-α2a新型腺病毒载体的构建及体外实验研究
- 2013年
- 目的:构建经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的双表达hIL-12和hIFN-α2a的新型腺病毒载体并进行体外实验研究。方法:采用常规基因克隆和同源重组技术,构建在E3区携带hIL-12B(p40)和在纤维蛋白及E4区之间携带hIFN-α2a及eGFP表达框的经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的嵌合型腺病毒骨架质粒载体pAd5/35-Backbone.E3-CMV-hIL-12B(p40)/E4-hIFN-α2a-eGFP。此外,采用分子克隆手段构建携带hIL-12A(p35)的腺病毒E1穿梭载体pAd5-E1-CMV-hIL-12A(p35)。PCR法鉴定腺病毒骨架载体及穿梭载体质粒。将上述所获得的两种质粒载体经过PacI线性化后共转染HEK293细胞包装新型病毒载体。将纯化的腺病毒感染人恶性胶质瘤细胞U87MG,48小时后,荧光显微镜下观察报告基因eGFP的表达,RT-PCR检测hIL-12及hIFN-α2a目的基因的表达。结果:PCR法检测到所构建的腺病毒骨架载体及穿梭载体质粒成功携带所需的目的基因。成功包装并纯化获得新型腺病毒载体pAd5/35.E1-CMV-hIL-12A(p35)/E3-CMV-hIL-12B(p40)/E4-hIFN-α2a-eGFP。体外感染U87MG细胞,48h后荧光显微镜下可以观察到报告基因eGFP的表达,RT-PCR可以检测到hIL-12及hIFN-α2a目的基因的表达。结论:体外实验结果表明,成功制备的经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的双表达hIL-12和hIFN-α2a新型腺病毒载体,为进一步探讨其在恶性脑胶质瘤动物模型中的体内治疗研究奠定了基础。
- 赵静李星王顺娟王菲王东阳夏海滨
- An adenoviral vector carrying soluble TRAIL regulated by a novel tight Tet-on inducible expression system
- Adenovirus was a popular vector for gene therapy,and adenovirus based tumor gene ther-apy was a important meth...
- 陈皓赵静王顺娟王菲夏海滨
- 文献传递
- 针对人CD133分子两个胞外段的单链抗体的克隆与表达
- 2013年
- 目的:克隆与表达针对人CD133分子两个不同胞外段的单链抗体。方法:提取杂交瘤细胞总mR-NA,利用简并引物PCR获得针对人CD133分子两个胞外段抗体可变区基因,再通过重叠延伸PCR的方法,用一段柔性linker(GGGGS)3将其相连,得到CD133 Ex-1 scFv和CD133 Ex-2 scFv基因。随后,将其克隆至携带6×His标签的原核表达载体pRSET-B中,然后对其进行了表达和鉴定研究。结果:获得分别针对CD133不同胞外段的单链抗体基因,并成功获得针对CD133两个胞外段的单链抗体,但该单链抗体主要以不溶性包涵体形式存在于胞内。包涵体蛋白经复性和镍柱亲和层析纯化后,得到纯度较高的单链抗体,通过蛋白质印迹实验证实,融合蛋白确实为单链抗体。结论:成功制备出针对CD133两个胞外段的单链抗体。该研究结果为其功能研究及其在肿瘤靶向治疗研究中奠定了物质基础。
- 王菲赵静王顺娟夏海滨
- 关键词：CD133单链抗体原核表达包涵体
- Rescue the failed Half-ZFN by a sensitive mammalian Cell-Based luciferase reporter system
- ZFN technology is a powerful research tool and has been used for genome editing in cells lines,animals and pla...
- 张伟锋夏海滨孟文鹏赵静王顺娟
- 文献传递
