- 大鼠肝叶切除后肝细胞再生相关蛋白的蛋白质组学分析
- 2008年
- 目的通过对肝叶切除后6、24 h的肝细胞与正常肝细胞的蛋白质组分析,筛选出与肝细胞再生相关的蛋白质。方法选择雄性SD大鼠9只(体质量200 g),分3组,6 h组、24 h组和对照组,每组3只,建立大鼠70%肝叶切除模型。6 h组在肝叶切除后6 h分离肝细胞,24 h组在肝叶切除后24 h分离肝细胞,对照组为正常肝细胞。裂解液裂解细胞提取总蛋白,运用蛋白组学相关技术分析3组细胞的蛋白组学差异。结果总共得到47个差异蛋白质点,鉴定出42个。结论我们的数据显示:24 h组与对照组和6 h组都有重叠,而6 h组和对照组重叠部分较少,推测其可能的原因为6 h组肝细胞处于肝再生的启动阶段,与对照组差异较大,而24 h组,肝再生已启动,各种维持肝细胞正常功能的蛋白质也开始表达。
- 陈胤陈平何中林王晓枫还勇为
- 关键词：肝再生二维电泳肽质量指纹谱
- 染色体结构维持蛋白4在原发性肝癌组织中的表达及其临床意义被引量：2
- 2010年
- 目的研究染色体结构维持蛋白4(SMC4)在原发性肝癌组织中的表达及其临床意义。方法收集2009年9月-2010年1月原发性肝癌组织和正常肝脏组织各36份,原发性肝癌患者和健康人血清各36份,通过免疫组化、酶联免疫吸附实验分别检测原发性肝癌组织、正常肝脏组织及血清中SMC4蛋白的表达情况,分析检测结果及其与临床参数之间的关系。结果 SMC4在原发性肝癌组织中呈较强染色,其中88.9%(32/36)的肿瘤组织表达阳性,仅11.1%(4/36)的肿瘤组织表达呈阴性,而在正常肝脏组织中未见其染色反应,阴性表达率100%(36/36)。原发性肝癌患者血清中SMC4浓度(255.75±26.59ng/L)远高于健康人(205.89±18.55ng/L,P<0.05)。统计学分析显示,SMC4的表达与患者肿瘤组织的细胞分化、TNM分期及血管浸润相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别无关(P>0.05)。结论 SMC4在原发性肝癌患者中表达增高,测定其水平有助于原发性肝癌的诊断,并可作为判断肿瘤恶性程度和预后的重要指标。
- 周波陈平袁涛刘宏鸣刘孟刚王晓枫
- 关键词：肝肿瘤免疫组织化学酶联免疫吸附测定
- 慢病毒介导的大鼠肝BRL-3A细胞Tmub1基因沉默及稳定感染细胞系的建立
- 2012年
- 目的:构建Tmub1基因慢病毒干扰载体,建立稳定转染细胞系,检测大鼠肝BRL-3A细胞中Tmub1基因表达的干扰效果。方法:设计并构建4对针对大鼠Tmub1基因的特异性shRNA干扰质粒,酶切鉴定、DNA测序所得质粒。将由pRSV-Rev、pMDLg-pRRE、pMD2G和pll3.7干扰质粒组成的包装系统共转染293T细胞,产生慢病毒。所得慢病毒感染大鼠正常肝细胞BRL-3A,Western Blot检测不同靶点RNAi后Tmub1蛋白表达情况,确定有效靶点。针对有效靶点大量包装慢病毒。测定病毒滴度并以最适感染复数(multiplicity of infection,MOI)感染BRL-3A细胞后,G418抗生素筛选稳定感染细胞系BRL-3A/256。RT-PCR和Western Blot检测各组细胞Tmub1 mRNA和蛋白质的表达差异。结果:结果显示Tmub1 RNAi慢病毒载体构建成功,C0020Sh2-Hops-256干扰靶点RNAi效果最强。成功包装Tmub1基因RNAi慢病毒,测定病毒滴度为2.3×108TU/ml,对293T细胞的最适感染复数为60。成功建立Tmub1 RNAi慢病毒载体稳定感染细胞系BRL-3A/256,且在该细胞系中Tmub1 mRNA和蛋白质表达明显降低。结论:成功构建Tmub1 RNAi慢病毒载体,有效干扰BRL-3A细胞中Tmub1 mRNA和蛋白表达;成功筛选出Tmub1RNAi慢病毒稳定感染细胞系BRL-3A/256。
- 王晓枫刘孟刚刘宏鸣周波王宝林陈红旭陈平
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体
