刘双
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华东理工大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家高技术研究发展计划国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 北冰洋海单胞菌β-D-半乳糖苷酶的异源表达及酶学特性研究被引量：1
- 2015年
- 初筛表明,一株分离自北极加拿大海盆海冰心芯样品的海单胞菌（Marinomonas sp.BSi20584）具有较高的β-D-半乳糖苷酶活性,为了研究清楚其酶学性质,将经hiTAIL-PCR扩增得到的β-D-半乳糖苷酶基因（galt）与pET-28a（＋）原核表达载体结合,转入大肠杆菌BL21（DE3）。经IPTG诱导后对重组β-D-半乳糖苷酶（GALT）的表达条件进行了优化,采用金属螯合亲和层析技术制备纯酶,并对重组GALT的酶学性质进行了研究。结果显示,重组酶的最适诱导温度为20℃,在IPTG浓度为0.07mmol/L时诱导22h后,酶活和产酶量达到最大值。GALT单体分子量约为6.6×104 g/mol,天然酶为同源三聚体。GALT最适作用温度为35℃,其热稳定性较好,在60℃处理5h后,仍可保持50%以上的相对活性。GALT的最适作用pH为9.0,在pH为6.0~11.0范围内比较稳定。GALT的最适NaCl浓度为0.5mol/L,对盐度具有较高的耐受性。Mg2＋、K＋、DTT和EDTA对酶活不具有显著影响,而Mn2＋、Fe2＋对酶活有促进作用,Zn2＋和L-谷胱甘肽对酶活有抑制作用。GALT对Galβ1-4GlcNAc具有水解作用,而对Galβ1-3GalNAc和Galβ1-3GlcNAc糖苷键型没有水解能力。本研究实现了海单胞菌属菌株的β-D-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌系统中的高效表达,并系统研究了重组酶的酶学特性,为后续开展该酶的代谢适应性和潜在应用研究提供详细的酶学数据基础。
- 孙茜廖丽丁海涛刘双陈波
- 关键词：Β-D-半乳糖苷酶异源表达酶学特性
- 南极长城湾海绵共附生可培养细菌多样性研究被引量：2
- 2017年
- 研究了南极长城湾潮间带海绵共附生可培养细菌多样性及其疑似新种应用有利于放线菌生长的选择性培养基ISP2从长城湾海绵动物组织中分离出120株细菌,基于这些菌株的16S rRNA基因序列开展系统发育分析。结果显示,所分离菌株隶属于三个细菌门五大类群的11个目、22个属,表明长城湾海绵共附生细菌的种属分布较广、多样性非常高。其中红球菌Rhodococcus属占优势,另外包含α-变形菌纲Puniceibacterium属、放线菌门Aeromicrobium属、β-变形菌纲Limnobacter属等罕见种属。16S rRNA基因序列同源性比对分析表明,菌株HM145与Rhodococcus属模式种Rhodococcus qingshengii具有最高序列相似性97.0%,菌株HQ09与Puniceibacterium antarcticum有96.9%的最高相似性,为2株疑似新种,其分类地位和种水平上的分类学研究有待开展多相分类进行鉴定。
- 刘欢俞勇廖丽刘双刘双
- 关键词：潮间带多样性
